李佳 段真真 楊世忠

摘要 ? ?為了解阿克蘇地區(qū)羊無漿體病流行分布情況，采用PCR方法對965份羊抗凝血樣品進(jìn)行了檢測。結(jié)果顯示，羊血液樣品中檢出2種無漿體，分別為嗜吞噬細(xì)胞無漿體和綿羊無漿體，陽性率分別為29.43%（284/965）和33.16%（320/965），差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.12，P>0.05）;舍飼和散養(yǎng)條件下，嗜吞噬細(xì)胞無漿體陽性率分別為4.04%（19/470）和53.54%（265/495）（χ2=284.35，P<0.05），綿羊無漿體陽性率分別為21.49%（101/470）和44.24%（219/495）（χ2=56.31，P<0.05）。調(diào)查結(jié)果表明，阿克蘇地區(qū)是羊無漿體病流行地區(qū)。

關(guān)鍵詞 ? ?無漿體病;羊;流行情況;新疆阿克蘇

中圖分類號 ? ?S826 ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 ? ?A

文章編號 ? 1007-5739（2019）18-0167-01 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）

無漿體病是由無漿體寄生于動物紅細(xì)胞內(nèi)引起的一種血液性疾病[1-3]，廣泛分布于世界各地。我國自20世紀(jì)80年代首次在絨山羊體內(nèi)發(fā)現(xiàn)無漿體病以來，先后在山東、云南、新疆、西藏等地發(fā)現(xiàn)，對養(yǎng)羊業(yè)的可持續(xù)發(fā)展造成了影響[4-5]。羊感染無漿體病后臨床癥狀以高熱、貧血、漸進(jìn)性消瘦、黃疸等為特征，嚴(yán)重感染時會引起死亡[6]。

為了解新疆阿克蘇地區(qū)羊感染無漿體病情況，并為羊無漿體病的防控提供參考，本研究應(yīng)用 PCR方法對阿克蘇地區(qū)轄內(nèi)9個縣市羊感染無漿體病情況進(jìn)行了調(diào)查。

1 ? ?材料與方法

1.1 ? ?主要試劑

全血DNA提取試劑盒、Premix Ex Taq、聚合酶等均購自大連寶生物工程有限公司;引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.2 ? ?試驗方法

1.2.1 ? ?樣品采集。2017—2018年，從新疆阿克蘇地區(qū)9個縣市隨機(jī)采集舍飼和散養(yǎng)羊，無菌采集965份羊抗凝血，提取全血基因組DNA，-20 ℃保存待檢。

1.2.2 ? ?PCR檢測。利用已報道的無漿體引物[7-8]，嗜吞噬細(xì)胞無漿體基因擴(kuò)增程序：第1輪引物EE1/EE2（EE1：5′-TCC-TGGCTCAGAACGAACGCTGGCGGC-3′;EE2：5′-GTCACTG-ACCCAACCTTAAATGGCTG-3′），反應(yīng)條件為：94 ℃預(yù)變性2 min;94 ℃變性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，35個循環(huán)，72 ℃延伸10 min。第2輪擴(kuò)增引物SSAP2f/SSAP2r（SS-AP2f：5′-GCTGAATGTGGGGATAATTTAT-3′;SSAP2r：5′-ATGGCTGCTTCCTTTCGGTTA-3′），反應(yīng)條件與第1輪相同，預(yù)期擴(kuò)增目的片段長度為641 bp。綿羊無漿體特異性擴(kuò)增引物MSP4-F/MSP4-R（MSP4-F：5′-CCGGATCCTTAGCTGAA-CAGGAATCTTGC-3′;MSP4-R：5′-GGGAGCTCCTATGAAT-TACAGAGAATTGTTTAC-3′）擴(kuò)增反應(yīng)條件為：94 ℃預(yù)變性2 min，94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，35個循環(huán)，72 ℃延伸10 min，預(yù)期擴(kuò)增目的片段長度為867 bp。取5 μL擴(kuò)增產(chǎn)物，在1%瓊脂糖凝膠中電泳，在電泳凝膠成像系統(tǒng)儀中拍照。

1.3 ? ?統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 22.0 分析軟件對調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計算羊感染無漿體病情況，采用χ2檢驗比較檢測數(shù)據(jù)的差異。檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。

2 ? ?結(jié)果與分析

2.1 ? ?PCR檢測

對提取的965 份核酸樣品經(jīng)PCR檢測，結(jié)果檢出嗜吞噬細(xì)胞無漿體和綿羊無漿體，檢出片段的大小與預(yù)期一致（圖1、2）。

2.2 ? ?不同縣市羊感染情況

對阿克蘇地區(qū)9個縣市隨機(jī)采集的965份樣品經(jīng)PCR檢測，檢測結(jié)果顯示，9個縣市羊均有感染無漿體病情況，綿羊無漿體陽性率為33.16%（320/965），嗜吞噬細(xì)胞無漿體陽性率為29.43%（284/965），差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.12，P>0.05），綿羊無漿體和嗜吞噬細(xì)胞無漿體混合感染陽性率為15.54%（150/965）（表1）。

2.3 ? ?不同飼養(yǎng)模式羊感染情況

965份核酸樣品經(jīng)PCR檢測，不同飼養(yǎng)模式的羊感染無漿體病的情況見表2?？梢钥闯觯犸暫蜕B(yǎng)條件下嗜吞噬細(xì)胞無漿體陽性率分別為4.04%（19/470）和53.54%（265/495），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=284.35，P<0.05），綿羊無漿體陽性率分別為21.49%（101/470）和44.24%（219/495），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=56.31，P<0.05）。

3 ? ?結(jié)論與討論

目前，基層獸醫(yī)部門檢測無漿體病主要以血液涂片染色鏡檢為主，但是血液涂片染色鏡檢受制于操作人員操作技能、專業(yè)知識儲備和染色技術(shù)，漏檢、誤檢情況較普遍。分子生物學(xué)方法比血液涂片染色鏡檢更為靈敏、特異，適合應(yīng)用于高通量檢測。

本次調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，阿克蘇地區(qū)9個縣市羊均有感染無漿體病情況，綿羊無漿體陽性率（33.16%，320/965）高于嗜吞噬細(xì)胞無漿體（29.43%，284/965），差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.12，P>0.05），綿羊無漿體在各縣市流行情況差異顯著，其中新和縣最高（90.48%，19/21），拜城縣最低（16.88%，13/77），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=40.64，P<0.05）;嗜吞噬細(xì)胞無漿體在各縣市流行情況差異顯著，其中柯坪縣最高（100%，21/21），庫車縣最低（15.86%，56/353），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=85.82，P<0.05）。調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，綿羊無漿體在舍飼和散養(yǎng)條件下陽性率分別為21.49%（101/470）和44.24%（219/495）（χ2=56.31，P<0.05）;嗜吞噬細(xì)胞無漿體在舍飼和散養(yǎng)條件下陽性率分別為4.04%（19/470）和53.54%（265/495）（χ2=284.35，P<0.05）。以上說明舍飼羊飼養(yǎng)管理優(yōu)于散養(yǎng)羊，舍飼羊管理相對集中，與外界環(huán)境接觸較少，定期驅(qū)蟲以及圈舍消毒，被蜱蟲叮咬的風(fēng)險小于散養(yǎng)羊。

4 ? ?參考文獻(xiàn)

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