羅萬(wàn)蓉

慢性乙型肝炎(CHB)為我國(guó)常見(jiàn)感染性肝病，乙肝病毒e抗原(HBeAg)陽(yáng)性CHB患者具有病程短、病毒復(fù)制活躍等特點(diǎn)，使其治療較為困難[1]。聚乙二醇干擾素(PEG-IFN)是一種強(qiáng)效抗病毒藥物，能抑制病毒復(fù)制，具有較高的HBeAg血清轉(zhuǎn)換率，對(duì)控制復(fù)發(fā)有積極意義[2]。然而，經(jīng)PEG-IFN治療后，仍有部分患者應(yīng)答不佳，未能獲得良好療效[3]，故及時(shí)評(píng)估患者病情發(fā)展及療效非常重要。但CHB患者治療周期較長(zhǎng)，且HBeAg血清轉(zhuǎn)換轉(zhuǎn)化情況在治療短期難以觀察，因此，探尋一種及時(shí)的療效評(píng)估指標(biāo)很有必要。唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素7(Siglec-7)是一種主要表達(dá)于自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)表面的跨膜蛋白，能調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性，與NK細(xì)胞功能密切相關(guān)。而NK細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)重要組成部分，在抗病毒感染中發(fā)揮重要作用[4]?；诖?，本研究分析了Siglec-7評(píng)估PEG-IFN治療CHB的效果，探討其作為預(yù)測(cè)或評(píng)價(jià)PEG-IFN治療CHB效果指標(biāo)的可行性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 回顧性分析2016年3月～2018年3月在醫(yī)院行PEG-IFN治療的68例CHB患者（CHB組）臨床資料，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》[5]的 CHB 診斷標(biāo)準(zhǔn)；HBeAg陽(yáng)性；年齡18～65歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并丙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒等其他病毒感染；合并惡性腫瘤；伴自身免疫性肝炎、肝硬化等其他肝??；吸毒、酗酒、癲癇史；精神疾病史者。另將醫(yī)院同期62例體檢健康者作為對(duì)照組。CHB組女性23例，男性45例；年齡 28～54（41.54±8.21）歲。 對(duì)照組女性 25 例，男性37 例；年齡 27～54（40.29±8.14）歲。 兩組年齡、性別比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

1.2 治療方法及療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) CHB組均給予Peg-IFNα-2a 皮下注射，180 μg/次，1 次/w，連續(xù)治療48 w后，評(píng)價(jià)臨床療效。顯效：HBeAg陰轉(zhuǎn)伴血清轉(zhuǎn)換，且HBV DNA陰轉(zhuǎn)；有效：HBeAg陰轉(zhuǎn)，而血清未轉(zhuǎn)換，HBV DNA陰轉(zhuǎn)；無(wú)效：未達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)或病情加重。根據(jù)臨床療效評(píng)價(jià)結(jié)果[6]，將顯效與有效者納入有效組，無(wú)效者納入無(wú)效組。

1.3 檢測(cè)指標(biāo) （1）HBeAg陰轉(zhuǎn)率和血清轉(zhuǎn)換率、HBV DNA陰轉(zhuǎn)率：治療48 w后，使用化學(xué)發(fā)光法測(cè)量患者空腹血清HBeAg、e抗體(抗-HBe)水平，以 HBeAg 0～1 lgs/拷貝為陰性， 抗 -HBe＞1 lgs/拷貝為陽(yáng)性，以HBeAg陰性伴抗-HBe陽(yáng)性為血清學(xué)轉(zhuǎn)換；利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)測(cè)量HBV DNA水平，以 HBV DNA＜500拷貝/ml為陰性。（2）NK 細(xì)胞計(jì)數(shù)：通過(guò)聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法（試劑購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司）獲得患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，采用FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）檢查NK細(xì)胞計(jì)數(shù)。（3）Siglec-7在NK細(xì)胞表面表達(dá)情況：將聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法獲得的單個(gè)核細(xì)胞，加入抗-Siglec-7抗體 （購(gòu)自美國(guó)eBioscience公司），檢測(cè)Siglec-7在NK細(xì)胞表面陽(yáng)性表達(dá)率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CHB組治療效果 CHB組治療后，HBeAg陰轉(zhuǎn) 28例（41.18%），HBeAg血清轉(zhuǎn)換 22例（32.35%），HBV DNA陰轉(zhuǎn)40例（58.82%）；治療效果，顯效21例（30.88%），有效 7例（10.30%），共 28例（41.18%）納入有效組；無(wú)效40例（58.82%），納入無(wú)效組。

2.2 兩組NK細(xì)胞計(jì)數(shù)和Siglec-7表達(dá)情況比較治療48 w后，CHB組NK細(xì)胞計(jì)數(shù)、Siglec-7在NK細(xì)胞表面陽(yáng)性表達(dá)率均較治療前升高（P＜0.05），但均低于對(duì)照組（P＜ 0.05，表 1）。

表1 兩組NK細(xì)胞計(jì)數(shù)和Siglec-7表達(dá)情況比較（%）

2.3 有效組與無(wú)效組NK細(xì)胞計(jì)數(shù)和Siglec-7表達(dá)情況比較 治療前，有效組NK細(xì)胞計(jì)數(shù)、Siglec-7在NK細(xì)胞表面陽(yáng)性表達(dá)率均高于無(wú)效組（P＜0.05）；治療48 w后，兩組NK細(xì)胞計(jì)數(shù)、Siglec-7在NK細(xì)胞表面陽(yáng)性表達(dá)率均較治療前升高（P＜0.05），且有效組均高于無(wú)效組（P＜ 0.05，表 2）。

表2 有效組與無(wú)效組NK細(xì)胞計(jì)數(shù)和SigIec-7表達(dá)情況比較（%）

3 討論

PEG-IFN為目前治療CHB的常用抗病毒藥物，可與受乙型肝炎病毒(HBV)感染的肝細(xì)胞結(jié)合，激活肝細(xì)胞內(nèi)抗病毒蛋白及其激酶合成，分解病毒mRNA，發(fā)揮抑制病毒復(fù)制作用[7]。但治療無(wú)效者并不少見(jiàn)，因此，尋找及時(shí)評(píng)估CHB治療效果指標(biāo)是研究熱點(diǎn)。NK細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)重要組成部位，可識(shí)別并殺傷病毒感染細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞，也能參與CHB患者免疫功能，且隨CHB患者免疫功能的抑制而降低[8]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，Siglec-7作為NK細(xì)胞表面抑制性分子，在NK細(xì)胞活化、功能較強(qiáng)的亞群中可高表達(dá)，與NK細(xì)胞功能呈顯著相關(guān)性[9]。對(duì)此，本研究就Siglec-7在NK細(xì)胞表面表達(dá)情況評(píng)估PEG-IFN治療CHB效果的可行性展開(kāi)分析，以探尋預(yù)測(cè)CHB治療效果的新型指標(biāo)，為臨床制定及調(diào)整CHB治療方案提供新思路。

本研究結(jié)果顯示，CHB組治療后，HBeAg陰轉(zhuǎn)率 41.18%，HBeAg血清轉(zhuǎn)換率 32.35%，HBV DNA陰轉(zhuǎn)率58.82%，但治療無(wú)效達(dá)58.82%。提示PEGIFN治療效果仍需加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)治療無(wú)效者。另外，CHB組治療前后NK細(xì)胞計(jì)數(shù)和Siglec-7在NK細(xì)胞表面陽(yáng)性表達(dá)率均低于對(duì)照組，分析其原因可能與CHB患者受HBV感染，免疫系統(tǒng)嚴(yán)重受損，NK細(xì)胞數(shù)量顯著下降，且細(xì)胞活性也受到抑制，使NK細(xì)胞計(jì)數(shù)、Siglec-7在NK細(xì)胞表面陽(yáng)性表達(dá)率降低。而治療48 w后，CHB組NK細(xì)胞計(jì)數(shù)和Siglec-7在NK細(xì)胞表面陽(yáng)性表達(dá)率均較治療前升高，表明PEG-IFN可在一定程度上控制或緩解病毒感染對(duì)免疫功能的抑制作用，改善機(jī)體免疫功能，使NK細(xì)胞活性增強(qiáng)、數(shù)量增加。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，有效組治療后NK細(xì)胞計(jì)數(shù)、Siglec-7在NK細(xì)胞表面陽(yáng)性表達(dá)率均高于無(wú)效組，證實(shí)Siglec-7表達(dá)情況與PEG-IFN治療CHB效果有關(guān)。治療有效者免疫功能改善效果好，機(jī)體NK細(xì)胞得以顯著上調(diào)，細(xì)胞功能也增強(qiáng)，使NK細(xì)胞計(jì)數(shù)、Siglec-7在NK細(xì)胞表面陽(yáng)性表達(dá)率處于較高水平。不僅如此，有效組治療前NK細(xì)胞計(jì)數(shù)、Siglec-7在NK細(xì)胞表面陽(yáng)性表達(dá)率也高于無(wú)效組，說(shuō)明治療前免疫系統(tǒng)抑制較少者PEG-IFN治療效果好。提示NK細(xì)胞計(jì)數(shù)及Siglec-7表達(dá)情況可作為PEGIFN治療效果的預(yù)測(cè)指標(biāo)，利于臨床盡早選擇合適治療方案。

總之，CHB患者NK細(xì)胞計(jì)數(shù)及Siglec-7陽(yáng)性表達(dá)率均低于健康人群，治療有效者在治療前后均具有較高的NK細(xì)胞計(jì)數(shù)及Siglec-7陽(yáng)性表達(dá)率，臨床可根據(jù)CHB患者NK細(xì)胞計(jì)數(shù)和Siglec-7表達(dá)水平預(yù)測(cè)CHB療效。