劉文博 李曉菊

骨巨細(xì)胞瘤是一種潛在惡性或介于良惡性之間的溶骨性腫瘤，約占原發(fā)骨腫瘤4%[1-2]。骨巨細(xì)胞瘤的腫瘤組織主要由多核巨細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞組成，來源于中胚葉細(xì)胞，易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，預(yù)后相對(duì)比較差[3-4]?，F(xiàn)代研究表明骨巨細(xì)胞瘤的發(fā)生與發(fā)展為多階段協(xié)同與多基因參與的結(jié)果，Toll樣受體4(Toll-like Receptor 4，TLR4)可通過識(shí)別病原相關(guān)的分子模式(pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)及內(nèi)源性配體，從而在天然免疫防御中發(fā)揮重要作用[5-6]。髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)是TLR4信號(hào)通路中的一個(gè)關(guān)鍵銜接分子，包括N端的死亡區(qū)(death domain，DD)、中間區(qū)域及C端的Toll區(qū)，其為一種胞質(zhì)可溶性蛋白，在信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用[7-8]。微血管密度(microvessel density，MVD)是指一定體積的組織中微血管的數(shù)量，腫瘤組織的MVD不僅可定量地反映腫瘤血管生長(zhǎng)情況，也能預(yù)測(cè)腫瘤的生物學(xué)行為[9-10]。本文具體探討了骨巨細(xì)胞瘤的MyD88病理學(xué)表達(dá)特征與微血管密度的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

研究時(shí)間為2016年2月到2018年7月，采用回顧性總結(jié)研究方法，選擇安康市中醫(yī)醫(yī)院診治的骨巨細(xì)胞瘤患者101例作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床與病理學(xué)資料完整；病理組織學(xué)證實(shí)為骨巨細(xì)胞瘤；患者簽署了對(duì)本研究的知情同意書；入院前未行任何治療；年齡20～80歲；研究得到了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床與病理學(xué)資料缺項(xiàng)者；妊娠與哺乳期婦女；精神疾病患者。

101例患者中男性61例，女性40例；平均體重指數(shù)為(21.42±2.13)kg/m2；平均病程(1.82±0.82)年；年齡最小26歲，最大78歲，平均年齡(56.22±5.29)歲；組織學(xué)分化：高分化40例，低分化40例，中分化21例；臨床分級(jí)：Ⅰ級(jí)60例，Ⅱ級(jí)30例，Ⅲ級(jí)11例；發(fā)病部位：肱骨9例，橈骨21例，尺骨20例，髂骨10例，股骨30例，脛骨10例，腓骨1例；轉(zhuǎn)移情況：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，肺轉(zhuǎn)移20例，肝轉(zhuǎn)移11例。

1.2 MyD88免疫組化分析

兔抗人MyD88多克隆抗體來自美國(guó)Santa Cruz公司，免疫組化試劑盒來自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。選擇所有患者的瘤組織標(biāo)本與瘤旁組織標(biāo)本，瘤旁組織標(biāo)本為距瘤腫邊緣2 cm以內(nèi)細(xì)胞組織為瘤旁組織。選擇標(biāo)本進(jìn)行10%福爾馬林固定，24 h內(nèi)常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。在顯微鏡100倍視野下觀察切片，每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)區(qū)域，根據(jù)棕黃色陽性信號(hào)的強(qiáng)弱和面積判斷結(jié)果。MyD88于細(xì)胞質(zhì)中顯示陽性信號(hào)，MyD88的陽性細(xì)胞百分比得分為0～4分(0分：陰性或基本不著色定；1分：≤10%；2分：>10～30%為；3分：>30～50%；4分：>50%)，0～1分判定為陰性，2～4分判定為陽性。

石蠟切片標(biāo)本經(jīng)染色后由兩位病理科醫(yī)生獨(dú)立閱片，共同判斷組化結(jié)果。

1.3 MVD計(jì)數(shù)方法

在光學(xué)顯微鏡下觀察所有組織標(biāo)本免疫組化標(biāo)記CD34、CD31的內(nèi)皮細(xì)胞分布，CD31、CD34的陽性染色為棕黃色色素沉積，定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞膜和胞質(zhì)中。MVD計(jì)數(shù)方法參照文獻(xiàn)[11]，每個(gè)高倍鏡下視野面積為0.474 mm2，每平方毫米的血管數(shù)為MVD。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

選擇SPSS 20.00軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)、計(jì)量數(shù)據(jù)采用例數(shù)或者百分比、均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，對(duì)比采用卡方分析與t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Myd88陽性表達(dá)率對(duì)比

MyD88在瘤旁組織中的陽性表達(dá)率為9.9%(10/101)，在瘤組織中的陽性表達(dá)率為66.3%(67/101)，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=58.187，P=0.000)。

2.2 Myd88陽性表達(dá)率與臨床病理資料的相關(guān)性

在瘤組織中，MyD88陽性表達(dá)與臨床分級(jí)、分化情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移都有顯著相關(guān)性(P<0.05)。見表1。

表1 Myd88在骨巨細(xì)胞瘤中的表達(dá)與臨床病理資料的相關(guān)性(例，%)

2.3 MVD對(duì)比

瘤組織中的CD31-MVD與CD34-MVD值都顯著高于瘤旁組織(P<0.05)。見表2。

表2 不同組織的MVD值對(duì)比(個(gè)，

2.4 相關(guān)性分析

在瘤組織中，直線相關(guān)分析顯示MyD88的陽性表達(dá)率與CD31-MVD、CD34-MVD值都呈顯著正相關(guān)性(P<0.05)。見表3。

表3 骨巨細(xì)胞瘤的Myd88病理學(xué)特征與微血管密度的相關(guān)性(n=101)

3 討論

骨巨細(xì)胞瘤是一種常見的骨原發(fā)性腫瘤，早期多為良性腫瘤，但是隨著病程的發(fā)展，惡變的幾率顯著增加[12]。骨巨細(xì)胞瘤的病變主要見于骨骺與四肢，較大的病灶可擴(kuò)展到干骺端，甚至骨干[13]。骨巨細(xì)胞瘤的復(fù)發(fā)率比較高，少數(shù)患者會(huì)發(fā)生肺轉(zhuǎn)移與肝轉(zhuǎn)移[14]。

當(dāng)前骨巨細(xì)胞瘤的具體發(fā)病機(jī)制還不明確，相關(guān)的信號(hào)通路作用機(jī)制也尚待闡明[15]。TLR4/MyD88 信號(hào)通路在許多臟器的腫瘤組織中有表達(dá)，MyD88在二乙基亞硝酸胺誘導(dǎo)肝癌發(fā)生中起著關(guān)鍵性的促進(jìn)作用，具有促進(jìn)腫瘤發(fā)展的關(guān)鍵作用[16]。本研究顯示MyD88在瘤旁組織中的陽性表達(dá)率為9.9%，在瘤組織中的陽性表達(dá)率為66.3%，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明MyD88在骨巨細(xì)胞瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況。

MyD88是TLRs通路中共有一個(gè)關(guān)鍵的轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，在誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子中起著重要作用，其能夠引起多種細(xì)胞因子的釋放，促進(jìn)骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖和抗凋亡作用，從而導(dǎo)致骨巨細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移[17]。本研究顯示在瘤組織中，MyD88陽性表達(dá)與臨床分級(jí)、分化情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移都有顯著相關(guān)性(P<0.05)，提示MyD88陽性表達(dá)可增加骨巨細(xì)胞瘤的惡性程度，提高其轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)性。最近研究證明表達(dá)MyD88的腫瘤細(xì)胞還可主動(dòng)攻擊與之接觸的免疫活性細(xì)胞，肝癌細(xì)胞可通過表達(dá)MyD88傳導(dǎo)信號(hào)殺傷浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞[18]。

本研究顯示瘤組織中的CD31-MVD與CD34-MVD值都顯著高于瘤旁組織(P<0.05)。在腫瘤的生長(zhǎng)過程中，腫瘤細(xì)胞可分泌大量的血管生長(zhǎng)因子，促使腫瘤新生血管的生長(zhǎng)。原發(fā)腫瘤可通過腫瘤血管從宿主獲取營(yíng)養(yǎng)和氧氣，也通過血管向宿主輸送轉(zhuǎn)移細(xì)胞，導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移，為此MVD值能反映腫瘤狀況，且MVD與腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)有很好的相關(guān)性[19-20]。

MyD88陽性的腫瘤細(xì)胞還可主動(dòng)攻擊與之接觸的免疫活性細(xì)胞，同時(shí)腫瘤也可以通過MyD88的高表達(dá)被動(dòng)地逃避機(jī)體免疫監(jiān)控[21]。腫瘤血管形成是腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的重要條件，正常細(xì)胞是非血管新生性的，在癌變過程中，需要經(jīng)過從無血管新生性到血管新生性的表型轉(zhuǎn)變[22]。相關(guān)研究也顯示CD31標(biāo)記MVD高的患者預(yù)后較差，提示腫瘤血管形成在骨巨細(xì)胞瘤的發(fā)病中起到重要作用[23]。本研究直線相關(guān)分析顯示瘤組織的MyD88陽性表達(dá)率與CD31-MVD、CD34-MVD值都呈顯著正相關(guān)性(P<0.05)。相關(guān)研究表明MyD88傳導(dǎo)多種信號(hào)通路介導(dǎo)的促進(jìn)炎癥和致癌作用，從而引發(fā)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、增生、腫瘤免疫抑制細(xì)胞凋亡，從而調(diào)節(jié)MVD值[24-25]。

總之，MyD88在骨巨細(xì)胞瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，與骨巨細(xì)胞瘤的臨床病理特征有一定相關(guān)性，與MVD有顯著相關(guān)性。