姚山梅

(廣西崇左市憑祥市夏石中學 廣西 憑祥 532600)

1.材料與方法

1.1 實驗材料。儀器 KQ3200B型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；烘箱(上海福瑪實驗設備有限公司)；電子天平(奧豪斯儀器上海有限公司)；密封型搖擺式中藥粉碎機(無錫市江成液壓機械公司)

試劑 無水碳酸鈉基準試劑(天津市化學試劑批發(fā)公司)；鄰苯二甲酸氫鉀(天津市光復科技發(fā)展有限公司)；氫氧化鈉(分析純,成都市科龍化工試劑廠)；鹽酸(分析純,廣東省精細化學品工程技術研究開發(fā)中心)；酚酞(成都市科龍化工試劑廠)；溴甲酚綠 (成都市科龍化工試劑廠)；甲基紅(成都市科龍化工試劑廠)；甲基橙(廣州化學試劑廠)；95%乙醇(分析純，成都市科龍化工試劑廠)

樣品 狗肝菜，購自崇左菜市場

1.2 實驗方法。采用單因素實驗、正交實驗,探究乙醇濃度、料液比、超聲波提取時間及溫度對狗肝菜中總有機酸提取量的影響規(guī)律，利用酸堿滴定法對其總有機酸的含量進行測定，最終確定最佳提取條件。

工藝流程：采集狗肝菜→清洗→烘干→粉碎→乙醇浸潤→超聲波振蕩→總有機酸含量測定

2.結果與分析

2.1 單因素實驗。

2.1.1 不同乙醇濃度對提取效果的影響。準確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取溫度65℃、超聲提取時間30min、料液比﹝狗肝菜葉粉末(g)：乙醇(ml)﹞1:30的條件下，分別在乙醇濃度55%，65%,75%，85%,95%條件下提取，比較不同乙醇濃度對提取物中總有機酸含量的影響，乙醇濃度小于75%之時,有機酸含量隨著乙醇濃度的增大而增加,但超過75%時,總酸含量反而下降。這可能是因為乙醇濃度過小時，不利于有機酸的浸出；濃度過大時，引起產(chǎn)物結構的變化。因此提取有機酸乙醇的濃度為75%時為最優(yōu)。

2.1.2 不同料液比對提取效果的影響。準確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取溫度為65℃、超聲提取時間為30min,乙醇濃度為85%的條件下，分別于液料比為1:10,1:20,1:30，1:40,1:50的條件下提取，比較不同料液比對提取物中總有機酸含量的影響，當料液比小于1:30時，有機酸提取率隨著料液比的增加而增加；當料液比大于1:30時，有機酸提取率反而下降。這可能是因為料液比過小時，浸提液太小，從而影響有機酸提?。蝗艏铀^多，不利于后濃縮，因此提取有機酸料液比為1:30時為最優(yōu)。

2.1.3 不同提取時間對提取效果的影響。準確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取溫度65℃、料液比﹝狗肝菜葉粉末(g)：乙醇(ml)﹞1:30,乙醇濃度為85%的條件下，分別超聲提取20min,30min，40min,50min,60min，比較不同超聲提取時間對提取物中總有機酸含量的影響，隨著時間的延長，有機酸提取率先上升后下降。說明有機酸浸出過程與時間密切相關，時間過短，有機酸浸出不充分，但時間過長，可能影響產(chǎn)物結構的變化，從而使提取率降低。因此提取有機酸超聲提取時間為35min時為最優(yōu)。

2.1.4 不同提取溫度對提取效果的影響。準確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取時間30min、料液比﹝狗肝菜葉粉末(g)：乙醇(ml)﹞1:30,乙醇濃度為85%的條件下，分別在超聲提取溫度55℃，60℃,65℃，70℃,75℃條件下提取，比較不同超聲提取溫度對提取物中總有機酸含量的影響，當提取溫度小于70℃時，隨著溫度的升高，狗肝菜有機酸提取率隨之增大；當溫度繼續(xù)升高，有機酸提取率呈下降趨勢。說明溫度升高有利于有機酸的浸出，但溫度過高會影響有機酸的穩(wěn)定性。因此提取有機酸超聲提取溫度為65℃時為最優(yōu)。

2.2 驗證性實驗。精密稱取狗肝菜葉粉末1.0000g3份，在最佳組合條件,即乙醇濃度75%，料液比1:30，提取時間35min，提取溫度65℃的條件下，按擬定方法進行提取，測定，計算含量。在此最佳參數(shù)組合條件下，有機酸含量的平均值為7.03%，提取率大于正交試驗表中的任何一組，為最佳選擇。

2.3 精密度實驗。精密稱取狗肝菜葉粉末1.0000g，在最佳組合條件，即乙醇濃度75%，料液比1:30，提取時間35min，提取溫度65℃的條件下，按擬定方法進行提取，平行測定5次，計算含量。相對標準偏差RSD為1.02%，表明該工藝提取方法測定總酸含量精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性實驗。精密稱取狗肝菜葉粉末1.0000g，在最佳組合條件，即乙醇濃度75%，料液比1:30,超聲時間35min，超聲溫度65℃的條件下,按擬定方法進行提取,分別于0h，2h，4h，6h，8h，12h進行含量測定,計算含量。相對標準偏差RSD為1.35%，表明該工藝提取方法測定總酸含量在12h內(nèi)是穩(wěn)定的。

3.討論

雖然中草藥中有機酸類成分的提取分離及測定方法有很多，但其適用范圍條件各有所差異。要選擇出一種適合的提取分離和分析測定方法,除了要考慮所需要分析的有機酸類成分的結構組成和性質(zhì)外，還需要充分考慮提取物中其它物質(zhì)成分可能對有機酸造成的干擾。因此，在實際應用中要根據(jù)具體情況做具體分析,綜合各因素考慮,以確定出最佳的提取分離及測定方法。