【摘 要】目的：評(píng)價(jià)水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）的食用安全性。方法：通過(guò)大鼠經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)及大鼠30天喂養(yǎng)試驗(yàn)，評(píng)價(jià)Fruitflow?的食用安全性。結(jié)果：水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）對(duì)大鼠的急性經(jīng)口最大耐受劑量大于20.0g/kg。Ames 試驗(yàn)、小鼠骨髓微核試驗(yàn)和精子畸形試驗(yàn)結(jié)果均為陰性;大鼠30天喂養(yǎng)試驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)也未見(jiàn)明顯的中毒癥狀，也無(wú)死亡。結(jié)論：水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）為無(wú)毒、無(wú)致突變作用的保健食品。

【關(guān)鍵詞】水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）;毒性試驗(yàn);安全評(píng)價(jià)

水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）是經(jīng)物理工藝去除脂溶性成分后得到一種水溶性濃縮物，含有天然存在的抗血小板化合物，攝入后減少血小板聚集，從而將血液保持在流體和低凝狀態(tài)。這有助于防止在循環(huán)系統(tǒng)中形成微聚集體，以及防止血小板粘附到血管壁或脂肪斑上，從而保持健康的血液流通。但血小板功能沒(méi)有被完全抑制，并且保持在適當(dāng)?shù)乃剑沟醚“逶谘軗p傷時(shí)可以聚集[1]，國(guó)外對(duì)其功效進(jìn)行了大量的人體試驗(yàn)研究，但未對(duì)該濃縮物物進(jìn)行毒理學(xué)評(píng)價(jià)。因此，本研究以GB15193.1-2014《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》為依據(jù)，對(duì)Fruitflow?進(jìn)行毒理學(xué)研究，以評(píng)價(jià)其安全性，為Fruitflow?在保健食品、功能食品等領(lǐng)域的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物

水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）（批號(hào)：201701），由湯臣倍健股份有限公司提供，人體口服推薦劑量為0.15g/天，試驗(yàn)時(shí)樣品均用蒸餾水配制和稀釋。

1.2 動(dòng)物

SPF級(jí)ICR小鼠（體重18～22 g），雌雄各半，昆明小鼠（體重25～30 g）、SD大鼠（體重180～220 g）由廣東省醫(yī)學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK（粵）2013-002。動(dòng)物飼養(yǎng)在屏障環(huán)境，飼養(yǎng)溫度為23～25℃，相對(duì)濕度在50%～70%之間，自然光照和黑暗交替12h/d，各組自由攝食和飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)3-5天后隨機(jī)分組進(jìn)行試驗(yàn)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 急性毒性試驗(yàn)

采用最大耐受量法，ICR小鼠，雌雄各半，采用最大耐受量 （MTD） 法。試驗(yàn)前動(dòng)物禁食16h。灌胃體積為0.2 ml/10g體重，折合劑量為20.0g/kg.BW，受試液混懸液經(jīng)口灌胃2次。灌胃后連續(xù)觀察14d，觀察期間記錄小鼠的中毒癥狀、異常反應(yīng)與死亡情況。

1.3.2 Ames試驗(yàn)

采用經(jīng)鑒定符合要求的鼠傷寒沙門(mén)氏茵組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株進(jìn)行試驗(yàn)。采用多氯聯(lián)苯（PCB）誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體酶（S-9）作為體外代謝活化系統(tǒng)。試驗(yàn)設(shè)立8、40、200、1000、5000?g/皿5個(gè)劑量，同時(shí)設(shè)立自發(fā)回變組、溶劑對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組。按平板摻入法在加與不加代謝活化系統(tǒng)（±S9）的條件下進(jìn)行，每組設(shè)3個(gè)平行皿，重復(fù)2次。

1.3.3 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

昆明種小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為陰性對(duì)照（植物油）、陽(yáng)性對(duì)照（環(huán)磷酰胺40mg/kg）、fruitflow?（2.5g/kg，5.0g/kg和10g/kg）組。復(fù)合提取物用植物油配成相應(yīng)劑量的受試液給小鼠灌胃。采用間隔 24h 兩次經(jīng)口灌胃法進(jìn)行試驗(yàn)，按20 ml/kg體重灌胃，末次給樣后6小時(shí)處死動(dòng)物，取胸骨骨髓制片。每只動(dòng)物計(jì)數(shù)200個(gè)嗜多染紅細(xì)胞（PCE），計(jì)算嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比值 （PCE/NCE）;同時(shí)計(jì)數(shù)1000個(gè)PCE中含微核的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算微核率。

1.3.4 小鼠精子畸形試驗(yàn)

將雄性昆明小鼠隨機(jī)分為5組，每組5只，分別為陰性對(duì)照（植物油），陽(yáng)性對(duì)照（環(huán)磷酰胺40mg/kg），fruitflow?（2.5g/kg，5.0g/kg和10g/kg）組，按20ml/kg體重灌胃給藥，每日灌胃一次，連續(xù)5d。末次灌胃后第30d處死動(dòng)物，取雙側(cè)附睪，做精子涂片，伊紅染色，每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)完整精子，計(jì)算精子畸形率。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。微核試驗(yàn)采用Poisson分布U檢驗(yàn)，精子畸形試驗(yàn)采用卡方檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，大鼠 30d喂養(yǎng)試驗(yàn)各數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，以P<0.05作為顯著性水平。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)

由表1可見(jiàn)，以20.0g/kg劑量給兩種性別的ICR種小鼠灌胃后未見(jiàn)明顯中毒癥狀，觀察14天未出現(xiàn)死亡。觀察期末將動(dòng)物處死進(jìn)行解剖檢查，肝、脾、胃、腸、心、肺等主要臟器，未見(jiàn)明顯的異常改變。表明Fruitflow?對(duì)雌、雄ICR小鼠的最大耐受劑量均大于20.00g/kg，屬無(wú)毒級(jí)。

2.2 Ames試驗(yàn)

由表2可見(jiàn)，在Ames試驗(yàn)中無(wú)論是否加S9， Fruitflow?各劑量組的回變菌落數(shù)都沒(méi)有超過(guò)自發(fā)對(duì)照組的2倍，并且各劑量組之間未出現(xiàn)劑量—反應(yīng)關(guān)系。說(shuō)明Fruitflow?不具有致突變作用。

2.3 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

由表3可見(jiàn)，與陰性對(duì)照組相比， Fruitflow?各劑量組的微核率未出現(xiàn)顯著性差異（P>0.05），而環(huán)磷酰胺陽(yáng)性組的微核率差異顯著（P<0.05）。Fruitflow?各劑量組嗜多染紅細(xì)胞 （PCE）與成熟紅細(xì)胞 （NCE） 的比值未少于陰性對(duì)照組的20%，說(shuō)明Fruitflow?未表現(xiàn)出細(xì)胞毒性。

2.4 小鼠精子畸形試驗(yàn)

由表4可見(jiàn)，與陰性對(duì)照組相比， Fruitflow?各劑量組的小鼠精子畸形發(fā)生率未見(jiàn)顯著性差異（P>0.05），而環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組差異顯著（P<0.05）。說(shuō)明Fruitflow?對(duì)小鼠精子無(wú)致畸作用。

3 結(jié)論

水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）是第一個(gè)獲得歐洲食品安全局（EFSA）13.5健康聲稱條款批準(zhǔn)的天然健康安全配料，經(jīng)多個(gè)科學(xué)研究證明可促進(jìn)健康血液循環(huán)，可廣泛應(yīng)用于保健食品、功能食品等健康產(chǎn)品領(lǐng)域。研究表明，血小板在動(dòng)脈粥樣硬化的形成過(guò)程中起著非常重要的作用，可誘導(dǎo)、加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。炎癥等因素的刺激下，活化的血小板粘附血管內(nèi)皮，釋放一系列生物活性物質(zhì)，增強(qiáng)白細(xì)胞募集、活化和遷移，增加脂質(zhì)在血管壁的沉積，誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成，阻礙血流的正常運(yùn)行[2]。對(duì)于已發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化的患者而言，他們的血管壁上會(huì)出現(xiàn)許多斑塊，這些斑塊一旦破裂，生理性止血反應(yīng)便會(huì)被“放大”，形成 病理性血栓[3]，堵塞血管，發(fā)生 腦缺血、 腦卒中、 心絞痛、 心肌梗塞等一系列嚴(yán)重的心血管事件。流行病學(xué)研究證據(jù)也表明，動(dòng)脈粥樣硬化性心血管?。ü谛牟4]、腦卒中[5]、周?chē)鷦?dòng)脈疾病[6]）患者血小板聚集率、血小板活化后分泌的生物活性物質(zhì)顯著升高。除此以外，動(dòng)脈彈性的減弱也與血小板的異?；罨嘘P(guān)[7]。因此，維持正常血小板功能（防止異?；罨途奂┦欠乐蝿?dòng)脈粥樣硬化及心血管疾病的基礎(chǔ)。Fruitflow?具有“維持正常的血小板聚集，有助于血流健康”的功效，其安全性在動(dòng)物試驗(yàn)中也得到了進(jìn)一步的驗(yàn)證。

在本實(shí)驗(yàn)室條件下， Fruitflow?對(duì)ICR小鼠的急性經(jīng)口最大耐受量（MTD）大于20.00g/kg; Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果未見(jiàn)Fruitflow?有致突變作用。因此，本研究結(jié)果表明Fruitflow?未見(jiàn)明顯毒副作用，為水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）作為保健食品的研究開(kāi)發(fā)提供了重要的毒理學(xué)科學(xué)依據(jù)。

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作者簡(jiǎn)介

汪玉芳（1982-），女，安徽省太湖縣人。碩士研究生學(xué)歷。職稱：執(zhí)業(yè)中藥師、執(zhí)業(yè)醫(yī)師。主要研究方向?yàn)樗幤放c保健食品研發(fā)。