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        安慶六白豬Nramp1基因多態(tài)性研究

        2023-05-30 10:48:04付鑫琳朱杰郭江文利新譚國華劉楊馬海明
        國外畜牧學(xué)·豬與禽 2023年2期

        付鑫琳 朱杰 郭江 文利新 譚國華 劉楊 馬海明

        摘? 要:為探討抗病力相關(guān)基因天然抗性相關(guān)巨噬蛋白1(natural resistance associated macrophage protein 1,Nramp1)在安慶六白豬上的遺傳多態(tài)性,本研究利用PCR-RFLP檢測該基因HinfⅠ位點(diǎn)的多態(tài)性;結(jié)果表明:安慶六白豬Nramp1基因A/B位點(diǎn)的A基因和B基因頻率分別為0.40和0.60,這表明安慶六白豬Nramp1基因的B等位基因?yàn)閮?yōu)勢等位基因。本研究為安慶六白豬抗病力性狀的深入研究打下了基礎(chǔ)。

        關(guān)鍵詞:豬;Nramp1基因;抗病力性狀;安慶六白豬

        天然抗性相關(guān)巨噬蛋白1(natural resistance associated macrophage protein 1,Nramp1)對巨噬細(xì)胞的抗菌活性有調(diào)節(jié)作用,同時(shí)能抑制多種胞內(nèi)病原體,如牛結(jié)核分枝桿菌、沙門菌和利什曼原蟲等的侵染和易感[1]。動物的Nramp1基因主要在吞噬細(xì)胞,如巨噬細(xì)胞和多形核白細(xì)胞及外周血細(xì)胞中特異性表達(dá)[2],可提高動物機(jī)體的固有免疫力,影響宿主對多種胞內(nèi)寄生病原微生物的早期免疫反應(yīng),而且對多種傳染性疾病和自身免疫性疾病的抗性具有非特異性[3],在豬選種育種過程中是提高綜合抗病力性狀的分子遺傳標(biāo)記位點(diǎn)之一[4]。安慶六白豬具有抗病力強(qiáng)的特性,屬于肉脂兼用型地方豬種。本研究利用PCR-RFLP對安慶六白豬Nramp1基因的HinfⅠ位點(diǎn)進(jìn)行多態(tài)性分析,以期為安慶六白豬抗病力性狀的深入研究打下基礎(chǔ)。

        1? 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)樣本

        應(yīng)用隨機(jī)抽樣法,采集108個(gè)安慶六白豬耳組織樣本。

        1.2 PCR-RFLP引物設(shè)計(jì)

        根據(jù)發(fā)表在GenBank數(shù)據(jù)庫中的豬Nramp1基因全長序列,通過Primer premier 5.0軟件設(shè)計(jì)安慶六白豬通用引物,上游引物為5-TCT CCA CAT CCT CTG TGG CAA-3,下游引物為5-ATG GAG AGT GGT AAC TGC CGT-3,擴(kuò)增目的片段的長度為504 bp,引物由北京三博生物工程有限公司合成。

        1.3 PCR擴(kuò)增

        使用特異性引物對樣本DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。25 μL PCR反應(yīng)體系:ddH2O 17 μL,基因組DNA 1 μL,上下游引物(10 μmol/μL)各0.5 μL,dNTP(10 mmol/L) 2 μL,10×buffer 2.5 μL,Tap DNA聚合酶 1 μL,MgCl2 0.5 μL。PCR反應(yīng)條件:94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性30 s,55 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,循環(huán)30次;72 ℃延伸10 min;4 ℃保存。

        1.4 PCR產(chǎn)物酶切反應(yīng)

        20 μL酶切反應(yīng)體系:PCR反應(yīng)產(chǎn)物? ? ?5 μL,內(nèi)切酶HinfⅠ 0.7 μL,10×酶切緩沖液2.0 μL,加ddH2O補(bǔ)足。37 ℃水浴反應(yīng)16 h,用核酸染料染色的2.0%瓊脂糖凝膠電泳對酶切產(chǎn)物進(jìn)行鑒定,凝膠成像系統(tǒng)觀察成像,根據(jù)限制性酶切圖譜中的特征條帶確定并記錄每份樣本的基因型。

        2? 結(jié)果與分析

        用2%瓊脂糖凝膠電泳對所獲得的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測,獲得的產(chǎn)物與目標(biāo)片段大小一致,并且產(chǎn)物條帶穩(wěn)定性和特異性較高,清晰,無雜帶,可直接用于酶切分析。

        當(dāng)存在酶切位點(diǎn)時(shí),內(nèi)切酶HinfⅠ可特異性地將504 bp片段切為332 bp和172 bp兩個(gè)片段。將酶切產(chǎn)物通過2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測分型,共檢測出AA基因型(504 bp),BB基因型(332 bp、172 bp)和AB基因型(504 bp、332 bp、172 bp)(圖1)。

        安慶六白豬Nramp1基因的基因型頻率及等位基因頻率見表1。從表1可知,B等位基因?yàn)閮?yōu)勢等位基因,有望作為遺傳標(biāo)記。

        3? 討論

        畜禽抗病力性狀是一個(gè)既受數(shù)量基因調(diào)控,又受環(huán)境因素影響的復(fù)雜的閾性狀,由于其表型的遺傳規(guī)律不服從孟德爾遺傳定律,且呈非連續(xù)性變異,利用常規(guī)的表型選擇來獲得理想的改良進(jìn)展比較困難。因此,利用分子遺傳標(biāo)記輔助育種,可以有效促進(jìn)畜禽抗病力性狀的固定[5]。本研究通過對安慶六白豬Nramp1基因多態(tài)性的分析,發(fā)現(xiàn)B基因?yàn)閮?yōu)勢等位基因,有可能作為影響畜禽抗病力性狀的候選基因標(biāo)記位點(diǎn),為豬的抗病力性狀選育積累了有益的資料。

        參考文獻(xiàn)

        [1] CELLIER M, GOVONI G,VIDAL S,et al.Human natural resistance-associated macrophage protein: cDNA cloning, chromosomal mapping, genomic organization, and tissue-specific expression[J].Journal of Experimental Medicine,1994,180(5):1741-1752.

        [2] 張斌,韓敏,相德才,等.滇陸豬Nramp1基因多態(tài)性對其在組織中表達(dá)的影響[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2020,51(1):202-208.

        [3] 相德才,張斌,劉邵娜,等.迪慶藏豬Nramp1基因第二內(nèi)含子和第二外顯子多態(tài)性位點(diǎn)遺傳分析[J].養(yǎng)豬,2020(2):60-62.

        [4] SUN H S,WANG L,ROTHSCHILD M F,et al.Mapping of the natural resistance-associated macrophage protein 1 (NRAMP1) gene to pig chromosome 15[J].Animal Genetics,1998,29(2):138-140.

        [5] 付保強(qiáng),彭帥,顧亞榮,等.豬Nramp1基因內(nèi)含子6的SNP多態(tài)性分析[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2018(10):21-24.

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