楊 惠，劉穎新，孔興欣，陳 容，蔣梅香，劉利利

(湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，湖南 株洲 412012)

蒼術(shù)-玄參藥對(duì)記載于《施今墨對(duì)藥》[1]，大量臨床實(shí)踐證明，二者配伍使用，對(duì)糖尿病有較好的治療效果[2]。在前期研究中已經(jīng)從藥理和成分分析上證實(shí)了蒼術(shù)-玄參藥對(duì)的降糖作用，且主要降糖有效部位為多糖和正丁醇部位[3]。因此，本研究在前期基礎(chǔ)上，進(jìn)一步篩選出該藥對(duì)降糖有效部位的最優(yōu)配伍比例，并對(duì)降糖機(jī)制進(jìn)行了探討，為蒼術(shù)-玄參藥對(duì)更好地服務(wù)臨床提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器與試劑

鹽酸二甲雙胍片(中美上海施貴寶制藥有限公司，批號(hào)：ABB9058，規(guī)格：0.5 g/片)；鏈脲佐菌素(STZ，美國(guó)Sigma公司)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。三諾安準(zhǔn)血糖儀 (長(zhǎng)沙三諾生物傳感技術(shù)有限公司)；7100型全自動(dòng)生化分析儀 (日本日立公司)；KS-600EI超聲波清洗機(jī)(鄭州萬(wàn)博儀器設(shè)備有限公司)。

1.2 藥材

蒼術(shù)、玄參藥材均購(gòu)自長(zhǎng)沙佰佳藥材公司，經(jīng)湖南中醫(yī)藥高等專科學(xué)校馮傳平教授鑒定，分別是菊科植物茅蒼術(shù)(Atractylodeslancea(Thunb.)DC.)的干燥根莖、玄參科植物玄參(ScrophularianingpoensisHemsl.)的干燥根。蒼術(shù)-玄參藥對(duì)多糖部位、正丁醇部位由本實(shí)驗(yàn)室自制。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)ICR雄性小鼠，體重 20～22 g，由長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，合格證號(hào)：SCXK(湘)2014-0011。

2 方法

2.1 動(dòng)物模型的制備

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，再連續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料4 w，禁食不禁水12 h后，按照120 mg/kg劑量腹腔注射STZ溶液(pH4.4的檸檬酸鈉緩沖液配置)[4-5]，小鼠尾靜脈取血測(cè)定空腹血糖值 (FBG)，空腹血糖≥11.1 mmol/L判定為造模成功。

2.2 分組與給藥

將造模成功的小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為模型組、二甲雙胍組、多糖-正丁醇部位1∶1配伍組(糖醇1∶1組)、多糖-正丁醇部位1∶2配伍組(糖醇1∶2組)、多糖-正丁醇部位2∶1配伍組(糖醇2∶1組)。根據(jù)前期課題組對(duì)蒼術(shù)-玄參藥對(duì)有效部位的研究，確定正丁醇和多糖部位每日給藥量分別為0.29 g/kg、1.93 g/kg，二甲雙胍組0.25 g/kg?？瞻捉M和模型組每天1 g給予0.5%CMC-Na，每日1次，連續(xù)4周。

2.3 指標(biāo)測(cè)定

2.3.1 空腹血糖的測(cè)定實(shí)驗(yàn) 給藥4周后，小鼠尾靜脈取血，采用血糖儀和試紙測(cè)定其空腹血糖(FBG)

2.3.2 按照試劑盒要求對(duì)小鼠肝臟中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的活性進(jìn)行測(cè)定。

2.4 統(tǒng)計(jì)分析

3 結(jié)果

3.1 對(duì)糖尿病小鼠空腹血糖(FBG)的影響

與空白組比較，模型組小鼠的空腹血糖(FBG)水平顯著升高(P<0.01) ;與模型組比較，陽(yáng)性藥物組、多糖-正丁醇各配伍組小鼠空腹血糖(FBG)水平顯著下降(P<0.01，P<0.05)，其中，糖醇2∶1組對(duì)小鼠空腹血糖(FBG)降低更為明顯(P<0.01)。結(jié)果見表1。

組別劑量(g·kg-1)空腹血糖(mmol·L-1)給藥前給藥4周后空白組—7.25±1.347.53±1.22模型組—19.85±4.08##22.76±4.17##陽(yáng)性藥物組0.2519.47±3.82##14.95±3.15??糖醇1∶1組2.2219.63±4.53##17.86±3.97?糖醇1∶2組2.51 19.69±3.51##17.71±4.09?糖醇2∶1組4.15 19.37±4.32##15.60±3.61??

注：與空白組比較：#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較：*P<0.05，**P<0.01，下同。

3.2 對(duì)糖尿病小鼠肝臟抗氧化能力的影響

與空白組比較，模型組小鼠肝臟中SOD和GSH-Px的活性顯著降低，MDA水平顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，多糖-正丁醇部位配伍組均能顯著升高小鼠肝臟中SOD和GSH-Px的活性，降低MDA含量(P<0.05，P<0.01)。其中，糖醇2∶1組對(duì)MDA水平的降低更為顯著(P<0.01)。結(jié)果見表2。

表2 蒼術(shù)-玄參有效部位配伍對(duì)糖尿病小鼠SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影響

4 討論

糖尿病是一種慢性代謝性疾病，以胰島素抵抗、慢性炎癥及胰島β細(xì)胞受損為主要特征。近年來(lái)，糖尿病發(fā)病率有逐年增加的趨勢(shì)，對(duì)人類健康產(chǎn)生了嚴(yán)重的危害[6]。鏈脲佐菌素(STZ)屬于廣譜抗生素，能特異性地?fù)p傷胰島β細(xì)胞而誘發(fā)糖尿病。同時(shí)，STZ對(duì)機(jī)體毒性較小，動(dòng)物存活率高。因此，常用于糖尿病動(dòng)物模型的制備[7]。

中藥藥對(duì)是方劑配伍的核心。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)于中藥藥對(duì)的配伍研究主要集中在飲片-有效部位-有效成分配伍三個(gè)層次[8]，而有效部位和有效成分配伍則更容易闡明藥對(duì)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制[9]。因此，從經(jīng)典藥對(duì)的有效組分入手，并進(jìn)行配伍優(yōu)化研究已成為闡釋藥對(duì)配伍機(jī)制科學(xué)內(nèi)涵的重要途徑[8]。蒼術(shù)-玄參藥對(duì)出自《施今墨對(duì)藥》，臨床上二者相須為用，對(duì)糖尿病有良好的治療效果[10]。在前期研究中發(fā)現(xiàn)，該藥對(duì)的多糖和正丁醇部位具有良好的降糖作用。因此，本研究從有效部位配伍入手，考察多糖和正丁醇降糖有效部位的最優(yōu)配比，并探討可能的降糖作用機(jī)制。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，多糖-正丁醇部位各比例配伍均能降低糖尿病小鼠的空腹血糖。其中，糖醇2∶1配伍組降糖作用最為顯著，糖醇1∶1和1∶2配伍組在降糖作用和對(duì)糖尿病小鼠肝臟抗氧化能力的影響上程度相當(dāng)，這在一定程度上可以反映出正丁醇比例的變化對(duì)糖尿病小鼠治療作用的影響關(guān)系不大。

現(xiàn)代研究證明，機(jī)體處于高糖狀態(tài)時(shí)所產(chǎn)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)可以使機(jī)體自身的抗氧化體系失衡[11]，體內(nèi)的自由基會(huì)造成生物膜的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，形成脂質(zhì)過(guò)氧化物[12]，脂質(zhì)過(guò)氧化的主要中間產(chǎn)物MDA的水平可以反映出機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接的反映出細(xì)胞受損程度[13]。GSH-Px可還原MDA，使體內(nèi)MDA 的含量降低從而起到抵御氧化損傷的作用。SOD作為體內(nèi)具有清除自由基功能的酶，可以降低自由基對(duì)機(jī)體的氧化脅迫，其活性能夠反映出機(jī)體的抗氧化能力[14]。因此，可以通過(guò)對(duì)體內(nèi)SOD，GSH-Px活性和MDA水平的測(cè)定來(lái)考察機(jī)體的抗氧化能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組小鼠肝臟組織MDA水平顯著升高，SOD和GSH-Px的活性顯著降低，表明糖尿病小鼠的抗氧化能力下降。與模型組比較，蒼術(shù)-玄參藥對(duì)的多糖和正丁醇部位配伍各比例均能顯著增強(qiáng)GSH-Px和SOD活性，而對(duì)MDA水平降低顯著。這提示多糖-正丁醇部位配伍在一定程度上能夠提高鏈脲佐菌素(STZ)所致糖尿病小鼠的抗氧能力。這可能是蒼術(shù)-玄參藥對(duì)多糖和正丁醇提取部位配伍降糖作用的機(jī)制之一。