陳彤 吳雯娟 黃婷 丁燕玲 羅燕

摘 ?要：本文建立了一種檢測(cè)豬肉中地克珠利和妥曲珠利殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法。地克珠利和妥曲珠利在10.0 μg/kg～500.0 μg/kg線性范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.996，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。地克珠利和妥曲珠利的檢出限分別為1.22 μg/kg和1.25 μg/kg，在加標(biāo)回收試驗(yàn)中的回收率范圍分別為81.4%～105.0%和86.0%～103.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為3.8%～6.2%。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確，且檢出限低、回收率高，能適用于豬肉中地克珠利和妥曲珠利殘留的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：地克珠利;妥曲珠利;殘留;豬肉;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

中圖分類號(hào)：S859.84 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2019）08-0069-04

地克珠利與妥曲珠利都是三嗪類抗球蟲藥物，具有高效、低毒和廣譜的驅(qū)球蟲特性，在畜牧業(yè)生產(chǎn)中作為抗球蟲藥物被廣泛應(yīng)用[1]。妥曲珠利被動(dòng)物吸收后，通過代謝轉(zhuǎn)化為曲珠利砜和妥曲珠利亞砜。此類藥物的藥效時(shí)間短，實(shí)際生產(chǎn)中需要長(zhǎng)期用藥才能達(dá)到防治的目的，因而此類藥物容易殘留累積，經(jīng)過食物鏈傳遞至消費(fèi)者體內(nèi)，影響消費(fèi)者的健康。在生產(chǎn)中此類藥物的使用具有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)，《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告235號(hào)》規(guī)定了地克珠利在雞肌肉中的最高殘留量為500 μg/kg，妥曲珠利在雞肌肉中的最高殘留量為100 μg/kg[2]。

目前對(duì)地克珠利和妥曲珠利的測(cè)定方法主要有液相色譜法[3-4]和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法[5-6]。液相色譜法存在較多缺陷，測(cè)定時(shí)各種化合物之間的干擾較大，造成各個(gè)目標(biāo)峰的響應(yīng)值相差很大。液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法可以減少色譜峰干擾的問題。但是地克珠利和妥曲珠利類化合物的特征是碎片離子少，因此用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)試該類化合物時(shí)，通常采用母離子的碎片信息定性定量。但母離子定性定量受基質(zhì)效應(yīng)的影響較大，造成測(cè)定結(jié)果發(fā)生偏差。高靈敏度且高選擇性的高分辨質(zhì)譜技術(shù)將能夠大大避免這一弊端。木合他拜爾等[7]利用Q-Exactive技術(shù)測(cè)定了雞肉中地克珠利和妥曲珠利的殘留情況，取得了較低定量限的目標(biāo)物質(zhì)。但該方法的前處理過程對(duì)基質(zhì)的凈化程度不夠，造成目標(biāo)峰受到噪音效應(yīng)干擾。本文對(duì)樣本的提取、凈化以及質(zhì)譜條件進(jìn)行了全面的優(yōu)化，建立了具有高靈敏度和高選擇性的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，同時(shí)快速準(zhǔn)確、定性定量檢測(cè)了豬肉中地克珠利和妥曲珠利藥物。該方法操作簡(jiǎn)便，能大大縮短檢測(cè)周期，靈敏度高且抗干擾能力強(qiáng)，這將為動(dòng)物源性食品中地克珠利和妥曲珠利的快速檢測(cè)提供科學(xué)的依據(jù)和參考。

1 ?材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

本次試驗(yàn)所用儀器為Aglient 1290超高效液相色譜儀、AB Sciex Triple QuadTM 5500 質(zhì)譜儀（美國(guó)AB Sciex公司）、OAN-EVAP 24型全自動(dòng)氮吹儀、TAITEC Mix-VR多管漩渦混合儀、梅特勒AG285型天平、IKAKS501型旋渦混合器、Sigma 3K15冷凍離心機(jī)、Millipor超純水儀、新芝SB-1200DT型超聲波清洗機(jī)和Waters PRIME HLB（6cc 200 mg）固相萃取柱。

1.1.2 藥品與試劑

乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）和甲酸（色譜純），乙腈水溶液中乙腈、水和甲酸的配比為80∶20∶0.2（體積比），復(fù)溶液中甲醇、水和甲酸的配比為10∶90∶0.09（體積比）。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)地克珠利、妥曲珠利和氘代妥曲珠利均為德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司產(chǎn)品。

1.2 樣本制備

取適量新鮮豬肉組織，充分絞碎且均質(zhì)，于-20 ℃避光保存。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

準(zhǔn)確稱取地克珠利、妥曲珠利和氘代妥曲珠利的標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇分別配成1.00 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18 ℃冰箱中保存。再分別移取適量地克珠利和妥曲珠利標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇逐級(jí)稀釋成適當(dāng)濃度的地克珠利和妥曲珠利混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.4 樣本前處理

稱取試樣2.50 g，置于50 mL離心管中，按加標(biāo)水平添加標(biāo)準(zhǔn)液。加乙腈水溶液10 mL，在振蕩器上震蕩10 min，超聲提取5 min， ? 9 000 r/min離心6 min。移取3.5 mL上清液，直接過Waters PRIME HLB固相萃取柱（6cc，200 mg），保持1 s/滴的速度。用玻璃小管收集全部流出液，準(zhǔn)確移出2.5 mL～15 mL帶刻度小管內(nèi)。洗脫液在40 ℃水浴下氮?dú)獯抵辽儆?.5 mL，殘留液用復(fù)溶液定容至1.00 mL，過0.22 μm濾膜后，進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

1.5 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

1.5.1 超高效液相色譜條件

色譜柱：ACQUITYUPLC BEH C18（1.7 μm， 2.1 mm×100 mm）;流動(dòng)相A相為0.1%甲酸水溶液;流動(dòng)相B相為甲醇;柱溫為40 ℃;進(jìn)樣量5.0 μL。梯度洗脫程序見表1。

1.5.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源;掃描方式：負(fù)離子掃描;檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè);電噴霧電壓：5 500 V;離子源溫度：600 ℃;氣簾氣壓力：28 psi;碰撞氣壓力：10 psi;霧化氣壓力：55 psi;輔助加熱氣壓力（GS2）：60 psi。

定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、采集時(shí)間、去簇電壓及碰撞能量見表2，空白基質(zhì)及添加藥物樣本色譜圖見圖1。

2 ?結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

按方法條件設(shè)置儀器參數(shù)，精密量取地克珠利和妥曲珠利混合標(biāo)準(zhǔn)溶液以及氘代妥曲珠利標(biāo)準(zhǔn)溶液適量添加到空白豬肉中，制得地克珠利和妥曲珠利濃度分別為10.0 μg/kg、20.0 μg/kg、5.00 μg/kg、100 μg/kg、500 μg/kg各系列空白添加試樣，按1.4試驗(yàn)方法處理試樣，樣液經(jīng)過液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定，以添加藥物的濃度為橫坐標(biāo)，樣本的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍、回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表3，地克珠利和妥曲珠利基質(zhì)試驗(yàn)的線性范圍在10.0 μg/kg～ 500.0 μg/ kg內(nèi)，各化合物峰面積與其相應(yīng)濃度呈現(xiàn)良好的線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)（r）均在0.996以上。

2.2 方法檢出限確定

以空白豬肉樣本為基質(zhì)，做7個(gè)平行添加試驗(yàn)，地克珠利和妥曲珠利陽性添加濃度均為10.0 μg/kg，按照1.4所述的樣本前處理方法全過程進(jìn)行預(yù)處理和測(cè)定，上機(jī)測(cè)得地克珠利含量X1：9.391 μg/kg、10.39 μg/kg、 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 9.709 μg/kg、9.953μg/kg、9.246 μg/kg、9.718 μg/kg和9.399 μg/kg;測(cè)得妥曲珠利含量X2：9.450 μg/kg、9.051 μg/kg、9.516 μg/kg、9.327μg/kg、8.773 μg/kg、 8.600 μg/kg和8.944 μg/kg。根據(jù)各樣本檢測(cè)值計(jì)算出平均值X及標(biāo)準(zhǔn)偏差Sb，按公式檢出限=（k×Sb×C）/X （k為置信因子，一般取3）計(jì)算，計(jì)算出地克珠利和妥曲珠利方法檢出限分別為1.22 μg/kg和1.25μg/kg。

2.3 回收率測(cè)定

用空白豬肉試樣進(jìn)行3個(gè)水平（10.0 μg/kg、50.0 μg/kg和500.0 μg/kg）的陽性添加回收試驗(yàn)，每個(gè)水平建立6個(gè)平行樣本，按照1.4所述的樣本前處理方法全過程進(jìn)行預(yù)處理和測(cè)定。地克珠利和妥曲珠利的回收率和范圍以及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果見表4。

表4回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果顯示，該方法的回收率較好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較低，地克珠利的回收率范圍為81.4%～105.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為3.8%～6.2%;妥曲珠利的回收率范圍為86.0%～103.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為4.1%～5.9%。方法檢出限低、重復(fù)性好和回收率較好，可準(zhǔn)確進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，并且受基質(zhì)效應(yīng)的干擾較小。

3 ?結(jié)論

本文建立了畜禽肉中地克珠利和妥曲珠利殘留量的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。方法采用乙腈水溶液提取，提取離心后直接過固相萃取小柱進(jìn)行凈化，過柱的要求低，操作簡(jiǎn)單。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法檢出限低、回收率較好和靈敏度高;液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的條件設(shè)置合理，相關(guān)參數(shù)優(yōu)化較佳，該方法能有效消除基質(zhì)效應(yīng)的干擾，大大節(jié)約檢測(cè)時(shí)間和人力物力，從而進(jìn)一步提高檢測(cè)的效率。多種食品樣本的實(shí)測(cè)試驗(yàn)證明，本方法適用于動(dòng)物肌肉組織中地克珠利和妥曲珠利的快速的定性定量檢測(cè)。□□

參考文獻(xiàn)：（7篇，略）