張學(xué)玲

棗莊礦業(yè)集團(tuán)滕南醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，山東微山 277600

肉芽腫性乳腺炎又被稱之為稱肉芽腫性小葉性乳腺炎（GLM），該病屬于非細(xì)菌感染的乳腺慢性炎癥性疾病，并常發(fā)生于婦女非哺乳期，其特征為外觀呈現(xiàn)出非干酪樣壞死，且病變位置發(fā)生在乳腺小葉，最終呈現(xiàn)出肉芽腫形態(tài)[1]。此外，該病常發(fā)于單側(cè)乳腺，并往乳暈區(qū)以外的其他部位蔓延，當(dāng)患者的病變位置有較大腫時(shí)，可蔓延至整個(gè)乳房[2]。肉芽腫性乳腺炎的主要表現(xiàn)為在乳房位置有腫塊，患者感覺不到痛楚或僅有微痛，這種腫塊質(zhì)硬（直徑1.5～10 cm），且無明顯邊界，表面較粗糙，常和周圍皮膚相粘連，部分患者的皮膚有紅腫表現(xiàn)，嚴(yán)重時(shí)會(huì)累及同側(cè)腋窩的淋巴結(jié)，使其發(fā)生腫大[3]。當(dāng)前，諸多專家學(xué)者認(rèn)為肉芽腫性乳腺炎屬于自身免疫類的疾病，該病的發(fā)生與患者體內(nèi)相關(guān)的各項(xiàng)免疫炎癥指標(biāo)的異常有關(guān)，同時(shí)，該病伴隨的免疫紊亂程度與患者的年齡、生育狀況和乳房炎性結(jié)塊面積也有密切關(guān)聯(lián)[4]。由于該病在國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道與CD68、CD163和IgG4有關(guān)聯(lián)，該研究為探討肉芽腫性乳腺炎的發(fā)生與患者體內(nèi)的CD68、CD163和IgG4的表達(dá)情況的關(guān)系，選擇了2018年2月—2019年2月在該院進(jìn)行手術(shù)治療的38例非哺乳期乳腺炎患者和38例乳腺囊性增生癥患者為研究對(duì)象，通過應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)肉芽腫性乳腺炎和乳腺囊性增生癥患者組織中CD68、CD163、IgG4的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，以期為臨床診斷和治療提供科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對(duì)在該院進(jìn)行手術(shù)治療的38例非哺乳期乳腺炎患者（觀察組）和38例乳腺囊性增生癥患者（對(duì)照組）進(jìn)行研究，納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者的臨床標(biāo)本均通過2位經(jīng)驗(yàn)豐富的臨床病理醫(yī)生聯(lián)合閱片后確診；②患者對(duì)該研究均享有知情權(quán)且經(jīng)過該院倫理委員會(huì)同意；③患者均無乳腺惡性腫瘤，且未見系統(tǒng)性紅斑狼瘡糖尿病和類風(fēng)濕病等自身免疫性疾??；④患者的肝、腎功能正常且未見肺結(jié)核或其他內(nèi)科疾病；⑤患者在術(shù)前半年，無妊娠和哺乳史。其中觀察組患者均經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)證實(shí)為肉芽腫性乳腺炎，38例病例均為女性，年齡范圍 24～50 歲，平均年齡（35.51±6.0 歲），患者均已結(jié)婚，且不是處于妊娠期和哺乳期病發(fā)。病程范圍 1 d～1 年，平均（2.4±0.6）月。 而對(duì)照組患者為乳腺囊性增生癥患者，其在術(shù)后也經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)，38例病例均為女性，年齡范圍26～51歲，平均年齡（36.89±6.4歲），患者均已結(jié)婚，且不是處于妊娠期和哺乳期病發(fā)。病程范圍1周～1年，平均（2.6±0.8）月。兩組患者的基礎(chǔ)性資料（年齡、病程等）相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 方法

對(duì)在該院進(jìn)行手術(shù)治療的38例非哺乳期乳腺炎患者（觀察組）和38例乳腺囊性增生癥患者（對(duì)照組）進(jìn)行研究，通過將上述病例制樣本作為石蠟標(biāo)本，連續(xù)切片，以EiVisionsuper法對(duì)其標(biāo)本免疫組化染色：實(shí)驗(yàn)全過程均設(shè)定陰性對(duì)照。以PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。

免疫組化染色步驟：用二甲苯I、II對(duì)連續(xù)切片后的石蠟標(biāo)本進(jìn)行2次脫蠟（10 min/次）。隨后分別以100%、95%和80%乙醇繼續(xù)漂洗2 min，乙醇漂洗完成后，再用蒸餾水水洗3次。測(cè)定CD68和CD163之前，需要采用pH值為6.0的枸櫞酸緩沖液對(duì)其進(jìn)行高溫高壓抗原修復(fù) （2.5 min），并讓其自然冷卻至室溫，而測(cè)定IgG4之前，需要以pH值為9.0的EDTA緩沖液對(duì)其進(jìn)行微波抗原修復(fù)（10 min），并讓其自然冷卻至室溫。隨后再以PBS對(duì)上述處理過的標(biāo)本進(jìn)行洗2次（3 min/次），并通過 3%的H2O2孵育 10 min來將內(nèi)源性過氧化物酶的活性阻斷，再以PBS將H2O2孵育后的標(biāo)本洗2次（3 min/次），之后加入第一抗體使其覆蓋全部組織，在室溫下孵育1 h后，以PBS洗2次（3 min/次）后滴加抗原放大劑，在室溫下孵育 10 min，繼續(xù)以 PBS 洗 2 次（3 min/次），洗畢后將酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物滴加進(jìn)去，繼續(xù)在室溫下孵育（10 min），孵育完成后，再通過PBS洗2次 （3 min/次），將PBS液甩去后滴加DAB顯色液顯色（5～10 min），在顯微鏡下觀察顯色完成為止。顯色完成后，以自來水將切片沖洗1 min。再以蘇木素復(fù)染細(xì)胞核（1～3 min）。隨后依次用自來水洗、1%HCL分化，分化完成后再以自來水沖洗5 min。隨后將切片進(jìn)行脫水和透明處理后，以中性樹膠封固并測(cè)定。

1.3 陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)

①CD68、CD163判定：陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)介于20%～49%之間為陽性 （+），陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)介于50%～74%之間視為中等陽性 （++），陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)超過75%視為強(qiáng)陽性（+++）。否則視為陰性（+/-）。

②IgG4判定：在顯微鏡高倍視野下，選擇10處陽性細(xì)胞最為密集地方，取其平均值，其中低于10HPF視作陰性（+/-），大于10且小于30HPF視作陽性（+），超過 30 視作強(qiáng)陽性（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

以SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)該文數(shù)據(jù)進(jìn)行分析與計(jì)算。其中計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，組間差異比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各炎癥細(xì)胞的陽性表達(dá)率

在CD68、CD163和IgG4中的陽性表達(dá)率分別為86.84%、89.47%和31.58%，其均顯著高于對(duì)照組，兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。見表1。

表1 各炎癥細(xì)胞的陽性表達(dá)率[n(%)]

2.2 各炎癥細(xì)胞的表達(dá)量情況

在炎性細(xì)胞（CD68、CD163和 IgG4）的表達(dá)量方面，觀察組顯著高于對(duì)照組，兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。 見表 2。

表2 各炎癥細(xì)胞的表達(dá)量情況（±s）

表2 各炎癥細(xì)胞的表達(dá)量情況（±s）

指標(biāo) 觀察組 對(duì)照組 t值 P值C D 6 8（個(gè)）C D 1 6 3（個(gè)）I g G 4（A v/m L）4.3 0±1.7 1 4.2 1±1.3 2 6.7 8±6.4 3 1.8 3±1.0 5 0.6 3±0.3 9 3.6 1±1.4 1 1 3.9 7 3 1 4.0 9 6 1 6.9 7 5 0.0 1 6 0.0 1 1 0.0 0 9

3 討論

肉芽腫性乳腺炎在臨床上又被稱之為非特異性肉芽腫性小葉性乳腺炎，其屬于比較少見的良性乳腺炎癥性疾病，往往在婦女非哺乳期發(fā)病[5]。由于該病不會(huì)造成疼痛，且僅在乳房出有腫塊發(fā)生，患者羞于啟齒而不被重視，隨著在近年來，該病的發(fā)病率有明顯上升趨勢(shì)，且人們對(duì)自身的健康有了更高的要求，該病才逐漸受到了患者的重視[6]。

人體體內(nèi)有許多巨噬細(xì)胞存在，其是維持免疫系統(tǒng)正常工作的基本效應(yīng)器，因此在炎癥反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用，如維持組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)，消除病原體和修復(fù)組織[7]。CD68作為巨噬細(xì)胞的表面標(biāo)記分子，而CD163能夠特異性標(biāo)記M2型巨噬細(xì)胞表面，單核/巨噬細(xì)胞的激活是發(fā)生慢性炎癥反應(yīng)的重要標(biāo)志，對(duì)于誘發(fā)肉芽腫性乳腺炎疾病的患者來講，若在其病理切片中觀察到大量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，進(jìn)一步探討CD68和CD163是否參與上述疾病的誘發(fā)具有重要意義[8]。IgG4是一種Th2細(xì)胞比較依賴的球蛋白，其Fc段能夠和肥大細(xì)胞相結(jié)合，從而進(jìn)一步參與機(jī)體變態(tài)反應(yīng)，如人體內(nèi)發(fā)生的各種炎癥性疾?。ǜ鼓ず罄w維化、自身免疫性胰腺炎、硬化性膽管炎和炎性假瘤）都與IgG4參與的相關(guān)自身免疫性紊亂有密切關(guān)聯(lián)。尤其是與IgG4相關(guān)硬化性疾病在臨床上屬于一類臨床綜合征，可在人體內(nèi)的各個(gè)器官中發(fā)生，且發(fā)病特征為，出現(xiàn)腫塊病變的器官會(huì)誘發(fā)大量淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞出現(xiàn)浸潤(rùn)，甚至造成間質(zhì)硬化，血清中的IgG4含量上升。

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，觀察組患者CD68+++、CD163+++、IgG4+病例數(shù)分別為：10 例 (26.31%)、5 例(13.16%)、12例(31.58%)，均明顯優(yōu)于對(duì)照組對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)（χ2=39.022、48.990、16.292，P=0.018、0.009、0.025＜0.05)，這與孔成[9]相似研究結(jié)果一致，其研究結(jié)果顯示，患者CD68+++、CD163+++、IgG4+ 率分別為 25.00%、14.18%、30.50%，均與該文研究結(jié)果相似。觀察組CD68、CD163、IgG4 分別為：（4.30±1.71)個(gè)、（4.21±1.32)個(gè)、（6.78±6.43)Av/mL，均明顯優(yōu)于對(duì)照組（t=13.973、14.096、16.975，P=0.016、0.011、0.009＜0.05)。 這符合張盼盼等[10]相似研究中得出的CD68、CD163、IgG4分別為：4.18、4.55、6.09 的數(shù)據(jù)，具有佐證意義。

綜上所述，CD68作為巨噬細(xì)胞的表面標(biāo)記分子，而CD163能夠特異性標(biāo)記M2型巨噬細(xì)胞表面，二者在肉芽腫性乳腺炎患者中均具有較高的陽性表達(dá)率，證實(shí)肉芽腫性乳腺炎與CD68和CD163具有密不可分的聯(lián)系。另外，IgG4在肉芽腫性乳腺炎患者呈現(xiàn)出低表達(dá)狀態(tài)，其在肉芽腫性乳腺炎患者中應(yīng)該是選擇性表達(dá)，其在診斷肉芽腫性乳腺炎只可作為參考，因此，CD68、CD163和IgG4聯(lián)合檢測(cè)可作為診斷肉芽腫性乳腺炎患者的依據(jù)，應(yīng)用價(jià)值較高。