王曉庚 劉 林 左 健 張非煜 李若萱

近年來，口腔癌病例不斷增加，并逐漸趨于年輕化，由于口腔癌患者細(xì)胞生長分裂速度較慢，擴(kuò)散轉(zhuǎn)移晚，往往患者確診時(shí)已處在癌癥中晚期，雖然臨床上對(duì)患者予以外科手術(shù)及聯(lián)合藥物治療可取得令人滿意的療效，但其預(yù)后生存情況仍然不樂觀[1]?？谇话┗颊叩?，尤其對(duì)于已經(jīng)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者，治療仍然十分困難[2-3]。因此，積極探討預(yù)后評(píng)估指標(biāo)具有重要意義，本文探討Sp1和miR-92b在口腔癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系分析，取得滿意效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取我院2014年1月至2018年1月行手術(shù)切除的口腔癌組織60例作為研究組；另選取癌旁正?？谇唤M織60例作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者年齡>18歲，口腔癌均經(jīng)病理及組織學(xué)檢查確診，所有病例均具有完整的臨床病理資料；排除標(biāo)準(zhǔn)：排除合并其他惡性腫瘤，如胃癌、食管癌、肝癌等，排除全身系統(tǒng)性疾病；研究組男性38例，女性22例；年齡為28～72歲，平均年齡為(63.14±5.18) 歲;腫瘤直徑平均為(2.25±0.16)cm。癌旁正?？谇唤M織均腫瘤邊緣距離5 cm以上，平均(6.84±1.12)cm，均經(jīng)病理證實(shí)無腫瘤細(xì)胞浸潤，男性39例，女性21例，年齡為26～75歲，平均年齡為(63.25±4.92) 歲，兩組年齡、性別等基本資料上相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性(P>0.05)。

1.2 試劑與方法

試劑：顯色劑為 DAB(廠家：北京中杉金橋生物技術(shù)公司) ，miR-92b inhibitor(廠家銳博生物)兔抗人Sp1單克隆抗體(廠家：北京博奧生物公司)，PV9000 免疫組織化學(xué)二抗試劑盒(廠家：上海嶸葳達(dá)實(shí)業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào):11719386001)。;Lipofectami-ne TM2000轉(zhuǎn)染試劑盒(Invitrogen)。

采用 SP 法免疫組織化學(xué)染色檢測口腔癌組織Sp1和miR-92b水平：先采用10%甲醛將組織進(jìn)行固定后，用石蠟包埋，石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，抗原熱修復(fù)，采用山羊血清進(jìn)行封閉，并滴加一抗、二抗，進(jìn)行HE、DBA染色，復(fù)染，脫水，然后在顯微鏡下觀察。

1.3 陽性判斷

癌組織陽性：在腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)或胞核中呈現(xiàn)棕褐色或棕黃色顆粒者。癌旁正常口腔組織：0 分：無陽性細(xì)胞；1 分：陽性細(xì)胞所占比例30.0%以下；2 分：陽性細(xì)胞所占比例30.0%或以上；根據(jù)陽性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)弱分為:0 分：未出現(xiàn)著色；1 分：淺黃色或者黃色記為；2分：棕黃色；3分：棕褐色。將兩項(xiàng)的評(píng)分相乘，0～1分為陰性，2～6分為陽性。

1.4 觀察指標(biāo)

回顧性分析研究對(duì)象的臨床病例特征。兩組Sp1和miR-92b在組織中的表達(dá)差異，并比較不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度及臨床分期組織Sp1和miR-92b表達(dá)水平；采用Logistic回歸分析口腔癌組織中Sp1和miR-92b表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，比較計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組組織中Sp1和miR-92b表達(dá)情況比較

Sp1和miR-92b在研究組中的陽性表達(dá)率分別為80.00%(48/60)、73.33%(44/60)，明顯高于對(duì)照組陽性表達(dá)率[8.33%(5/60)、11.67%(7/60)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。如表1所示。

表1 兩組組織中Sp1和miR-92b表達(dá)情況比較/%

2.2 不同臨床病理特征口腔癌組織中Sp1和miR-92b表達(dá)情況

口腔癌組織中腫瘤分化類型中～高分化與低～未分化Sp1和miR-92b表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；有36例出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其中91.67%Sp1表達(dá)陽性，86.11%miR-92b表達(dá)陽性。40例臨床分期Ⅲ+Ⅳ，其中90.00%Sp1表達(dá)陽性，85.00%miR-92b表達(dá)陽性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，如表2所示。

表2 不同臨床病理特征口腔癌組織中Sp1和miR-92b表達(dá)情況/%

注：a為與同組不同分化程度相比，χ2=1.79，1.17，P>0.05；b為與同組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相比，χ2=5.94，7.51，P<0.05；c為與不同臨床分期相比，χ2=5.74，8.35，P<0.05。

2.3 Sp1和miR-92b在口腔癌組織中的表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系

采用Logistic回歸分析顯示，口腔癌組織中Sp1和miR-92b表達(dá)水平與臨床病理特征有關(guān)(P<0.05)，如表3所示。

表3 口腔癌患者組織中Sp1和miR-92b水平與臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

口腔癌是1種由多種因素參與的頭頸部較常見的惡性腫瘤之一，而其中主要影響因素包括飲酒、吸煙、營養(yǎng)不良、病毒感染、局部刺激慣和飲食習(xí)等，其中飲酒和吸煙的危險(xiǎn)性最大[4-6]。最近有學(xué)者提出，口腔癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后等各個(gè)方面與免疫相關(guān)的細(xì)胞因子及其相關(guān)的調(diào)節(jié)因子密切相關(guān)[7]。

本研究結(jié)果臨床分期越晚和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Sp1和miR-92b越呈現(xiàn)高陽性表達(dá)，Sp1和miR-92b水平表達(dá)與口腔癌患者臨床病理特征密切相關(guān)。Sp1是廣泛存在于細(xì)胞核中的轉(zhuǎn)錄因子中的一員，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中Sp1起著重要的調(diào)控作用，其在腫瘤患者中均有較高的陽性表達(dá)率[8-9]；microRNA(miRNA) 是1種以特異的序列調(diào)控基因表達(dá)的小非編碼RNA，其參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等多種細(xì)胞生命活動(dòng)過程[10]。已有研究報(bào)道，miR-92b在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)顯著高于正常，其扮演著致癌基因角色，且表達(dá)越高腫瘤的浸潤性和轉(zhuǎn)移性越強(qiáng)[11]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)口腔癌組織Sp1陽性表達(dá)率80.00%(48/60)和miR-92b陽性表達(dá)率73.33%(44/60)均明顯高于癌旁正?？谇唤M織，與上述結(jié)論一致。侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致惡性腫瘤難以治愈的關(guān)鍵生物學(xué)特性之一[12]。既往有研究表明[13]，異常表的炎癥因子達(dá)會(huì)使同源細(xì)胞的致癌潛能提高，也使會(huì)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力提高。陳峰等[14]研究發(fā)現(xiàn)，通過抑制Sp1和miR-92b水平可抑制癌細(xì)胞的生成和轉(zhuǎn)移，同時(shí)使癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力降低。

綜上所述，Sp1和miR-92b在口腔癌組織中的陽性表達(dá)率高，其表達(dá)水平與腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，檢測Sp1和miR-92b對(duì)口腔癌預(yù)后的評(píng)估具有重要意義。