王海珊，李長(zhǎng)江，湯 蓉，李大鵬，梁 驍，熊 梅，Kommaly Onxayvieng,3，李 莉

(1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)養(yǎng)殖國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心， 池塘健康養(yǎng)殖湖北省工程實(shí)驗(yàn)室，武漢 430070； 2.宜昌市水產(chǎn)技術(shù)推廣站，湖北宜昌 443003； 3.Department of Livestock and Fisheries,Ministry of Agriculture and Forestry,Vientiane,Lao PDR)

游泳運(yùn)動(dòng)作為魚類的生態(tài)習(xí)性，影響著魚體內(nèi)多種生理生化過(guò)程[1]。適度的游泳運(yùn)動(dòng)行為可以提升魚類的生長(zhǎng)性能，改善肌肉品質(zhì)，增強(qiáng)免疫力等[2-4]。運(yùn)動(dòng)對(duì)魚類所產(chǎn)生的各種有益生理效應(yīng)可以視為動(dòng)物福利改善的指標(biāo)[5]。甲狀腺激素(THs)對(duì)魚類具有廣泛的生物學(xué)作用，參與了生長(zhǎng)、生殖、發(fā)育等多種生命活動(dòng)[6-9]。甲狀腺激素主要包括四碘甲狀腺原氨酸(T4)和三碘甲狀腺原氨酸(T3)。T3發(fā)揮著甲狀腺激素的生物活性作用，它主要是由T4在外周組織內(nèi)通過(guò)脫碘酶(IDs)催化脫碘作用產(chǎn)生[10,11]。運(yùn)動(dòng)對(duì)調(diào)控動(dòng)物甲狀腺機(jī)能方面具有一定作用。Kiessling等[12]在對(duì)全雌大鱗大麻哈魚(Oncorhynchustshawytscha)的研究中發(fā)現(xiàn)，游泳運(yùn)動(dòng)可以提高血液T3含量以及T3/T4的比值[12]。

異育銀鯽“中科3號(hào)”(Carassiusauratusgibeliovar.CAS Ⅲ)是異育銀鯽第三代新品種，具有遺傳性狀穩(wěn)定、生長(zhǎng)速度快、出肉率高等特點(diǎn)[13]。目前，該品種已在全國(guó)多個(gè)省市廣泛養(yǎng)殖。本研究以異育銀鯽“中科3號(hào)”為研究對(duì)象，通過(guò)設(shè)置不同水流速度來(lái)使魚類產(chǎn)生游泳運(yùn)動(dòng)，從而探究游泳運(yùn)動(dòng)對(duì)異育銀鯽甲狀腺激素水平及其代謝調(diào)控的影響，為魚類的健康養(yǎng)殖實(shí)踐提供基礎(chǔ)科學(xué)數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)魚和馴養(yǎng)

異育銀鯽“中科3號(hào)”幼魚購(gòu)自湖北省黃石市富爾水產(chǎn)苗種有限公司。試驗(yàn)前，將實(shí)驗(yàn)魚在華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)暫養(yǎng)4周。暫養(yǎng)期間控制循環(huán)水水溫在(28.0±0.5) ℃，pH為7.30±0.07，溶氧水平保持在6.7 mg/L左右。實(shí)驗(yàn)魚被每天飽食投喂3次，分別是08：00、14：00和18：00，投喂1 h后立即清除養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)的殘餌和糞便，每日換水量約為養(yǎng)殖水體的10%。

1.2 實(shí)驗(yàn)裝置與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 實(shí)驗(yàn)裝置

實(shí)驗(yàn)采用自主設(shè)計(jì)的環(huán)流水養(yǎng)殖裝置(圖1)，養(yǎng)殖缸呈直徑85 cm的藍(lán)色塑料圓柱形，養(yǎng)殖水位高40 cm，養(yǎng)殖缸中間加入直徑25 cm的空心PVC管并配備相應(yīng)尺寸管帽。養(yǎng)殖缸右側(cè)用吸盤吸附可調(diào)節(jié)水流量潛水泵(功率25、100、150 W；型號(hào)HJ-1500、HJ-5500、HJ-6000，森森集團(tuán)股份有限公司)，不同實(shí)驗(yàn)組配備不同功率的潛水泵以營(yíng)造不同的水流速度環(huán)境。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

挑選體質(zhì)量(99.47±10.22)g，體長(zhǎng)(14.58±0.07)cm的健康異育銀鯽“中科3號(hào)”幼魚192尾，隨機(jī)分為1個(gè)靜水對(duì)照組和3個(gè)游泳運(yùn)動(dòng)組。對(duì)照組流速為0 bl(體長(zhǎng))/s，運(yùn)動(dòng)組的流速分別為0.5、1.0和2.0 bl/s，每組設(shè)置3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)缸，每個(gè)實(shí)驗(yàn)缸內(nèi)放養(yǎng)16尾魚。在正式實(shí)驗(yàn)前3 d，逐步提高水流訓(xùn)練的時(shí)間，直至達(dá)到正式游泳所需的18 h。每天檢測(cè)養(yǎng)殖缸內(nèi)水流速度，選取水體底部、中部和頂部三個(gè)水位檢測(cè)取平均值，由LS300-A型便攜式流速測(cè)算儀(南京卓瑪機(jī)電有限公司)測(cè)定大小。

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，隨著魚體的生長(zhǎng)，流速根據(jù)其體長(zhǎng)每2周調(diào)整1次。每天飽食投喂3次，投喂期間各組水環(huán)境均保持靜水狀態(tài)，投喂1 h后立即清除養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)的殘餌和糞便。在游泳組中，每天的流速保持18 h，其他時(shí)間關(guān)閉水流，即實(shí)驗(yàn)魚的游泳時(shí)間為18 h/d。實(shí)驗(yàn)時(shí)間為8周。

圖1 環(huán)流水養(yǎng)殖系統(tǒng)設(shè)計(jì)圖Fig.1 The scheme of water circulation in the experimental tank

1.3 樣品采集

1.3.1 血液樣品

流水訓(xùn)練8周后，進(jìn)行取樣。每個(gè)平行實(shí)驗(yàn)缸取12尾魚，即每個(gè)處理組取36尾魚。采用MS-222(120 mg/L)麻醉實(shí)驗(yàn)魚，每尾魚用不加抗凝劑的注射器自尾靜脈取血1～3 mL，3 500g離心20 min后，取上層血清，保存于-80 ℃下用于激素測(cè)定。

1.3.2 組織樣品

訓(xùn)練8周后，每缸隨機(jī)選取12尾魚，采用MS-222(120 mg/L)麻醉。每尾魚分別采集肝組織以及下頜部第1至第3對(duì)鰓弓的交叉處組織(甲狀腺濾泡聚集處)樣品。將樣品于液氮中速凍后，保存在-80 ℃超低溫冰箱中以待測(cè)定。

1.4 測(cè)定方法

1.4.1 血清皮質(zhì)醇含量的測(cè)定

采用放射性免疫測(cè)定法測(cè)定血清皮質(zhì)醇(Cor.)含量，使用皮質(zhì)醇放射性免疫試劑盒(北京北方生物技術(shù)有限公司，批號(hào)20171010)進(jìn)行測(cè)定。應(yīng)用免疫競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制原理，標(biāo)準(zhǔn)或樣品中的Cor.和加入的125I-Cor.共同與定量的特異性抗體產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性免疫反應(yīng)。125I-Cor.與抗體的結(jié)合量與標(biāo)準(zhǔn)或樣品重Cor.的含量呈一定的函數(shù)關(guān)系。用免疫分離試劑(PR)將結(jié)合部分(B)與游離部分(F)分離后，測(cè)定結(jié)合部分的放射性強(qiáng)度，并計(jì)算相應(yīng)結(jié)合律B/B0。用已知標(biāo)準(zhǔn)Cor.含量與對(duì)應(yīng)結(jié)合律作圖，即得標(biāo)準(zhǔn)已知曲線。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查知對(duì)應(yīng)結(jié)合率的待測(cè)樣品重Cor.含量。

1.4.2 血清甲狀腺激素與促甲狀腺激素含量的測(cè)定

血清T3、T4、FT3和FT4含量采用酶聯(lián)免疫(ELISA)檢測(cè)試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所，批號(hào)20060009)測(cè)定，TSH含量用放射免疫法(RIA)檢測(cè)試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所，批號(hào)20180424)測(cè)定。

1.4.3 脫碘酶活性的測(cè)定

肝臟組織中加入0.1 mol/L PBS，1 mmol/L DTT，2 mmol/L EDTA，pH7.0的緩沖液進(jìn)行勻漿，12 000g室溫下離心20 min，取上清液，得到10%的組織勻漿液。勻漿液快速冷凍于液氮中，在-80 ℃下保存。10%肝勻漿液采用Bradford蛋白測(cè)定試劑盒(南京建城研究所)測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。

脫碘酶(IDs)分為三種類型，分別是Ⅰ型脫碘酶(ID1)、Ⅱ型脫碘酶(ID2)和Ⅲ型脫碘酶(ID3)。按照如下成分制備ID1、ID2和ID3的孵育液。ID1孵育液：50 000 cPm125I-rT3，0.10 μmol/L rT3，15.00 mmol/L DTT；ID2孵育液：50 000 cPm125I-T4，1.00 μmol/L T4，30.00 mmol/L DTT；ID3孵育液：150 000 cPm125I-T3，1.00 μmol/L T3，30.00 mmol/L DTT。將200 μL肝勻漿液和200 μL不同的孵育液分別在放免管中于37 ℃下孵育120 min，對(duì)照組用勻漿緩沖液代替肝勻漿液，反應(yīng)步驟和條件不變。

孵育液結(jié)束后，在每管中加入200 μL 4 ℃的5% BSA(w/v)溶液使反應(yīng)停止，然后加入200 μL 10% TCA使蛋白沉淀，在3 500g離心30 min。用GC-911型恪β放射免疫計(jì)數(shù)器測(cè)量總放射性和上清液放射性的cPm值，脫碘酶的活性計(jì)算公式如下：

其中SCc=SC-BC；BC：對(duì)照管的放射性計(jì)數(shù)；SC：樣品管的放射性計(jì)數(shù)；TC：總放射性計(jì)數(shù)；SA：孵育液中反應(yīng)底物的含量/TC。碘甲狀腺原氨酸的單位活性以每分鐘每毫克蛋白釋放出的I-1的飛摩爾(fmol I-1released/(mg Pro·min))表示。

1.4.4 甲狀腺激素代謝調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)量的測(cè)定

使用組織研磨儀在冰浴條件下，根據(jù)RNAiso試劑(TaKaRa,Shuzo,JaPan)使用說(shuō)明進(jìn)行肝臟與垂體總RNA的提取。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA質(zhì)量，用NanoDroP 2000 核算分析儀(Thermo Scientific,Waltham,MA,USA)檢測(cè)其濃度。使用HifairTMⅡ1 standard cDNA synthesis suPermix (Yisheng,Shanghai,China)反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄第一鏈cDNA的合成。

從GenBank中公布的鯽甲狀腺內(nèi)分泌系統(tǒng)與生長(zhǎng)相關(guān)基因核心序列片段設(shè)計(jì)引物，測(cè)定鯽肝臟中id1、id2、id3、ttr、tr-α、tr-β基因的表達(dá)情況，選取β-actin為內(nèi)參基因，引物序列如表1所示。

用HifairTMqPCR SYBR熒光染料(上海翊圣)進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)。qRT-PCR反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性10 s，58 ℃(β-actin)、60 ℃(id1)、58 ℃(id2)、60 ℃(id3)、58 ℃(ttr)、55 ℃(tr-α)、58 ℃(tr-β)，4 ℃退火，72 ℃延伸20 s，擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，目的基因的表達(dá)分析采用2-△△ct法。

表1 熒光定量PCR引物序列

1.4.5 甲狀腺組織學(xué)觀察

采集異育銀鯽第1至第3對(duì)鰓弓的入鰓動(dòng)脈和腹大動(dòng)脈交叉處(鯽甲狀腺濾泡主要集中處)組織，固定于4%多聚甲醛中，采用組織學(xué)石蠟切片技術(shù)和蘇木精-伊紅染色法，使用Nikon EcliPse 80i顯微鏡進(jìn)行甲狀腺組織學(xué)結(jié)構(gòu)特性的觀察。參考劉子棟等[24]的方法，通過(guò)測(cè)量細(xì)胞核的長(zhǎng)徑和短徑來(lái)對(duì)甲狀腺濾泡細(xì)胞核的大小進(jìn)行定量評(píng)估，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組統(tǒng)計(jì)3個(gè)切片樣品數(shù)，每片共計(jì)數(shù)25個(gè)細(xì)胞核，運(yùn)用橢圓公式(π×長(zhǎng)軸長(zhǎng)×短軸長(zhǎng)/4)計(jì)算細(xì)胞核大小。

1.4.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)中所有數(shù)據(jù)先用Excel進(jìn)行初步處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)來(lái)表示，用SPSS 19.0軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和分析。在檢測(cè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的正態(tài)分布和方差齊性后，采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)進(jìn)行顯著檢驗(yàn)，用鄧肯檢驗(yàn)法(Duncan)進(jìn)行多重比較分析，P<0.05為顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 血清皮質(zhì)醇、甲狀腺激素和促甲狀腺激素水平

游泳訓(xùn)練8周后，各組血清皮質(zhì)醇含量基本保持穩(wěn)定水平，各實(shí)驗(yàn)組之間并無(wú)顯著性差異(表2)。游泳運(yùn)動(dòng)對(duì)實(shí)驗(yàn)魚血清甲狀腺激素水平產(chǎn)生了比較顯著的影響(表2)。與對(duì)照組相比，血清T4與T3的含量在運(yùn)動(dòng)組均有上升，在0.5 bl/s運(yùn)動(dòng)組有顯著上升，但1 bl/s和2 bl/s運(yùn)動(dòng)組與對(duì)照組之間沒(méi)有顯著性差異。8周游泳運(yùn)動(dòng)后，2 bl/s運(yùn)動(dòng)組的血清FT4含量顯著高于對(duì)照組和其他運(yùn)動(dòng)組。此外，血清FT3含量在對(duì)照組與三個(gè)游泳運(yùn)動(dòng)組間不存在顯著性差異。游泳運(yùn)動(dòng)也改變了實(shí)驗(yàn)魚血清TSH的水平,其在0.5 bl/s與1 bl/s運(yùn)動(dòng)組中出現(xiàn)了顯著性上升的現(xiàn)象(表2)。

表2 不同水流速度對(duì)異育銀鯽血清皮質(zhì)醇、甲狀腺激素和促甲狀腺激素水平的影響

2.2 肝臟脫碘酶活性

與對(duì)照組相比，ID1活性在0.5 bl/s運(yùn)動(dòng)組顯著上升，但1 bl/s和2 bl/s運(yùn)動(dòng)組與0 bl/s對(duì)照組之間沒(méi)有顯著性差異。隨著流速的增長(zhǎng)，ID2活性呈逐漸上升趨勢(shì)，但各個(gè)實(shí)驗(yàn)組間無(wú)顯著性差異。ID3活性隨著流速的上升而下降，1 bl/s和2 bl/s運(yùn)動(dòng)組中ID3的活性顯著低于0 bl/s對(duì)照組，0.5 bl/s組與0 bl/s組之間無(wú)顯著性差異 (圖2)。

圖2 不同水流速度對(duì)異育銀鯽肝臟脫碘酶活性的影響Fig.2 The effect of swimming on the activity of iodothyronine deiodinase of C.auratus gibelio under different water velocity

2.3 甲狀腺激素代謝相關(guān)基因表達(dá)量

tr-αmRNA相對(duì)表達(dá)量在2 bl/s運(yùn)動(dòng)組中顯著性上升，且0 bl/s對(duì)照組和0.5 bl/s、1 bl/s運(yùn)動(dòng)組之間無(wú)顯著性差異。tr-βmRNA相對(duì)表達(dá)量在各實(shí)驗(yàn)組間無(wú)顯著性差異 (圖3)。

id1 mRNA相對(duì)表達(dá)量在1 bl/s運(yùn)動(dòng)組中顯著上升，顯著高于0 bl/s對(duì)照組和0.5 bl/s、2 bl/s運(yùn)動(dòng)組，且后三組間無(wú)顯著性差異。id2和ttr的mRNA相對(duì)表達(dá)量在各組見(jiàn)無(wú)顯著性差異。同時(shí)，id3 mRNA相對(duì)表達(dá)量在2 bl/s運(yùn)動(dòng)組中顯著性高于對(duì)照組和0.5 bl/s、1 bl/s運(yùn)動(dòng)組 (圖3)。

2.4 甲狀腺組織學(xué)結(jié)構(gòu)

異育銀鯽甲狀腺濾泡內(nèi)充滿了均勻的膠質(zhì)。各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的魚類甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞保持正常形態(tài)結(jié)構(gòu)，未發(fā)生顯著改變(圖4)。但相比于對(duì)照組，運(yùn)動(dòng)組中異育銀鯽甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的細(xì)胞核顯著性增大 (圖5)。

3 討論

血液皮質(zhì)醇水平常被用作反映魚類應(yīng)激狀態(tài)的內(nèi)分泌指標(biāo)。當(dāng)魚類產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)時(shí)，血漿皮質(zhì)醇水平會(huì)顯著升高[14,15]。Young等[16]的研究表明，在面對(duì)捕撈和擁擠脅迫后0.5 h，條紋鱸魚(Moronesaxatilis)血漿皮質(zhì)醇含量顯著性升高。脅迫后4 h，野生條紋鱸魚以及經(jīng)過(guò)游泳運(yùn)動(dòng)的魚血漿皮質(zhì)醇含量均恢復(fù)到應(yīng)激前水平，對(duì)照組血漿皮質(zhì)醇含量依舊顯著性高于脅迫前水平。Woodward等[17]的研究結(jié)果同樣示，經(jīng)過(guò)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后的虹鱒(Salmogairdneri)在面對(duì)游泳應(yīng)激壓力時(shí)表現(xiàn)出更好的抗應(yīng)激能力。本研究發(fā)現(xiàn)，在經(jīng)過(guò)8周的游泳運(yùn)動(dòng)后，異育銀鯽“中科3號(hào)”血清皮質(zhì)醇含量均保持正常水平，與對(duì)照組并無(wú)顯著性差異。由此表明，實(shí)驗(yàn)魚能夠長(zhǎng)期適應(yīng)不高于2 bl/s的水流環(huán)境。

圖3 不同水流速度對(duì)異育銀鯽肝臟中tr-α，tr-β，ttr，id1，id2與id3基因表達(dá)的影響Fig.3 Transcript abundance for tr-α，tr-β，ttr，id1，id2 and id3 in liver of C.auratus gibelio under different water velocity

圖4 不同水流速度對(duì)異育銀鯽甲狀腺濾泡組織 結(jié)構(gòu)的影響Fig.4 The effect of different water velocity on the histological structure of thyroid follicles in C.auratus gibelio A：0 bl/s；B：0.5 bl/s；C：1 bl/s；D：2 bl/s；CO：膠質(zhì)。

圖5 不同水流速度對(duì)異育銀鯽甲狀腺濾泡細(xì)胞核 大小的影響Fig.5 The effect of different water velocity on the histological structure of thyroid follicles in C.auratus gibelio

魚類甲狀腺機(jī)能主要受下丘腦-垂體-甲狀腺軸(HPT)的調(diào)控，并通過(guò)HPT軸維持外周循環(huán)系統(tǒng)甲狀腺激素代謝的穩(wěn)態(tài)。與其他脊椎動(dòng)物不同，魚類的甲狀腺幾乎不合成T3，只合成T4，其分泌活動(dòng)受到垂體分泌的促甲狀腺激素(TSH)的調(diào)控[18]。TSH含量的改變對(duì)甲狀腺激素(THs)的合成與釋放具有重要的作用[19,20]。在本研究中，游泳運(yùn)動(dòng)改變了異育銀鯽血清TSH的含量，使其在游泳運(yùn)動(dòng)組積累增多，并且血清THs在游泳運(yùn)動(dòng)組顯著性升高。說(shuō)明可能是由于運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練刺激了下丘腦與垂體對(duì)TSH的釋放，從而促進(jìn)了下游THs的積累。

在生物體內(nèi)，T3是主要發(fā)揮生物活性的甲狀腺激素形式，主要是由外周組織中的T4與TTR結(jié)合后轉(zhuǎn)運(yùn)至外周組織，通過(guò)脫碘酶(IDs)的外環(huán)脫碘作用轉(zhuǎn)化而來(lái)。IDs對(duì)外周組織內(nèi)TH的代謝具有重要的調(diào)控作用[11]。ID1具有催化T4外環(huán)脫碘形成T3和催化T4內(nèi)環(huán)脫碘形成反T3(rT3)的雙重特性。本研究中，ID1活性在0.5 bl /s流速組中顯著性升高，這與血清T4與T3含量在0.5 bl s-1運(yùn)動(dòng)組顯著性升高表現(xiàn)一致?？赡苁怯捎贗D1活性的升高，增加了T4向T3的外環(huán)脫碘轉(zhuǎn)化，提升了機(jī)體T3水平。同時(shí)，ID2也具有催化T4和rT3的外環(huán)脫碘作用。Yan等[21]認(rèn)為，相比于ID1，只具有外環(huán)脫碘作用的ID2可以更專一地在調(diào)節(jié)機(jī)體T3含量方面發(fā)揮作用[21]。但在本研究中，雖然游泳運(yùn)動(dòng)組ID2活性出現(xiàn)了上升，但與對(duì)照組相比并無(wú)顯著性差異?？赡苁怯捎诓煌难芯繉?duì)象與處理?xiàng)l件引起的，本研究中ID1發(fā)揮了更大的作用。此外，承擔(dān)催化T4和T3內(nèi)環(huán)脫碘作用的ID3活性在游泳運(yùn)動(dòng)組顯著性降低，由于ID3具有催化THs失活降解的作用，機(jī)體可能是通過(guò)減少THs的降解從而促進(jìn)了訓(xùn)練組血清THs的積累。由此可見(jiàn)，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練引起了外周THs代謝過(guò)程中的一系列酶活性的改變?cè)黾恿薚4向T3增強(qiáng)以及T3降解代謝減弱，從而促進(jìn)了機(jī)體內(nèi)T3水平的升高。

THs通過(guò)與血漿中的甲狀腺激素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TTR)結(jié)合進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)，實(shí)現(xiàn)脫碘以及向靶組織器官運(yùn)輸?shù)恼{(diào)節(jié)作用，對(duì)維持甲狀腺組織外的THs含量起到了十分重要的作用[21,22]。有關(guān)研究表明，微囊藻毒素的暴露引起斑馬魚(Daniorerio)機(jī)體ttr基因表達(dá)水平的升高，同時(shí)引起T3與FT3含量的降低，是由于TTR與T3結(jié)合水平升高導(dǎo)致的[23]。在本實(shí)驗(yàn)中，肝臟ttr基因表達(dá)水平在各個(gè)實(shí)驗(yàn)組間無(wú)顯著性差異游泳運(yùn)動(dòng)組升高的T4含量，促進(jìn)了FT4的積累。THs與細(xì)胞內(nèi)甲狀腺激素受體(TRs)結(jié)合形成激素受體復(fù)合物，然后進(jìn)一步調(diào)控下游基因的表達(dá)[24]。甲狀腺激素受體包含兩種類型，即TR-α與TR-β，其mRNA水平受到體內(nèi)甲狀腺激素的調(diào)節(jié)。tr基因的表達(dá)水平會(huì)影響其與THs的結(jié)合，從而影響THs生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮[24,25]。水流刺激下，異育銀鯽的THs代謝在不同的流速下表現(xiàn)出不同的響應(yīng)形式，如TRs上調(diào)或T3水平升高。TRs表達(dá)上調(diào)以及T3水平升高，都有助于THs生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮。因此，水流刺激銀鯽增加游泳時(shí)間，可以鍛煉魚類起到促進(jìn)TH發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，更好地調(diào)控魚類的生長(zhǎng)代謝。

與哺乳動(dòng)物不同，常見(jiàn)淡水魚類的甲狀腺并不是一個(gè)單一實(shí)質(zhì)腺體，而是由一些散布的甲狀腺濾泡組成。在正常的生理活動(dòng)下，由單層上皮細(xì)胞構(gòu)成的甲狀腺濾泡內(nèi)布滿了膠質(zhì)，是甲狀腺激素合成與貯藏的主要位置[6]。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)各個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的甲狀腺濾泡內(nèi)膠質(zhì)分布均勻。運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組中甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞細(xì)胞核出現(xiàn)增大現(xiàn)象，可能是由于血清中TSH含量過(guò)高對(duì)甲狀腺組織的反饋?zhàn)饔?，表明游泳運(yùn)動(dòng)增加了異育銀鯽甲狀腺組織的代謝功能[27]。

總體來(lái)講，游泳運(yùn)動(dòng)可以通過(guò)調(diào)控TSH的分泌促進(jìn)TH的合成，并通過(guò)調(diào)節(jié)外周組織的IDs活性來(lái)改變異育銀鯽外周循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)的THs含量。適度的游泳運(yùn)動(dòng)可以促進(jìn)異育銀鯽甲狀腺激素的代謝，提高其甲狀腺機(jī)能，對(duì)提升其生理健康具有一定的促進(jìn)作用。