張茜，謝麗

1廣州市越秀區(qū)兒童醫(yī)院兒科(廣東廣州 510115)； 2廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院兒科(廣東廣州 510405)

毛細支氣管炎是嬰幼兒常見的感染性下呼吸道疾病，而引起感染的原因多為呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV) 入侵所致。據(jù)資料統(tǒng)計，由RSV引起的呼吸道感染事件約占所有患病兒童的40%～50%，其在一年四季中均可發(fā)病，臨床表現(xiàn)為反復咳嗽、喘息，部分患兒甚至出現(xiàn)哮喘癥狀，往往對患兒的身心健康造成不利影響[1-3]。研究認為毛細支氣管炎的發(fā)病機制相對復雜，而白細胞介素-17(IL-17)、中性粒細胞在其中發(fā)揮重要作用，IL-17 是由 Th17 細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞等多種細胞分泌的一種細胞因子[4-6]；而中性粒細胞是血液中數(shù)目最多的白細胞，當發(fā)生局部感染或損傷時，它們可很快穿過血管壁進入組織發(fā)揮作用，而且進入組織后不再返回血液中，是反映細菌感染的一項重要指標[7-8]。本研究旨在通過觀察RSV毛細支氣管炎患兒血清IL-17與中性粒細胞濃度，揭示其在發(fā)病過程中可能的作用機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取廣州市越秀區(qū)兒童醫(yī)院住院部2016年3月至2017年3月期間住院的符合RSV毛細支氣管炎診斷患兒40例作為觀察組，其中男29例，女12例，患兒年齡60 d～16個月，平均(5.5±3.6)個月，診斷標準符合文獻[5]。入院即查血RSV抗體陽性的患兒入選，根據(jù)入院lowell評分≥10分為重度，<10分為輕度，分為重度組(10例)和輕度組(30例)患兒。毛細支氣管炎恢復期(簡稱恢復期)，系毛細支氣管炎組患兒治療5～12 d后臨床癥狀緩解，無發(fā)熱、喘息，肺部聽診無哮鳴音及濕性啰音。對照組：為同期住院的無喘息的病毒性肺炎患兒9例，其中男5例，女4例；年齡60 d～12個月，平均(5.1±3.1)個月。各組患兒的基線資料對比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，有可比性。

納入標準：(1)以上各組要幼兒病程均在3 d以內(nèi)；(2)2周內(nèi)無類固醇激素應(yīng)用史、均無先天性心臟病史，慢性肺部疾病，既往無喘息史、家族史；(3)均簽署知情同意書者。

排除標準：(1)嚴重營養(yǎng)不良，或有其他感染性疾病者；(2)合并心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)性疾病或消化道出血等疾??；(3)不同意參加本實驗者。

剔除標準：(1)不能堅持治療，不能配合觀察項目復查者；(2) 治療中出現(xiàn)嚴重并發(fā)癥，不適宜繼續(xù)接受試驗者；(3)自行退出試驗者。

1.2 方法

1.2.1 血清標本采集 觀察組、對照組患兒于入院當天(未治療前)采集空腹靜脈血2 mL，高速離心分離血清，-80℃冷凍待測。

1.2.2 血清IL-17檢測方法 采用ELISA法測定血清IL-17，人IL-17 ELISA試劑盒由美國R&D公司提供，操作步驟嚴格按照說明書進行。

1.2.3 痰液收集處理 孩子經(jīng)鼻吸入特布他林(喘康速)后，用醫(yī)用口罩式超聲霧化器直接吸入3%生理鹽水，誘導時間為20～30 min。常規(guī)口腔護理后，打開吸氣器，將吸氣壓力調(diào)節(jié)至50～100 mmHg，并將一次性導管連接到培養(yǎng)容器的吸管上。選擇6號二次吸管，阻斷負壓，插入吸氣管的口腔或鼻腔，并左右旋轉(zhuǎn)。吸痰并將痰吸入無菌培養(yǎng)容器中進行檢查。在2 h內(nèi)處理痰液，并在測量合格質(zhì)液的體積后，加入4倍體積的0.1%二硫蘇糖醇(DTT)。在渦旋振蕩器內(nèi)接受15 s的振蕩，搖床搖動15 min，加入等體積的磷酸鹽緩沖液并搖動5 min。790 r/min，離心半徑12 cm，離心10 min，留下上清液進行檢測，檢查可溶性物質(zhì)的濃度，通過細胞分選計數(shù)沉淀的細胞。細胞分選計數(shù)檢測直接在光學顯微鏡下計數(shù)500個沉淀細胞用于分類，包括中性粒細胞、淋巴細胞和其他有核細胞(巨噬細胞、嗜酸性粒細胞和上皮細胞)。

2 結(jié)果

2.1 各組間血清IL-17水平比較 輕度組與重度組血清IL-17水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但輕度組與重度組之間血清IL-17水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

項目例數(shù)IL-17輕度組3026.54±3.93?重度組1027.45±3.98?對照組921.95±3.32F值8.47P值0.0007

*與對照組比較P<0.05

2.2 各組呼吸道分泌物中各細胞濃度比較 輕度組、重度組與對照組3組間的中性粒細胞、淋巴細胞以及其他有核細胞對比差異均有統(tǒng)計學意義(F=13.60、5.78、14.08，P<0.05)，輕度組(恢復期)、重度組(恢復期)與對照組3組間中性粒細胞、淋巴細胞以及其他有核細胞對比，差異均有統(tǒng)計學意義(F=8.12、6.97、10.45，P<0.05)。重度組(恢復期)的中性粒細胞降低、淋巴細胞升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。但輕度組(恢復期)變化較小，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

項目例數(shù)中性粒細胞淋巴細胞其他有核細胞輕度組3034.45±18.9219.56±8.7445.73±22.21輕度組(恢復期)3027.63±13.4122.51±9.6850.16±18.75t值1.6111.2390.835P值0.1130.2200.407重度組1052.13±16.1511.95±6.1430.12±16.15重度組(恢復期)1034.95±15.2219.65±7.6044.53±12.58t值2.3222.3642.112P值0.0340.0310.051對照組911.63±7.529.85±5.2478.12±7.56

2.3 IL-17、中性粒細胞與RSV毛細支氣管炎之間的相關(guān)性 IL-17、中性粒細胞與RSV毛細支氣管炎發(fā)病呈正相關(guān)(P<0.05)，見表3。

表3 IL-17、中性粒細胞與RSV毛細支氣管炎之間的相關(guān)性

3 討論

毛細支氣管炎是一種嬰幼兒時期常見的與病毒感染相關(guān)的感染性疾病，RSV感染是最常見的病原體，占70%以上，喘憋伴呼氣性延長和呼氣性喘鳴為其突出表現(xiàn)，并可導致肺氣腫和肺不張，缺氧嚴重時可合并急性呼吸衰竭、心力衰竭、腦水腫甚至出現(xiàn)窒息等而導致死亡，多在嬰幼兒時期發(fā)病，若未處理得當將對患兒的身心健康造成不利影響[9-12]。研究認為[8]，早診斷、早治療是改善毛細支氣管炎預后的關(guān)鍵所在。但目前對于該病的發(fā)病機制尚未出現(xiàn)確切說法，但多數(shù)專家認為其與患兒遺傳背景和環(huán)境因素密切相關(guān)，同時，它也與身體的炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)密切相關(guān)[13-16]。近年來隨著免疫調(diào)節(jié)機制研究的深入，越來越多的學者發(fā)現(xiàn)到Th17在自身免疫疾病中的作用，Th17是存在于人體內(nèi)的一種的重要細胞，具有很強的促炎作用，代表不同于Th1/Th2細胞的CD4+T細胞亞群，同時也具有一定的一類IL-23的依賴性，在分泌IL-17、IL-21、IL-22等細胞因子中發(fā)揮重要作用[17-20]。此外，研究表明存在上皮細胞、巨噬細胞、細胞毒性 T淋巴細胞、嗜酸性粒細胞和各種炎癥細胞如中性粒細胞和各種細胞因子參與 RSV細支氣管炎的氣道炎癥過程[21]。但目前有關(guān)IL-10與中性粒細胞在RSV毛細支氣管炎研究報道較少，學術(shù)界關(guān)于其在疾病發(fā)作中的表達情況仍存在爭議。

本研究旨在探討IL-10和中性粒細胞在RSV細支氣管炎發(fā)病機制中的作用，為不同類型毛細支氣管炎患兒的治療和預后提供依據(jù)。通過調(diào)查40例RSV毛細支氣管炎確診患兒與9例病毒性肺炎患兒的臨床資料與相關(guān)指標，結(jié)果顯示：輕度組與重度組血清IL-17水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但輕度組與重度組之間血清IL-17水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。這表明IL-17可能參與毛細支氣管炎的發(fā)病機制，而Th17細胞的主要效應(yīng)因子是IL-17。關(guān)于 IL-17，目前已有研究證實IL-17在潰瘍性結(jié)腸炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎等疾病呈現(xiàn)高表達[22-23]。學者認為其是一種主要由活化T細胞產(chǎn)生的促炎細胞因子，它可以促進T細胞的活化，并刺激上皮細胞、內(nèi)皮細胞和成纖維細胞中各種細胞因子和化學刺激激素和細胞黏附分子的產(chǎn)生，從而導致發(fā)生炎癥反應(yīng)；它也是T細胞誘導的炎癥反應(yīng)的早期啟動子，其通過促進炎癥細胞因子的釋放來擴增炎癥反應(yīng)[24]。由表2可知，輕度組、重度組與對照組3組間的中性粒細胞、淋巴細胞以及其他有核細胞對比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，輕度組(恢復期)、重度組(恢復期)與對照組3組間中性粒細胞、淋巴細胞以及其他有核細胞對比，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。組間對比發(fā)現(xiàn)，重度組(恢復期)的中性粒細胞降低、淋巴細胞升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。實驗證明，中性粒細胞在病毒感染期間呼吸道癥狀發(fā)病中起重要作用，對預后有提示作用，這與學者的研究[25]結(jié)果一致。大量中性粒細胞聚集并活化以釋放炎癥介質(zhì)，如釋放氧自由基和蛋白水解酶(如去甲腎上腺素和髓過氧化物酶)來破壞病原體，能夠誘導明顯的炎癥反應(yīng)。此外，Th17細胞產(chǎn)生的IL-17可以有效地介導中性粒細胞動員的興奮過程，這也表明IL-17與中性粒細胞密切相關(guān)。IL-17參與中性粒細胞的增殖、成熟和趨化性，并協(xié)同刺激T細胞的活化。并能促進樹突狀細胞的成熟。因此，得以證實IL-17、中性粒細胞兩項指標在RSV毛細支氣管炎發(fā)病中起到關(guān)鍵作用，同時IL-17、中性粒細胞之間也存在密切關(guān)聯(lián)，這有待開展深入研究探討。

綜上所述，RSV毛細支氣管炎患兒的血漿IL-17和中性粒細胞水平顯著升高。通過測定血漿IL-17和中性粒細胞水平，可用于判斷疾病的發(fā)展趨勢，為判斷RSV細支氣管炎的免疫治療和預后提供分子依據(jù)，臨床應(yīng)用價值較高。但本研究也存在一定不足之處，如追蹤時間有限,未追蹤到患者各種慢性并發(fā)癥的發(fā)展有明顯變化；受研究時間和條件的限制,本研究未進一步延長隨訪時間。下一步需要擴大樣本量、延長追蹤時間，以期獲得更加準確可靠的指標判斷。