張晟杰，高 玲，李直兵，梁 進(jìn)，金純純，李 嘉

(貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025)

慢性前列腺炎(chronic prostatitis，CP)是一種與復(fù)發(fā)性下尿路感染有關(guān)，繼發(fā)于駐留在前列腺內(nèi)的局灶性尿致病菌或慢性盆腔疼痛綜合征(CPPS)，好發(fā)于中老年男性，其特征是盆腔或會陰疼痛，前列腺組織和分泌物可能檢測到炎癥變化[1]。研究顯示[2]，我國CP的主要病因為飲酒、辛辣食物、久坐、長時間憋尿、尿道炎、焦慮等，且與個人生活方式、環(huán)境因素、心理因素息息相關(guān)。目前還沒有統(tǒng)一、規(guī)范的治療方法，因此尋求有效的治療方案越來越重要。免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)占血清Ig的75%，在機體免疫中起保護作用，研究顯示[3]，在晚期前列腺癌患者中可以檢測到多種IgG反應(yīng)，提示IgG可用于檢測患前列腺癌的風(fēng)險。鋅元素(Zn)一直被認(rèn)為與前列腺的健康有關(guān)，主要作用是維持前列腺組織結(jié)構(gòu)和生理功能處于穩(wěn)定狀態(tài)，前列腺液中Zn的含量對于自身抗前列腺炎癥反應(yīng)具有十分重要的臨床意義。本研究觀察簡易埋線關(guān)元穴和腎俞穴對瓊脂所致慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠的前列腺勻漿IgG和血清Zn的影響，以探討其治療慢性前列腺炎的機制。

1 材料

1.1 實驗動物與分組

SPF級SD雄性大鼠40只，9～10周齡，體重(280±350)g，由貴陽中醫(yī)學(xué)院針灸推拿學(xué)院實驗中心提供。隨機分籠飼養(yǎng)，室內(nèi)溫度控制在20～25 ℃之間，濕度控制在40%～50%，明暗周期12 h，定時定量喂養(yǎng)，由專人進(jìn)行喂養(yǎng)及清潔大鼠生存環(huán)境。本研究符合《關(guān)于善待動物的指導(dǎo)性意見》的相關(guān)規(guī)定。

1.2 主要試劑

10%中性緩沖福爾馬林固定液(廣州妙博生物科技有限公司提供)；0000號鉻制羊腸線(上海金環(huán)醫(yī)療有限公司)；標(biāo)準(zhǔn)馬抗人IgG血清(抗體)(北京生物制品研究所生產(chǎn))；pH7.2PBS(00000203上海北諾生物科技有限公司)；瓊脂粉(A1296-500G上海北諾生物科技有限公司)；IgG試劑盒(IC-IgG-Ch 上海鈺博生物科技有限公司)。

1.3 主要儀器

6號一次性注射針頭(浙江康德萊醫(yī)療器械公司)；一次性埋線針(濟南思卓醫(yī)療器械有限公司)；肝素抗凝管(JC-051上海優(yōu)予生物科技有限公司)；kimble微量勻漿器(749540-0000 美國Kimble)；離心機(ROTOFIX32A 德國Hettich)； 3 mm打孔器(上海玉研科學(xué)儀器有限公司)；10 μL微量加樣器(BL-HC-0570 上海博光生物科技有限公司)；紫外可見分光光度計(E0955 上海碧云天生物技術(shù)有限公司)。

1.4 實驗方法

1.4.1 慢性前列腺炎大鼠造模和分組 定時定量喂養(yǎng)1周后，觀察大鼠無異常即可開始進(jìn)行造模。將40只大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型對照組、腎俞組、關(guān)元組，共4組，每組10只，除假手術(shù)組外，其余各組大鼠均采用文獻(xiàn)方法[4]造模，即從前列腺雙側(cè)背葉各注射滅菌的20 g/L(大鼠質(zhì)量/注射劑量)瓊脂溶液0.1 mL，假手術(shù)組于同樣部位、同樣方法注入9 g/L(大鼠質(zhì)量/注射劑量)氯化鈉溶液0.2 mL，隨時觀察大鼠排尿情況和前列腺肉眼改變情況，直至造模成功。

1.4.2 埋線治療 造模成功24 h后，各組開始進(jìn)行簡易穴位埋線，每1周埋線1次，共4周，穴位的選取與操作依據(jù)《實驗針灸學(xué)》及華興邦研制的大鼠穴位圖譜，取穴如下：腎俞穴位于第二腰椎下兩旁，斜刺約6 mm；關(guān)元穴位于臍下約25 mm處，直刺約3 mm。埋線：①消毒穴位及周圍皮膚用碘伏棉簽消毒；②進(jìn)針：選用9號埋線針，裝上3-0號羊腸線，長度約0.2～0.3 cm；③埋線：穴位埋線1周1次，4周為1個療程。

1.4.3 取材 飼養(yǎng)36 d后，準(zhǔn)備取材。大鼠麻醉成功后，背部固定，打開腹腔，用采血針從腹主動脈采血至肝素抗凝管中，搖勻靜置，待析出血清后將血清吸出，置于冰箱-20 ℃溫度下保存；另取出大鼠前列腺備用。

1.4.5 觀察大鼠一般情況 從造模第1天開始，觀察SD大鼠行為、攝食、飲水、小便性狀、體征等情況。

1.4.6 采用單項免疫擴散法測定前列腺勻漿IgG含量 稱重大鼠前列腺質(zhì)量，每100 mg加生理鹽水1 mL，放入勻漿器中，制成勻漿，離心取上清液。

1.4.7 采用原子吸收分光光度法測定Zn含量 測定前將-20 ℃保存的血清置室內(nèi)溫度復(fù)融混勻，4 ℃，3 000 R/min，離心5 min，取上清液，離心。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般情況

假手術(shù)組大鼠活動度高，體重正常穩(wěn)定，飲食引水量正常，小便澄清，無白濁或異樣，解剖后大鼠前列腺組織柔軟、潤澤、無粘連；與假手術(shù)組相比，模型對照組大鼠活動度明顯降低，飲水量減少，小便渾濁且量少，解剖后大鼠前列腺水腫、充血、色澤較暗黃且有較多硬結(jié)、粘連；與模型對照組相比，腎俞組和關(guān)元組大鼠活動度明顯增高，飲水量較多，小便渾濁度低，解剖后大鼠前列腺呈暗紅色，無硬結(jié)，見少量軟性結(jié)節(jié)，粘連減少。

2.2 各組大鼠前列腺勻漿中 IgG含量對比

與假手術(shù)組對比，模型對照組大鼠前列腺勻漿中IgG含量增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型對照組相比，腎俞組和關(guān)元組的前列腺勻漿IgG含量均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。腎俞組與關(guān)元組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1、圖1。

表1 腺勻漿中IgG含量對比

組別動物數(shù)(只)IgG(mg·L-1)假手術(shù)組10106.62±11.43模型對照組10211.21±20.63?腎俞組10172.47±22.26△關(guān)元組10163.39±25.67△

注：假手術(shù)組對比，*P<0.05；與模型對照組對比，△P<0.05。

圖1 各組大鼠前列腺勻漿中 IgG含量柱狀圖

2.3 各組大鼠血清Zn含量對比

與假手術(shù)組對比，模型對照組的血清Zn含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與模型對照組對比，腎俞組合關(guān)元組的血清Zn含量均增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；腎俞組與關(guān)元組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2、圖2。

表 2 各組大鼠血清鋅含量對比

組別動物數(shù)(只)Zn含量(μmol·L-1)假手術(shù)組100.184±0.036模型對照組100.019±0.006?腎俞組100.065±0.021△關(guān)元組100.071±0.017△

注:與假手術(shù)組對比，*P<0.05；與模型對照組對比，△P<0.05。

圖2 各組大鼠血清鋅含量對比柱狀圖

3 討論

祖國醫(yī)學(xué)中并沒有慢性前列腺炎(CP)這一病名記載，但根據(jù)其臨床癥狀及體征，慢性前列腺炎應(yīng)屬中醫(yī)學(xué)“淋證”“癃閉”“精濁”等范疇。本病病位在下焦，根據(jù)經(jīng)絡(luò)循行路線，主要涉及腎、膀胱、肝、脾胃等臟腑。臨床上以尿頻、尿急、尿痛、小腹和會陰部疼痛不適為主癥，《諸病源候論》曰：“諸淋者，由腎虛而膀朧熱故也……腎虛則小便數(shù)，膀朧熱則水下澀、數(shù)而且澀，則淋瀝不宣?！盵5]說明CP的發(fā)生與腎虛及膀胱濕熱密切相關(guān)；腎氣虧虛、固攝無權(quán)，則小便多；膀胱濕熱可見尿頻、尿急、尿痛等癥。臨床上CP往往被認(rèn)為是由多種因素引起的一組綜合征，一般以抗生素治療為主，但前列腺腺泡與微循環(huán)間存在由類脂膜構(gòu)成的前列腺-血屏障，很大程度上抑制了抗生素對組織和體液的滲透，從而降低了治療效果。本課題組選用腎俞、關(guān)元二穴進(jìn)行穴位埋線治療，腎俞穴以補腎固精、補益腎氣為治本之法[6]，關(guān)元穴位于下腹部，可培補元氣、導(dǎo)赤通淋、通利膀胱，達(dá)到標(biāo)本兼治的效果[7]。CP病程長，病變部位較深，穴位埋線包括傳統(tǒng)的針刺療法與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的組織生化療法，通過羊腸線異性蛋白對穴位的持續(xù)刺激，可改善局部血液循環(huán)，調(diào)整臟腑經(jīng)絡(luò)功能，提高機體免疫力，減輕CP癥狀[8]。本研究結(jié)果顯示，與模型組相比，腎俞組和關(guān)元組的大鼠活動度、飲水量、小便渾濁度都有改善，前列腺組織呈暗紅色，僅有少量軟性結(jié)節(jié)，粘連減輕，提示穴位埋線腎俞穴和關(guān)元穴可有效緩解大鼠CP癥狀。

免疫球蛋白是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，其中IgG反映了機體的整體免疫水平。BRETT B[3]在研究中對前列腺癌患者、CP患者和正常男性的血清進(jìn)行對照檢測，結(jié)果顯示在前列腺癌患者、CP患者中，前列腺相關(guān)抗原普遍被IgG識別，提示前列腺炎癥可能與前列腺癌有關(guān)，并提示IgG在評估患者前列腺癌風(fēng)險方面具有實用價值。另有實驗證實，慢性炎癥細(xì)胞常見于前列腺的早期癌前病變附近，所以，阻止CP的病理進(jìn)展極其重要[9]。在本課題研究中，與假手術(shù)組對比，模型對照組大鼠前列腺勻漿中IgG含量增高(P<0.05)，表明在前列腺炎癥時的局部免疫應(yīng)答能力對前列腺炎的診斷有一定的價值，而埋線腎俞穴和關(guān)元穴均能降低前列腺液中IgG的含量，這可能是穴位埋線治療慢性前列腺炎的作用機制之一。

Zn是人體中重要的微量元素和免疫防御因子，在CP的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用，可以活化并提高前列腺組織的的抗菌能力，參與相關(guān)的殺菌過程[10]。有研究顯示，前列腺分泌物和精液中鋅的含量高于其他器官和體液中鋅的含量[11，12]，CP患者前列腺鋅含量高與前列腺抑菌活性相關(guān)，且呈下降趨勢，說明鋅在維持前列腺功能中發(fā)揮著重要作用。有研究證實，細(xì)菌性CP患者前列腺液中鋅的濃度始終低于正常水平[13]。非細(xì)菌性CP患者的鋅濃度較低，但口服鋅可以糾正這一現(xiàn)象。CHO等[11]發(fā)現(xiàn)，高水平的前列腺鋅與前列腺的抗菌活性有關(guān)，而CP患者的鋅濃度較低。本課題研究結(jié)果顯示，造模對照組血清Zn的含量明顯較假手術(shù)組降低(P<0.05)，說明血清Zn與CP的發(fā)生有著密切的聯(lián)系，是維持前列腺組織結(jié)構(gòu)和生理功能處于穩(wěn)定狀態(tài)的重要物質(zhì)之一；與模型對照組相比，埋線腎俞穴和關(guān)元穴均能升高血清Zn的含量(P<0.05)，說明穴位埋線能升高血清Zn的含量從而發(fā)揮治療CP的作用。

綜上所述，簡易埋線腎俞穴和關(guān)元穴均能降低CP大鼠勻漿IgG的含量，升高血清Zn的含量，改善小便渾濁度，緩解整體癥狀，這可能是其治療CP取得良好效果的主要機制。