方磊涵,劉詩(shī)柱,王 留

(商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南商丘476100)

中藥具有不易產(chǎn)生耐藥性，低或無殘留和毒性的飼料添加劑，在畜禽生產(chǎn)中得到了廣泛的應(yīng)用[1]。尤其是隨著規(guī)模化、集約化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，為了減少疾病而大量使用抗生素導(dǎo)致畜產(chǎn)品中藥物殘留嚴(yán)重，進(jìn)而影響著人們對(duì)健康畜產(chǎn)品的需求以及畜產(chǎn)品的出口貿(mào)易，在這種養(yǎng)殖和畜產(chǎn)品需求的矛盾中亟待尋求各類藥物的替代品以解決動(dòng)物源食品安全問題[2]。眾所周知，中藥具有簡(jiǎn)、便、廉、驗(yàn)等特點(diǎn)，是我國(guó)具有國(guó)際優(yōu)勢(shì)的潛在資源，并為中化民族提供了健康保障。

發(fā)酵是中藥材的傳統(tǒng)炮制方法之一，大量研究表明，經(jīng)過微生物發(fā)酵后的中藥，有效成分含量升高，利于機(jī)體吸收利用，有增效減毒作用，可擴(kuò)大治療范圍和藥物品種[3-4]。另外，發(fā)酵后的中藥，因療效增強(qiáng)，可明顯降低用量，節(jié)約養(yǎng)殖成本。發(fā)酵中藥作為一種新型功能性飼料添加劑，可提高動(dòng)物生產(chǎn)性能和免疫功能及改善肉品品質(zhì)，具有替代抗生素的潛力[5]。Ahmed等[6]用中藥石榴皮、銀杏葉、甘草組方發(fā)酵后飼喂育肥豬，可有效地提高其生產(chǎn)性能和免疫力，改善肉品質(zhì)。崔艷紅等[7]研究表明，益生菌復(fù)合發(fā)酵飼料使仔豬營(yíng)養(yǎng)素合成代謝能力增強(qiáng)，利于生長(zhǎng)。本試驗(yàn)選擇具有清熱解毒、燥濕，健脾理氣，殺蟲、消積導(dǎo)滯等功能的中藥組方，用乳酸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌綜合發(fā)酵，以不同比例添加在育肥豬的飼料中，探討其對(duì)育肥豬肉品質(zhì)、血液生化指標(biāo)及免疫功能的影響，為中藥發(fā)酵制劑在生長(zhǎng)育肥豬養(yǎng)殖中合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 未發(fā)酵中藥制劑和發(fā)酵中藥制劑 試驗(yàn)用未發(fā)酵和發(fā)酵中藥制劑組方相同：黃芪4份、白術(shù)4份、秦皮3份、蒼術(shù)2份、黃連3份、何首烏2份、陳皮2份、焦三仙各3份、松針4份、貫眾1份。中藥均購(gòu)自亳州中藥材專業(yè)市場(chǎng)。

未發(fā)酵中藥制劑：將以上藥物除去雜質(zhì)，烘干，按比例充分混合均勻后粉碎，過80目篩于干燥處密封保存?zhèn)溆谩?/p>

發(fā)酵中藥制劑：將以上12味中藥，按照孫曉燕等[8]方法制作。中藥烘干，粉碎過60目篩，混合均勻，用活化計(jì)數(shù)后的復(fù)合益生菌(乳酸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌，按1∶1∶1的比例混合)接種(總接種量為12%)于粉碎的中藥中，放入發(fā)酵罐中發(fā)酵72 h(溫度為30 ℃～37 ℃，濕度為70%～80%)。將上述發(fā)酵產(chǎn)物烘干(濕度控制在60 ℃～80 ℃)后即得發(fā)酵中藥制劑，備用。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組處理 選擇60頭日齡、體重相近的三元雜交(杜×長(zhǎng)×大)生長(zhǎng)育肥豬(商丘鳳飛種豬場(chǎng)提供)，隨機(jī)分為5組，4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3頭。對(duì)照組(基礎(chǔ)日糧)，試驗(yàn)Ⅰ組(基礎(chǔ)日糧+2%未發(fā)酵中藥制劑)，試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組(基礎(chǔ)日糧+1%、1.5%或2%發(fā)酵中藥制劑)，預(yù)試期3 d，正試期37 d。

1.3 基礎(chǔ)日糧 基礎(chǔ)日糧為玉米-豆粕型日糧，按照 NRC(2012)育肥豬營(yíng)養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)配制，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表 1。

表1 日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平

* : 預(yù)混料配方見表2；營(yíng)養(yǎng)成分含量為計(jì)算值

表2 預(yù)混料配方(每千克日糧提供)

1.4 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)期間各組飼養(yǎng)管理?xiàng)l件一致，自由采食和飲水，所有豬只采用單籠飼養(yǎng)，每天飼喂 3次，飼喂時(shí)間分別為7:00、14:00 和20:00，飼喂量以料槽內(nèi)略有剩余為標(biāo)準(zhǔn)。每天進(jìn)行圈舍清潔和消毒，并保持舍內(nèi)通風(fēng)和干燥，保持圈舍清潔衛(wèi)生。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 肉品質(zhì)檢測(cè) 方法參見文獻(xiàn)[9]。活豬屠宰后，分割胴體，取左側(cè)胸椎至第六腰椎的背腰最長(zhǎng)肌作為樣本，置于 4 ℃冰箱中待測(cè)。分別測(cè)定樣本的 pH 值( pH值45 min、pH值24 h )、肉色(亮度L*、紅度a*和黃度b*)、滴水損失、剪切力、失水率、背膘厚度和眼肌面積。

1.5.2 血液生化指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)所有試驗(yàn)豬禁食12 h，耳緣靜脈采血5 mL，靜置2 h析出血清后, 3 000 r/min離心15 min，制備血清樣品。用半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定總蛋白( TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、尿素氮(BUN)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、血糖(GLU)、甘油三脂(TG)、總膽固醇(GHO)的含量(商丘市第四人民醫(yī)院檢測(cè))。

1.5.3 血清免疫球蛋白指標(biāo)測(cè)定 運(yùn)用免疫比濁法測(cè)定血清中免疫球蛋白(IgG 、IgA、IgM)的含量。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 采用 SPSS19.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組間的差異顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差(One-Way ANOVA)分析，LSD法多重比較，P<0.05為差異顯著，結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤差(X±SD)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵中藥制劑對(duì)育肥豬肉品質(zhì)的影響 由表3可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)各組的豬背長(zhǎng)肌肉中的pH值45 min和pH值24 h值均有不同程度的下降，但差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)Ⅲ、Ⅳ組肉色的紅度值顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；試驗(yàn)Ⅲ組的剪切力明顯低于對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)與試驗(yàn)Ⅳ組差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)各組的眼肌面積值與對(duì)照組相比均有顯著的增加(P<0.05)，試驗(yàn)Ⅲ組最高，與試驗(yàn)Ⅳ組相當(dāng)，4個(gè)試驗(yàn)組之間差異不顯著(P>0.05)；發(fā)酵中藥制劑對(duì)育肥豬肉的L*和b*、滴水損失、背膘厚度無顯著影響(P>0.05)。

2.2 發(fā)酵中藥制劑對(duì)育肥豬血清生化指標(biāo)的影響 由表4可知，試驗(yàn)各組豬血清中的總蛋白和堿性磷酸酶含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，試驗(yàn)Ⅲ組最高，但與試驗(yàn)Ⅳ組之間差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)Ⅲ組和試驗(yàn)Ⅳ組總膽固醇含量顯著低于對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)；其余各項(xiàng)血液生化指標(biāo)各組間差異均不顯著(P>0.05)。

表3 發(fā)酵中藥制劑對(duì)育肥豬肉品質(zhì)的影響

表中數(shù)據(jù)右上角標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，下表同

表4 發(fā)酵中藥制劑對(duì)育肥豬血清生化指標(biāo)的影響

2.3 發(fā)酵中藥制劑對(duì)育肥豬血清免疫球蛋白的影響 由表5可知，試驗(yàn)各組血清中l(wèi)gA的含量與對(duì)照組相比均有顯著的提高(P<0.05)，試驗(yàn)Ⅲ組最高，與試驗(yàn)Ⅳ組差異不顯著(P>0.05)，但均顯著高于試驗(yàn)I組和試驗(yàn)II組(P<0.05)；試驗(yàn)Ⅲ組lgG的含量顯著高于對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組(P<0.05)，與試驗(yàn)IV組無顯著差異(P>0.05)；發(fā)酵中藥制劑對(duì)豬血清中l(wèi)gM的含量沒有明顯影響。

表5 發(fā)酵中藥制劑對(duì)育肥豬血清免疫球蛋白的影響

3 討論

3.1 發(fā)酵中藥制劑對(duì)育肥豬肉品質(zhì)的影響 肉色、嫩度(剪切力)、pH值、滴水損失、系水力、口感風(fēng)味等是評(píng)價(jià)豬肉感官品質(zhì)的主要指標(biāo)[10]。 pH值作為評(píng)定豬肉品質(zhì)的關(guān)鍵指標(biāo)，也是反映動(dòng)物宰后肌糖原酵解速度和強(qiáng)度的指標(biāo)，直接影響肌肉的嫩度、滴水損失和色度。一般情況下，正常豬肉的pH值為6.0～6.5，如果屠宰后肌肉 pH 值下降過快會(huì)導(dǎo)致豬肉色澤蒼白或深暗，pH值>7.0時(shí)鮮味消失而影響豬肉品質(zhì)[11]。滴水損失是反映豬肉系水力的重要指標(biāo)之一，其指標(biāo)高低可影響到肉品質(zhì)地、風(fēng)味及組織狀態(tài)，它的值越小表明系水力越高，肉品質(zhì)越好[12]。肉的顏色也是肉質(zhì)和肉品衛(wèi)生檢驗(yàn)的一項(xiàng)重要指標(biāo)，雖然肉色與食用品質(zhì)(嫩、味、汁)沒有直接關(guān)系，但具有重要的商業(yè)意義。嫩度是人們對(duì)肌肉口感滿意程度的一個(gè)重要指標(biāo)，直接影響著肉的食用價(jià)值和商品價(jià)值，它反映了肉中肌原纖維、結(jié)締組織及肌肉脂肪的含量、分布和化學(xué)結(jié)構(gòu)狀態(tài)，肌束中的肌纖維越多越細(xì)，肉越嫩，并且肌間脂肪與嫩度成正比[13]。李婉濤等[14]研究表明，杜仲和桑葉提取物能減慢豬屠宰后肌肉pH值的下降速度，降低滴水損失和背膘厚。李濤[15]、徐秀景等[16]利用乳酸桿菌發(fā)酵飼料飼喂育肥豬后，豬肉亮度(L*值)和紅度(a*)均高于對(duì)照組，改善了豬肉顏色，降低了剪切力，增加了肉的嫩度。本試驗(yàn)取得了類似結(jié)果，隨著發(fā)酵中藥制劑添加水平的增加，剪切力明顯降低，肉色有所改善，眼肌面積增加，表明育肥豬日糧添加發(fā)酵中藥制劑能改善豬肉的顏色和嫩度，提高肉品質(zhì)。

3.2 發(fā)酵中藥制劑對(duì)育肥豬血清生化指標(biāo)的影響 通過血液生化指標(biāo)測(cè)定可以間接了解動(dòng)物機(jī)體功能狀態(tài)、營(yíng)養(yǎng)代謝水平和生產(chǎn)性能。

血清中的總蛋白、白蛋白和球蛋白可反映動(dòng)物對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收程度，維持機(jī)體膠體滲透壓，蛋白質(zhì)的含量升高，其機(jī)體免疫力也會(huì)相應(yīng)提高，機(jī)體營(yíng)養(yǎng)水平得到增強(qiáng)，可以提高機(jī)體抵御外界不良環(huán)境影響的能力[16]。侯海鋒等[17]利用發(fā)酵的中藥渣添加在豬的日糧中，血清中的總蛋白(TP)和白蛋白(ALB)的含量顯著提高。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在豬飼料中添加發(fā)酵的中藥在一定程度上能夠提高豬血清中總蛋白和白蛋白的含量。鄒志恒等[18]研究表明，復(fù)方中藥發(fā)酵制劑能促進(jìn)斷奶仔豬體內(nèi)蛋白合成，血清中的總蛋白、白蛋白和球蛋白的含量明顯高于對(duì)照組。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組的血清總蛋白有顯著的提高，原因可能是中藥發(fā)酵飼料促進(jìn)了豬機(jī)體蛋白質(zhì)的合成。血清中的尿素氮值能準(zhǔn)確反映動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝與氨基酸的平衡狀況，血清尿素氮值較低表明氨基酸平衡良好，蛋白質(zhì)合成率高。孟祥宇[19]在豬飼料中添加復(fù)合益生菌制劑，結(jié)果表明，復(fù)合益生菌的添加對(duì)豬血漿中尿素氮的含量沒有影響。趙香菊等[20]研究表明，留蘭香莖葉粉可使豬血液中尿素氮有下降的趨勢(shì)。本試驗(yàn)中，發(fā)酵中藥制劑的添加對(duì)豬血漿中尿素氮的含量沒有明顯的影響。血清中AST和ALT的活性變化是反映肝功能是否正常的重要指標(biāo)；ALP的含量變化不僅能表現(xiàn)出成骨細(xì)胞活性，也能反映出骨骼的生長(zhǎng)發(fā)育是否旺盛。嚴(yán)念東等[21]證明了益生菌發(fā)酵飼料能顯著提高仔豬血液中堿性磷酸酶的活性。孟祥宇[19]研究表明，在豬的日糧中添加復(fù)合微生物制劑，血液中的堿性磷酸酶的含量會(huì)顯著上升。本試驗(yàn)結(jié)果與上述研究結(jié)果相一致。血液甘油三脂和膽固醇含量可以反映體內(nèi)脂類代謝的情況和日糧能量水平的高低；血糖水平主要反映機(jī)體碳水化合物代謝是否正常。蓋麗婷等[22]將夜交藤用于仔豬的飼料中，各組血清中甘油三酯、總膽固醇含量沒有顯著性變化。彭宏剛[23]試驗(yàn)結(jié)果表明，APS可使育肥豬血清中的甘油三脂、總膽固醇含量降低。本試驗(yàn)發(fā)酵中藥制劑1%和1.5%劑量組豬血清中總膽固醇的含量下降較為顯著；試驗(yàn)各組的甘油三脂和血糖沒有明顯的變化。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，育肥豬飼料中添加發(fā)酵中藥制劑后，血液中白蛋白和球蛋白、尿素氮、谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶、葡萄糖及甘油三脂等生化指標(biāo)沒有明顯的變化，表明發(fā)酵中藥制劑對(duì)豬的心臟和肝臟沒有影響。其中試驗(yàn)各組血液中總蛋白含量、堿性磷酸酶活性顯著提高，降低膽固醇含量，以發(fā)酵中藥制劑中(1%)、高(1.5%)劑量組效果最好。說明飼喂發(fā)酵中藥制劑后，對(duì)蛋白質(zhì)的代謝和氮沉積有一定的增強(qiáng)作用，對(duì)豬的骨骼發(fā)育也起到一定的幫助作用，有利于豬的生長(zhǎng)，提高豬抵御外界不良環(huán)境影響的能力。

3.3 發(fā)酵中藥制劑對(duì)育肥豬血清免疫球蛋白的影響 豬血清中免疫球蛋白是體液免疫的主要活性成分，可以反應(yīng)其免疫能力的高低，免疫球蛋白含量水平可判斷豬抵抗外界病原體侵襲能力的高低[24]。IgG 是血清中含量最多，是抗感染的主力；IgA在維持黏膜上皮表面完整性和功能方面有重要作用，發(fā)揮著抗菌、抗病毒的作用；IgM是一種高效能抗體，在機(jī)體的免疫防護(hù)中占有重要地位[25]。對(duì)免疫球蛋白水平的檢測(cè)通常是衡量機(jī)體免疫狀況的常用指標(biāo)。武洪志等[26]在仔豬的日糧中添加以蒼術(shù)、黃柏和白術(shù)組成發(fā)酵復(fù)方中藥，可顯著提高仔豬血清中IgA、IgG 和IgM的含量，增強(qiáng)仔豬免疫力。龔澤修等[27]在生長(zhǎng)豬基礎(chǔ)日糧上添加了0.15%益生菌和0.04%玉屏風(fēng)散多糖，進(jìn)行了兩個(gè)階段的試驗(yàn)(第一階段：1～30 d，第二階段：31～60 d)，結(jié)果表明，在兩個(gè)階段中IgG和IgA的含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，益生菌和玉屏風(fēng)散多糖均能夠提高豬的免疫能力。本試驗(yàn)結(jié)果與上述試驗(yàn)相一致，在育肥豬飼料中添加中藥復(fù)方發(fā)酵制劑，各組血清中l(wèi)gA和lgG的含量與對(duì)照組相比均有顯著的提高，其中以試驗(yàn)Ⅲ組最高。說明添加發(fā)酵中藥制劑對(duì)豬免疫能力有一定提高，效果好于中藥復(fù)方制劑。

4 結(jié)論

在育肥豬日糧中添加不同劑量的中藥復(fù)方發(fā)酵制劑可改善肉品質(zhì)，增強(qiáng)蛋白質(zhì)的代謝和氮沉積作用，提高豬的免疫能力，效果好于中藥復(fù)方制劑，尤其是1.5%和2%劑量添加效果最好，且日糧中添加以1.5%發(fā)酵中藥制劑為最佳。