羅嵐 覃彬華 余惠凡

摘要：建立了水靈芝的顯微鑒定方法，對(duì)中藥水靈芝的顯微鑒別方法進(jìn)行了研究。闡述了水靈芝的藥材粉末顯微特征以及莖橫切面的顯微構(gòu)造。此研究可為水靈芝在中藥臨床使用的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和進(jìn)一步開發(fā)利用提供鑒別參考。

關(guān)鍵詞：水靈芝;顯微鑒別;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

中圖分類號(hào)：R28 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-9944（2019）16-0248-03

1引言

水靈芝，是地方中醫(yī)院的傳統(tǒng)民族藥材，俗稱魚膽草、河風(fēng)草、青魚膽草、水黃連等。本品基源是龍膽科獐牙菜屬植物川東獐牙菜（Swertia davidii Franch.）的干燥全草。用于腎炎，濕熱黃疸，肺熱咳嗽，牙齦出血，癰疽腫癤，咽喉腫疼，皰疹，尿路感染，腹瀉痢疾等多種疾病。主要分布于我國(guó)華東、西南地區(qū)，湖北省主要分布恩施市來鳳縣。已陸續(xù)有關(guān)于該藥材化學(xué)成分及其藥理活性的的研究報(bào)道。水靈芝作為特色土家族藥物，在荊州市中醫(yī)醫(yī)院腎病科大量使用，作為治療腎炎的關(guān)鍵藥物，本課題組對(duì)其進(jìn)行了性狀、橫切面及粉末的顯微特征，以及快速薄層鑒定方法，為其深入研究和開發(fā)提供鑒定方法和依據(jù)。

2藥材與試劑

OLYMPUS CX-41顯微鏡（日本奧林巴斯（中國(guó)）有限公司），DLF-50中藥粉碎機(jī)（溫州頂歷醫(yī)療器械有限公司），其他試劑均為分析純。水靈芝于2018年7月購(gòu)買于自湖北省恩施市，經(jīng)中南民族大學(xué)劉新橋副教授鑒定為水靈芝（Swertia davidii Franch.）的干燥全草，植物標(biāo)本存放于荊州市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部。

3方法與結(jié)論

根據(jù)藥材顯微鑒別常規(guī)方法，參照《中國(guó)藥典》（2015年版）四部“顯微鑒別法”項(xiàng)下的方法，對(duì)中藥房所購(gòu)買的水靈芝藥材樣品做徒手切片及粉末制片，分別置光學(xué)顯微鏡下觀察研究，記錄拍照。

取水靈芝的干燥全草，粉碎，顯微鏡下觀察其顯微特征，并進(jìn)行詳細(xì)描述。按照2015版《中國(guó)藥典》四部通則顯微鑒別法，將水靈芝粉末過四或五號(hào)篩，挑少許粉末至載玻片上，加水合氯醛試液用酒精燈加熱透化后，在光學(xué)顯微鏡下觀察研究臨時(shí)裝片的組織結(jié)構(gòu)，描述其特征，并對(duì)具有典型特征的組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行拍照。莖橫切面：取上述水靈芝的莖，切片，顯微鏡下觀察其顯微特征，并進(jìn)行描述。按2015版《中國(guó)藥典》四部通則顯微鑒別法下橫切片法，取水靈芝莖，軟化處理后，徒手切片，切成10～20um的薄片，置載玻片上，采用水合氯醛試液，利用其對(duì)雜質(zhì)的溶解作用，加熱透化后，制成臨時(shí)裝片。在光學(xué)顯微鏡下觀察研究其組織結(jié)構(gòu)，描述其特征，并對(duì)具有典型特征的橫切面進(jìn)行拍照。

3.1水黃連粉末顯微特征

水靈芝粉末黃綠色。纖維長(zhǎng)梭形，細(xì)胞的腔大，紋孔較為明顯，單列或者多列，直徑在10～55um?；ǚ哿A球形、卵形，萌發(fā)孔3個(gè)，成熟的可見孔溝，表面有微細(xì)點(diǎn)狀突起，直徑16～40um（見圖1中的a、b、c）。螺紋導(dǎo)管直徑5～15um（見圖1中的d、e、f）。非腺毛少見，平直或彎曲，直徑約30um，長(zhǎng)約至60um，壁?。ㄒ妶Dl中的j）。

3.2水靈芝莖橫切面組織構(gòu)造

結(jié)果：該藥材顯微切片顯示莖橫切面表皮細(xì)胞排成一列，類圓形，位于棱翅部的表皮細(xì)胞較大，向外突起，外被角質(zhì)層。植物細(xì)胞皮層由數(shù)列至十?dāng)?shù)列薄壁細(xì)胞組成，內(nèi)皮層凱氏點(diǎn)明顯。木質(zhì)部發(fā)達(dá)，導(dǎo)管單個(gè)散在或數(shù)個(gè)相聚，徑向排列。髓發(fā)達(dá)，中部中空（圖2）。

3.3薄層鑒別

取本品各批次粉末2g，加甲醇25mL，超聲提取45rain，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)眉状?mL溶解。作為供試品溶液。另取齊墩果酸對(duì)照品，加甲醇制成每1.0mL/mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3uL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸（10：1.5：0.1，V/V/V）為展開劑，薄層板置展開缸中預(yù)飽和45min，展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖3）。

4討論

水靈芝作為特色土家族藥物，在荊州市中醫(yī)醫(yī)院有長(zhǎng)期應(yīng)用歷史，療效顯著，藥材全草入藥，外觀形狀上無明顯的特征性，筆者對(duì)水靈芝的性狀、組織粉末顯微特征及薄層色譜鑒別方法進(jìn)行研究。結(jié)果表明，該藥材（全草）性狀，橫切面顯微構(gòu)造以結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，薄層色譜以具有1個(gè)清晰的色譜斑點(diǎn)為鑒別特征。本研究為水靈芝的鑒定提供了較全面而可靠的方法，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究制訂奠定了良好基礎(chǔ)。此方法對(duì)于醫(yī)院質(zhì)檢部門快速鑒定水靈芝的真?zhèn)翁峁┓椒ā?/p>