胡永倩 ，趙景利，崔基賢，程淑晶，王德強(qiáng)，趙怡雯，楊 卓，蒼真?zhèn)?，王承功，于漢勛

（1.大連市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧大連 116037；2.長?？h動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧長海 116500；3.遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧省動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究院，遼寧沈陽 110164）

奶牛副結(jié)核病是由副結(jié)核分枝桿菌（M.aviumsubsp.paratuberculosis，MAP）引起的慢性消化道疾病，又稱副結(jié)核性腸炎[1]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為須通報(bào)動(dòng)物疫病[2]。本病以頑固性腹瀉、漸進(jìn)性消瘦、腸黏膜增厚并形成皺褶和病牛出現(xiàn)“豌豆湯”樣稀便為特征，潛伏期可長達(dá)1～2年。由于本病潛伏期長，病程也長，并且在臨床上很容易被誤診為其他細(xì)菌類腹瀉性疾病，使得病牛得不到及時(shí)有效的醫(yī)治，并且一旦出現(xiàn)臨床癥狀很難醫(yī)治。由于病牛反復(fù)腹瀉，導(dǎo)致體重下降和產(chǎn)奶量降低，對奶牛場戶造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。為掌握大連市奶牛場副結(jié)核病流行狀況，初步掌握該地區(qū)奶牛場從業(yè)人員對副結(jié)核病防控知識(shí)的了解情況和行為特點(diǎn)，對大連市11家奶牛場的奶牛副結(jié)核病血清流行率展開了調(diào)查。

1 方法

1.1 抽樣設(shè)計(jì)

1.1.1 目標(biāo)群和研究群大連市現(xiàn)有10個(gè)涉農(nóng)區(qū)、市、縣，共有奶牛規(guī)模養(yǎng)殖場11家，主要分布在瓦房店、普蘭店和金普新區(qū)。奶牛養(yǎng)殖模式全部為規(guī)模飼養(yǎng)，共存欄8 708頭。本次調(diào)查的目標(biāo)群為大連市全部存欄奶牛，研究群為全市11個(gè)奶牛場的奶牛。

1.1.2 樣本量計(jì)算采用預(yù)估流行率的抽樣策略[4]，設(shè)定95%的置信水平、4%的可接受誤差、16%的預(yù)期流行率，應(yīng)用Win Episcope 2.0軟件分別計(jì)算每個(gè)奶牛場的抽樣量。每場實(shí)際抽樣數(shù)量根據(jù)場主需求和現(xiàn)場實(shí)際進(jìn)行調(diào)整。

1.1.3 抽樣方法群內(nèi)按系統(tǒng)隨機(jī)抽樣。根據(jù)每場抽樣量，為每個(gè)奶牛場計(jì)算抽樣間隔，按牛舍編號(hào)順序，從1號(hào)舍進(jìn)門處左側(cè)第1頭奶牛開始，嚴(yán)格按照抽樣間隔抽取樣本。

1.1.4 真實(shí)血清流行率計(jì)算將基于檢測結(jié)果計(jì)算的表觀流行率帶入公式（1），計(jì)算大連市每個(gè)奶牛場的個(gè)體真實(shí)血清流行率。

式中，TP 為真實(shí)流行率，AP 為表觀流行率，Se 為試驗(yàn)敏感性，Sp 為試驗(yàn)特異性。根據(jù)公式（2）計(jì)算95%CI，根據(jù)公式（3）計(jì)算群敏感性。

式中，HSe 為群敏感性，Hap 為表觀群流行率，n為樣本量。根據(jù)公式（4）計(jì)算群特異性群特異性。

式中，HSp 為群特異性，Sp 為試驗(yàn)特異性，n為樣本量。根據(jù)公式（5）計(jì)算真實(shí)群流行率（THp）。

1.2 實(shí)驗(yàn)室檢測

1.2.1 檢測方法將采集的全血分離血清，采用ELISA 方法進(jìn)行抗體檢測。

1.2.2 試劑 副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測試劑盒（Mycobacterium ParatuberculosisAntibody Test Kit）：IDEXX 公司產(chǎn)品，批號(hào)為6116，試驗(yàn)敏感性（Se）為78%，特異性（Sp）為99%。

1.3 個(gè)體感染有關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素分析

設(shè)計(jì)“樣品信息采集表”，在采樣時(shí)填寫。采集表內(nèi)容包括，樣品來源奶牛的年齡、胎次、臨床癥狀等。以檢測結(jié)果為依據(jù)，應(yīng)用SPSS 20.0軟件，以單因素分析方法，計(jì)算患病風(fēng)險(xiǎn)比（relative risk，RR），識(shí)別潛在的奶牛副結(jié)核病感染風(fēng)險(xiǎn)因素。

1.4 從業(yè)人員“知、信、行”初探

設(shè)計(jì)“奶牛副結(jié)核病現(xiàn)場問卷調(diào)查表”。為了解大連市奶牛養(yǎng)殖場戶對奶牛副結(jié)核病相關(guān)知識(shí)的掌握情況和防控意愿，設(shè)計(jì)了6個(gè)問題，包括“是否聽說過奶牛副結(jié)核病，是否了解奶牛副結(jié)核病在生產(chǎn)中危害程度，是否了解奶牛副結(jié)核病的臨床癥狀，是否知道奶牛副結(jié)核病的唯一感染途徑是消化道，是否應(yīng)該做奶牛副結(jié)核病的防控工作，是否有必要做奶牛副結(jié)核病的檢測工作”。采樣的同時(shí)開展問卷調(diào)查，用Microsoft Office 2010匯總分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 血清流行率

大連市各奶牛場的奶牛副結(jié)核病流行情況有所不同，平均場群表觀流行率為90.91%（10/11），對每個(gè)場戶分別計(jì)算群敏感性、群特異性后取平均值，計(jì)算出場群真實(shí)流行率為100%，其中N11場為陰性，N9場奶牛全部為陽性，剩余9個(gè)奶牛場的奶牛均有不同程度的感染，經(jīng)Fisher 確切檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)差異不顯著（P＞0.05）。大連市奶牛副結(jié)核病個(gè)體血清陽性率為14.20%，考慮到每個(gè)場的存欄比例，對檢測陽性率進(jìn)行間接標(biāo)準(zhǔn)化，計(jì)算得出標(biāo)化后的大連市奶牛副結(jié)核病個(gè)體血清表觀流行率為14.27%（95%CI：13.31%～15.22%），根據(jù)公式（1）計(jì)算得出真實(shí)個(gè)體流行率為17.23%（95%CI：15.99%～18.74%）。每個(gè)場的真實(shí)個(gè)體流行率計(jì)算結(jié)果見表1。

表1 大連市奶牛副結(jié)核病檢測情況統(tǒng)計(jì)

2.2 風(fēng)險(xiǎn)因素分析

2.2.1 年齡 各年齡段均有陽性牛，其中0～2歲奶牛群體中的副結(jié)核病陽性數(shù)最高，超過2歲奶牛群體中的副結(jié)核病陽性數(shù)出現(xiàn)下降（表2），患病風(fēng)險(xiǎn)比RR=1.58（95%CI：1.31～1.91），表明0～2歲奶牛感染副結(jié)核病的風(fēng)險(xiǎn)是2歲以上奶牛的1.58倍，因此年齡是奶牛感染副結(jié)核病的風(fēng)險(xiǎn)因素之一。

表2 不同年齡奶牛副結(jié)核病檢測結(jié)果 單位：份

2.2.2 胎次 大連市奶牛產(chǎn)仔數(shù)在1～8個(gè)之間，各胎次均檢測到副結(jié)核病陽性牛，其中0～3胎次的陽性數(shù)較多，超過4胎次的陽性數(shù)逐漸下降，RR=1.76（95%CI：1.42～2.19），表明0～3胎次奶牛患副結(jié)核病的風(fēng)險(xiǎn)是4胎及以上奶牛的1.76倍，因而胎次也是奶牛患副結(jié)核病的風(fēng)險(xiǎn)因素之一。

表3 奶牛副結(jié)核病檢測結(jié)果 單位：份

2.2.3 臨床特征對奶牛結(jié)核病與腹瀉癥狀的關(guān)聯(lián)進(jìn)行了初步研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有腹瀉癥狀奶牛的副結(jié)核病陽性數(shù)明顯高于無癥狀奶牛（表4），RR=78.96（95%CI：53.49～116.57），表明發(fā)生腹瀉癥狀奶?；几苯Y(jié)核病的風(fēng)險(xiǎn)是未發(fā)生腹瀉奶牛的78.96倍，因此奶牛腹瀉是奶牛發(fā)生副結(jié)核病的重要風(fēng)險(xiǎn)因素，這也說明奶牛副結(jié)核病是引發(fā)大連市奶牛腹瀉的主要原因之一。

表4 有無腹瀉癥狀奶牛的副結(jié)核病檢測結(jié)果 單位：份

2.3 奶牛養(yǎng)殖場戶相關(guān)知識(shí)掌握情況

與大連市奶牛養(yǎng)殖場工作人員訪談結(jié)果顯示：40%的工作人員沒有聽說過奶牛副結(jié)核病，但90%的人員認(rèn)為應(yīng)該做好奶牛副結(jié)核病防控工作；80%的人員認(rèn)為有必要開展檢測，40%的工作人員了解奶牛副結(jié)核病對生產(chǎn)的危害；70%的工作人員對該病的感染途徑不了解，在聽說過該病的工作人員中，有70%了解該病的臨床癥狀。

3 討論

目前，副結(jié)核病在全球分布較為廣泛。英國、冰島、澳大利亞、美國和加拿大等奶業(yè)發(fā)達(dá)國家，均將此病列為奶牛重大疫病，但該病在國內(nèi)尚未引起普遍關(guān)注。近年來，隨著養(yǎng)牛規(guī)模的擴(kuò)大，奶牛副結(jié)核病的傳播開始加速，對大連市畜牧業(yè)的健康發(fā)展構(gòu)成一定的威脅。本研究顯示，大連市11個(gè)奶牛場中有10個(gè)奶牛場存在抗體陽性牛，全市個(gè)體流行率為17.23%（95%CI：15.99%～18.74%），高于研究報(bào)道的內(nèi)蒙古、黑龍江、湖北、四川、安徽、江蘇6個(gè)省份1.22%～8.00%的陽性率[5]，證明該病在大連市的防控形勢較為嚴(yán)峻，呈現(xiàn)地方性流行趨勢。隨著養(yǎng)牛業(yè)的快速發(fā)展和牛只的頻繁交易，該病可能會(huì)繼續(xù)傳播蔓延，因此需高度重視。

本研究也表明，年齡、胎次都是奶牛副結(jié)核病感染的重要風(fēng)險(xiǎn)因素。犢牛及青年奶牛多發(fā)，提示各牛場應(yīng)嚴(yán)格做好生物安全工作，在引進(jìn)奶牛時(shí)嚴(yán)格檢疫，防止引進(jìn)陽性牛、隱性感染牛。另外，牛場應(yīng)定期進(jìn)行副結(jié)核病監(jiān)測，及時(shí)隔離或淘汰陽性牛。本研究還發(fā)現(xiàn)，奶牛副結(jié)核病也是引發(fā)大連市奶牛腹瀉癥狀的主要原因之一。

從養(yǎng)牛場戶對奶牛副結(jié)核病相關(guān)防控知識(shí)掌握情況看，有的牛場雖然對此病有認(rèn)識(shí)，但采取的防治措施有限，隔離措施不到位。因沒有特效藥物，缺少有效疫苗，所以對奶牛的結(jié)核病防治有一定困難。調(diào)查結(jié)果說明，大連市奶牛場對副結(jié)核病的認(rèn)知程度不高，且大部分規(guī)模場對奶牛副結(jié)核病的危害不甚了解，因此獸醫(yī)部門應(yīng)該加大宣傳和干預(yù)力度，增強(qiáng)奶牛場工作人員對副結(jié)核病的判斷力，從而提高養(yǎng)殖場防控副結(jié)核病的能力。

從調(diào)查結(jié)果可以看出，大連市發(fā)生奶牛副結(jié)核病的養(yǎng)殖場比例很高，若不采取進(jìn)一步防控措施，則感染的奶牛將繼續(xù)在群內(nèi)傳播奶牛副結(jié)核病，繼而造成更大經(jīng)濟(jì)損失。

4 結(jié)論

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)：大連市奶牛副結(jié)核病流行率較高，流行較為嚴(yán)重；年齡、胎次是奶牛副結(jié)核病感染的重要風(fēng)險(xiǎn)因素，奶牛腹瀉與奶牛副結(jié)核病相關(guān)聯(lián)；奶牛場戶對奶牛副結(jié)核病認(rèn)知程度不高，對該病的危害了解不多。因此，大連市需重視對奶牛副結(jié)核病的防控，采取綜合防控措施，阻止本病的繼續(xù)蔓延，并在有條件的場戶開展凈化；各奶牛場應(yīng)嚴(yán)格做好生物安全工作，在引進(jìn)奶牛時(shí)嚴(yán)格檢疫，防止引進(jìn)陽性牛、隱性感染牛；獸醫(yī)部門應(yīng)該加強(qiáng)科普宣傳，增強(qiáng)奶牛場工作人員對副結(jié)核病的判斷力，提高其防范能力。