代 蕾，王金秀，方 莉，章 瑤，李亞文，謝國信，周啟轉，李布勇

（海南省動物疫病預防控制中心，海南?？?571100）

A 型塞尼卡病毒（Senecavirus，SVA）也稱塞尼卡谷病毒（Seneca Valley virus，SVV），屬于RNA 病毒科塞尼卡病毒屬[1]，于2002年在美國被首次分離到。2007年，美國從加拿大進口的187頭豬出現(xiàn)水皰病癥狀，發(fā)病率高達80%，最終確診為SVA 感染[2]。2014年以來，全球多個國家確診發(fā)生豬SVA 感染。2015年9月以來，美國中西部多個地區(qū)的豬群發(fā)生水泡性疫情，新生仔豬病死率達30%～70%，最終確診為SVA 感染[3]?，F(xiàn)已證實，豬SVA 感染能夠引起原發(fā)性水泡病，導致豬鼻吻、蹄部冠狀帶的水泡病變，同時伴有跛行、厭食、嗜睡和發(fā)燒等臨床表現(xiàn)[4-5]。2015年，我國廣東省發(fā)現(xiàn)了由SVA 感染導致的豬水泡性疾病[6]。2017年我國福建省和河南省再次發(fā)生豬SVA 感染案列[5]。近兩年，豬SVA 感染在全球多地出現(xiàn)，并已傳入我國。為了解海南省豬群中的SVA 感染和分布情況，2018年采集海南省15個市（縣）的豬血清樣品，使用間接ELISA 方法進行SVA 抗體檢測，以期為海南省的SVA 防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2018年5—7月，從海南省15個市（縣）中，隨機選取112個規(guī)模場和散養(yǎng)戶作為采樣點，根據(jù)各場點實際存欄量，按照10%～50%的采樣率，共采集2 547份豬血清樣品，-20 ℃保存或4 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑

SVA 間接ELISA 抗體檢測試劑盒，由中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所提供。

1.3 主要儀器

離心機、微量加樣器，購自德國Eppendorf公司；iMARK 型酶標儀、自動洗板機，購自美國BIO-RAD 公司。

1.4 檢測方法

嚴格按照SVA 間接ELISA 抗體檢測試劑盒說明書進行操作：統(tǒng)計樣品數(shù)量，確定所需SVA 抗原包被ELISA 板（條）數(shù)量；陽性對照、陰性對照分別測量2孔，待測樣品測1孔；在抗原包被ELISA 板中，加入50 μL 30倍稀釋的待檢血清，以及未稀釋的陰、陽性對照血清各50 μL，充分振蕩混勻，在37 ℃恒溫箱孵育30 min；用PBST洗滌5次，加入50 μL 兔抗豬IgG-HRP 工作液，37 ℃恒溫箱孵育30 min；再用PBST 洗滌5次，拍干；每孔加入50 μL TMB 液，37 ℃恒溫箱孵育顯色（12±1）min；每孔快速加入50 μL 終止液，用酶標儀測定450 nm 波長的吸光值（OD450）。

1.5 判斷標準

OD450陰性對照平均值≤0.2，并且OD450陽性對照平均值-OD450陰性對照平均值≥0.9，則試驗結果成立。根據(jù)公式S/P=（樣品OD450-陰性對照OD450平均值）/（陽性對照OD450平均值-陰性對照OD450平均值），計算S/P值。當S/P＜0.4時，判定為陰性；S/P≥0.4時，判定為陽性。

2 結果與分析

2.1 總體情況

在15個市（縣）112個采樣場點中，檢出陽性場點56個，場點陽性率為50.0%；在采集的2 547份豬血清樣品中，檢出抗體陽性278頭份，樣品陽性率為10.9%（表1）。總體來看，海南省豬群中的SVA 流行面較廣。

2.2 區(qū)域分布

檢測結果（表1）顯示：海南省15個市（縣）的SVA 抗體場點陽性率在14.3%～100%之間，其中場點陽性率小于20%的有4個市（縣），超過50% 的有6個；SVA 抗體樣品陽性率在1.0%～31.7%之間，其中小于10%的有9個市（縣），而超過20%的有2個。從上述結果可以看出，海南省各市（縣）的SVA 感染情況并不均衡，存在一定的區(qū)域差異。

表1 2018年海南省SVA 抗體檢測結果

2.3 場群分布

2.3.1 不同養(yǎng)殖場點在檢出的56個陽性場點中，共有規(guī)?；B(yǎng)殖場41個，場點陽性率為61.2%（41/67）；散養(yǎng)戶15個，場點陽性率為33.3%（15/45）。在檢出的278份陽性樣品中，規(guī)?；B(yǎng)殖場陽性216份，樣品陽性率為10.4%（216/2 068）；散養(yǎng)戶陽性62份，樣品陽性率為12.9%（62/479）。具體結果見表2。從上述結果可以看出，SVA 在規(guī)模場的感染面高于散養(yǎng)戶。

2.3.2 不同養(yǎng)殖階段從不同階段豬群的SVA 抗體陽性率統(tǒng)計結果（表3）看，仔豬SVA 抗體陽性率最高（20.5%），其次是母豬（15.5%）、后備豬（13.5%）和公豬（10.7%），育肥豬最低（5.9%）。

表2 不同養(yǎng)殖場點SVA 血清學檢測檢測結果

表3 不同階段豬群SVA 抗體檢測結果

3 討論

SVA 傳播速度和范圍在不斷加大，2014年開始全球多個國家相繼發(fā)生SVA 感染疫情[3]，2016年后疫情又陸續(xù)擴散至加拿大、美國、巴西、泰國和哥倫比亞等國家[7-8]。2015年我國廣東省報道了SVA 感染導致的豬水泡性疾病[3]，2016—2017年又有一些省份從患病豬群中分離到SVA[9-10]。SVA在我國傳播快速，現(xiàn)已確定傳播到海南省。

本研究對海南省15個市（縣）112個規(guī)模養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶豬群采集血清進行SVA 抗體檢測，發(fā)現(xiàn)場點陽性率為50.0%，樣品陽性率為10.9%，說明SVA 不僅已擴散至海南省，并且在快速擴散流行，因此應注意加強監(jiān)測和防控。調查發(fā)現(xiàn)，海南省不同市（縣）的SVA 感染情況存在較大差異，兩個交通樞紐城市（L 市和K 市）及其周邊城市（F、G、N 市）陽性率較高，SVA 感染情況最為嚴重，說明人流、物流對SVA 的傳播存在影響，因此應加強對豬群移動的檢疫監(jiān)管。從不同養(yǎng)殖階段豬群的檢測結果來看，規(guī)?；B(yǎng)殖場的場點陽性率高于散養(yǎng)戶，但樣品陽性率低于散養(yǎng)戶。這其中可能與散養(yǎng)戶采樣數(shù)量偏少有關，因此應該考慮到樣本偏倚造成的誤差，真實情況及其原因需要進一步開展調查確認。

SVA 是一種新發(fā)病，豬對其易感。SVA 感染引起的仔豬病死率和感染率均很高，成年豬通常帶毒而不表現(xiàn)臨床癥狀，而亞臨床感染的成年豬應該是豬群中危險的污染源。目前SVA 的傳播方式尚不清楚，為了防控SVA 的進一步傳播，一定要加強飼養(yǎng)管理，提高生物安全水平，并且做好SVA的主動監(jiān)測和追索研究工作。目前SVA 還未大范圍流行，因此在現(xiàn)有條件下如何有效控制SVA 進一步傳播已經成為一個緊迫任務。

4 結論

本次調查發(fā)現(xiàn)，SVA 已擴散至整個海南省，防控形勢較為嚴峻；交通樞紐地區(qū)和規(guī)模化養(yǎng)殖場的SVA 流行面相對較廣，仔豬和種豬群中的SVA流行情況較嚴重。因此，海南省應加強SVA 監(jiān)測和相關流行病學研究，制定相應防控措施，控制SVA 流行和散播。