尹會方，姚志翔，楊守深

（1.龍巖學(xué)院，福建龍巖 364012；2.廣東德興食品股份有限公司，廣東汕頭 515133；3.南京金桔飼料有限公司，江蘇南京 210000）

半個多世紀(jì)以來，抗生素在養(yǎng)豬業(yè)中被廣泛用于預(yù)防斷奶后腹瀉和促進(jìn)動物生長。但長期和過量使用抗生素導(dǎo)致一系列負(fù)面效應(yīng)，包括誘導(dǎo)細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性等，因此，在部分國家已禁止或限制使用。益生菌是一種新型飼料補(bǔ)充劑，能促進(jìn)動物腸道菌群平衡，從而促進(jìn)養(yǎng)分利用、預(yù)防疾病，最終促進(jìn)生長（金爾光等，2018）。目前，益生菌飼料添加劑在畜禽、水產(chǎn)養(yǎng)殖上的使用越來越廣泛。丁酸梭菌（CB）和地衣芽孢桿菌（BL）被納入我國飼料添加劑目錄，是兩種常見的益生菌，具有平衡腸道菌群、促進(jìn)免疫器官發(fā)育、提高免疫功能、促進(jìn)動物生等功能，具有良好的應(yīng)用前景（楊家軍，2014；劉曉琳等，2008）。而這兩種益生菌同時添加于飼糧中的應(yīng)用效果是否更好尚不清楚，因此，本試驗旨在研究CB結(jié)合BL對斷奶仔豬生長和免疫功能等指標(biāo)的影響，擬評估這兩種益生菌聯(lián)合使用的潛力。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗所用丁酸梭菌和地衣芽孢桿菌均購買自廣州市某生物科技有限公司，活菌數(shù)量分別為 2.8×108CFU/g、1.9×1010CFU/g。

1.2 試驗設(shè)計 試驗在廣東某規(guī)?；B(yǎng)豬場進(jìn)行，選擇體重近似的21日齡斷奶三元雜交仔豬100頭，隨機(jī)分為4組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)5頭豬。預(yù)飼期5 d后，試驗1、2組按照4.0×108CFU/kg的劑量分別在對照組飼糧的基礎(chǔ)上添加丁酸梭菌和地衣芽孢桿菌，試驗3組飼糧中添加4.0×108CFU/kg的丁酸梭菌 +4.0×108CFU/kg的地衣芽孢桿菌。基礎(chǔ)飼糧見表1，試驗為期30 d。

表1 飼糧配方和營養(yǎng)水平

1.3 樣品采集及指標(biāo)測定

1.3.1 生長性能 在試驗開始和結(jié)束時稱量仔豬空腹體重，每天記錄采食量。試驗結(jié)束后計算平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）及料肉比（FCR）。

1.3.2 血液指標(biāo) 試驗結(jié)束時，每個重復(fù)隨機(jī)選擇2頭仔豬通過前腔靜脈采血，采血前饑餓12 h。血液在室溫靜置1 h后離心收集上層血清。用試劑盒測定血清中總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）活性和丙二醛（MDA）濃度，用ELISA試劑盒檢測血清中白細(xì)胞介素2（IL-2）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNFα）的濃度，自動生化分析儀檢測血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白濃度。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 采用SPSS15.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，采用Duncan’s法多重比較。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 丁酸梭菌和地衣芽孢桿菌對斷奶仔豬生長性能的影響 由表2可知，益生菌處理后各組采食量較對照組無顯著變化（P＞0.05），生長性能提高。試驗2、3組仔豬末重較對照組分別提高5.9%、7.1%（P＜0.05），ADG分別提高12.6%、15.4%（P＜0.05），試驗1組仔豬平均末重、ADG較對照組分別提高2.9%、5.8%，但未達(dá)顯著水平（P＞0.05），試驗3組ADG較試驗1組顯著提高9.0%（P＜0.05）。試驗組FCR較對照組分別顯著降低6.1%、8.3%、9.9%（P＜0.05）。

表2 丁酸梭菌和地衣芽孢桿菌對斷奶?仔豬生長性能的影響

2.2 丁酸梭菌和地衣芽孢桿菌對斷奶仔豬血液指標(biāo)的影響 由表3可知，試驗組仔豬血清中SOD較對照組分別顯著提高8.9%、15.2%、17.1%（P＜ 0.05），MDA濃度分別降低 7.6%、8.7%、10.6%（P＜ 0.05）；試驗 1、2組仔豬血清中T-AOC、GSH-Px濃度較對照組均有上升，但不顯著（P＞0.05）；試驗3組T-AOC、GSH-Px濃度較對照組均提高8.9%（P＜0.05）。試驗組仔豬血清中球蛋白濃度較對照組分別提高10.9%、12.9%、16.3%（P＜0.05），白蛋白/球蛋白分別降 低 9.1%、12.9%、16.3%（P＜ 0.05）。 此 外，試驗組仔豬血清中免疫因子濃度較對照組升高，試驗2、3組IgG濃度分別顯著提高8.7%、12.2%（P＜0.05），IgA濃度顯著提高7.3%、11.4%（P＜0.05），試驗1組血清中免疫因子較對照組升高，但未達(dá)顯著水平（P＞0.05）。

3 討論

3.1 丁酸梭菌和地衣芽孢桿菌對斷奶仔豬生長性能的影響 斷奶讓仔豬被迫適應(yīng)營養(yǎng)和環(huán)境的變化，是豬一生中最為關(guān)鍵的階段。斷奶造成營養(yǎng)供給方式的轉(zhuǎn)變顯著影響仔豬小腸上皮結(jié)構(gòu)，嚴(yán)重時引起腸上皮層受損，降低營養(yǎng)物質(zhì)的消化率，導(dǎo)致仔豬斷奶后經(jīng)常出現(xiàn)腹瀉和生長遲緩。目前，益生菌是一種新型的綠色飼料添加劑，能減少仔豬斷奶后腹瀉、促進(jìn)胃腸道健康，有部分或全部替代抗生素作為飼料添加劑應(yīng)用的潛力（金爾光等，2018）。此外，飼糧中添加益生菌還可以降低斷奶造成的氧化損傷和炎癥反應(yīng)。CB和BL是兩種常見的益生菌，均被列入我國飼料添加劑目錄，在養(yǎng)殖生產(chǎn)中應(yīng)用效果良好（趙敏孟等，2018；楊家軍等，2014）。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加CB時仔豬FCR較對照組顯著降低，添加BL時仔豬末重、ADG較對照組顯著提高，F(xiàn)CR降低。李玉鵬等（2017）報道，飼糧中添加CB飼喂仔豬14 d后，試驗組仔豬ADG較對照組顯著提高，而FCR降低。賈聰慧等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加CB處理42 d，肉雞末重、ADG、采食量較對照組均顯著提高，與抗生素組飼喂效果相近。而Yang等（2012）報道，添加低劑量CB時肉雞生長無顯著改善，而隨著劑量增加，肉雞的生長性能也顯著提高。因此，本試驗中CB組仔豬末重和ADG無顯著提高可能是由于未選擇最佳添加劑量，同時處理效果還與試驗動物的種類等因素有關(guān)。類似的，楊家軍等（2014）發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加BL，肉雞末重、ADG顯著提高，F(xiàn)CR降低。劉曉琳等（2008）在仔豬上的試驗也得到相似結(jié)果。以上研究與本試驗結(jié)果相符，表明飼糧中分別添加以上兩種益生菌均能促進(jìn)仔豬生長。但本研究還發(fā)現(xiàn)，兩者同時添加時也能顯著改善仔豬生長，并且飼喂效果最好，顯著優(yōu)于CB組，這表明兩者同時添加時可能存在疊加效應(yīng)或協(xié)同作用。

表3 丁酸梭菌和地衣芽孢桿菌對斷奶?仔豬血液指標(biāo)的影響

3.2 丁酸梭菌和地衣芽孢桿菌對斷奶仔豬血液指標(biāo)的影響 仔豬早期斷奶常伴隨斷奶應(yīng)激和抵抗力低下，血液指標(biāo)與機(jī)體營養(yǎng)、健康狀況密切相關(guān)，可以直接反映機(jī)體氧化應(yīng)激和免疫水平。T-AOC、T-SOD、GSH-Px、MDA是反映機(jī)體氧化應(yīng)激狀態(tài)的標(biāo)志性指標(biāo)，T-AOC能直接反映機(jī)體抗氧化能力，MDA濃度升高表明脂質(zhì)過氧化、氧化損傷水平上升，SOD、GSH-Px能分別降低機(jī)體內(nèi)超氧陰離子和過氧化物濃度（鄭有秀等，2018）。本研究發(fā)現(xiàn)，CB和BL處理均能顯著提高仔豬血清中T-AOC，降低MDA含量，而兩者同時添加時還能提高血清中抗氧化酶活性。研究發(fā)現(xiàn)，肉雞飼糧中添加CB顯著提高血清中抗氧化酶活性，顯著改善抗氧化性能（賈聰慧等，2016）。而飼糧中添加BL時顯著提高肉雞血清中T-AOC，降低MDA濃度（陳家祥等，2010）。表明CB和BL均能提高仔豬抗氧化性能，而兩者同時添加時效果最好。

血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白濃度在一定程度上能綜合反應(yīng)動物機(jī)體對蛋白質(zhì)的利用情況及免疫水平，免疫因子可以直接反映體液免疫狀態(tài)（Yang等，2012）。益生菌最重要的功能之一是刺激免疫系統(tǒng)，促進(jìn)免疫器官發(fā)育，增強(qiáng)體液免疫等（Chao等，2017）。本試驗結(jié)果顯示，CB和BL均顯著增加仔豬血清中球蛋白含量，降低白蛋白和球蛋白的比值，表明仔豬的免疫功能得到改善。此外，我們還發(fā)現(xiàn)，BL組、CB-BL組仔豬血清中IgG、IgA濃度較對照組顯著升高，表明仔豬體液免疫功能增強(qiáng)，而CB組免疫因子濃度無顯著變化。袁慧坤等（2018）報道，CB和BL均能促進(jìn)北京鴨免疫器官發(fā)育，且兩種益生菌聯(lián)合添加時效果最好。而有研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加CB顯著提高肉雞血清中IgG等免疫因子的含量（Yang等，2012）。總的來說，CB和BL均能提高仔豬免疫水平，而本試驗結(jié)果與前人研究存在的差異可能是由試驗對象和添加劑量不同引起。

4 結(jié)論

綜上所述，飼糧中添加CB和BL均能促進(jìn)仔豬生長，提高其免疫功能。在本試驗的添加劑量下BL的處理效果優(yōu)于CB，兩者同時添加時效果最好，表明二者可能存在協(xié)同作用，具體機(jī)制有待研究。