云南省藥物研究所、云南白藥集團(tuán)創(chuàng)新研發(fā)中心、云南省中藥和民族藥新藥創(chuàng)制企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650032

鐵皮石斛莖部為蘭科植物Dendrobium officinale Kimura et Migo，用于熱病津傷、口干煩渴、胃陰不足、食少干嘔、病后虛熱不退、陰虛火旺、骨蒸勞熱、目暗不明、筋骨痿軟[1]。鐵皮石斛在我國(guó)有悠久的使用歷史，《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為上品，唐代開元年間道家經(jīng)典《道藏》將其列為九大仙草之首，具有益胃生津、滋陰清熱的功效。民間稱鐵皮石斛為“救命仙草”“寸金草”，作為養(yǎng)生保健的極品，由于其功效顯著受歷代醫(yī)家推崇[2]。根據(jù)原國(guó)家衛(wèi)計(jì)委規(guī)定，鐵皮石斛為傳統(tǒng)中藥材，可用作保健食品，不能作為普通食品使用。根據(jù)《新食品原料安全性審查管理辦法》規(guī)定，物質(zhì)必須開展原料來源及鑒定、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和功能、主要成分及執(zhí)行的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、毒理學(xué)、生產(chǎn)工藝、食用歷史和民間食用情況等研究，經(jīng)過評(píng)審才能作為食品原料。

為保障廣大民眾食用鐵皮石斛的安全性與科學(xué)性，同時(shí)擴(kuò)大鐵皮石斛的應(yīng)用領(lǐng)域，使鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)做大做強(qiáng)，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)《新食品原料申報(bào)與受理規(guī)定》(國(guó)衛(wèi)食品發(fā)<2013>23號(hào))等要求開展鐵皮石斛莖部作為新食品原料的研究。

1 藥材

產(chǎn)自光明食品集團(tuán)云南石斛生物科技開發(fā)有限公司的鐵皮石斛GAP標(biāo)準(zhǔn)化種植基地，生長(zhǎng)環(huán)境為大棚栽培，生長(zhǎng)年限1年。經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所云南分所李海濤副研究員鑒定為蘭科植物鐵皮石斛D. officinale。

2 方法與結(jié)果

2.1 鐵皮石斛莖部的主要成分和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值 多糖是鐵皮石斛的特征性成分，且含量較高，能占到藥材干重的50%左右，是增強(qiáng)機(jī)體免疫力的物質(zhì)基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)證明鐵皮石解多糖中的單糖主要有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、少量阿拉伯糖及微量鼠李糖。鐵皮石斛多糖具有抗腫瘤、抗氧化、增強(qiáng)免疫力、降血糖的作用[3-5]。游離的氨基酸也是鐵皮石斛中的主要有效成分之一，經(jīng)研究鐵皮石斛含有17種氨基酸，對(duì)維持人體機(jī)能，提高身體免疫力具有一定作用[6]。鐵皮石斛還含有芪類和菲類化合物，具有抗腫瘤的活性。生物堿類成分是石斛屬植物中最早分離并進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)的化合物，具有止痛退熱，養(yǎng)胃促消化等功效[7]。鐵皮石斛中微量元素含量較高的有鈣、鎂、錳、鋅、鐵、鉀，這些元素可能協(xié)同發(fā)揮鐵皮石斛抗氧化、抗衰老、促進(jìn)免疫力等功效。

采用規(guī)定方法[1]測(cè)定3批鐵皮石斛干燥莖粗多糖、總蛋白、總鉀、水浸出物，結(jié)果見表1，表明鐵皮石斛莖部含有豐富的粗多糖、總蛋白和鉀。

表1 鐵皮石斛莖部化學(xué)成分表

2.2 鐵皮石斛的毒理學(xué)研究 依據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序 GB15193.1-2003》要求，開展鐵皮石斛的食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)試驗(yàn)，受試物為鐵皮石斛干燥莖粉末，主要內(nèi)容和結(jié)果。

2.2.1 小鼠灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)(最大耐受量試驗(yàn)法) 取20只KM種小鼠，雌雄各半，體重18.2～22.0 g，給藥前禁食不禁水16 h，以20 mL/kg.bw,24 h內(nèi)灌胃給予純水配制的受試物混合液(250 mg/mL)兩次，終劑量為10.00 g/kg.bw，連續(xù)觀察7 d，未見異常反應(yīng)和死亡。結(jié)果顯示：在本實(shí)驗(yàn)條件下，受試物最大耐受量(或LD50)> 10 g/kg.bw，屬實(shí)際無毒。據(jù)食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序《GB 15193.1-2003》可以進(jìn)入下一階段的試驗(yàn)。

表2 鐵皮石斛干燥莖小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果

2.2.2 Ames試驗(yàn) 采用平板滲入法，選用鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型菌株(TA97、TA98、TA100、TA102)檢測(cè)純水配制的受試物混合液是否具有致突變作用。受試物設(shè)5000、1000、200、40、8μg/皿5個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)自發(fā)回變、溶劑對(duì)照和陽性對(duì)照組，并以苯巴比妥鈉和β-萘黃酮聯(lián)合誘導(dǎo)的大鼠肝S9混合液作為代謝活化系統(tǒng)，在加S9和不加S9活化系統(tǒng)條件下進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，每個(gè)濃度組平行設(shè)置3皿，重復(fù)試驗(yàn)兩次，計(jì)算3皿的回變菌落平均值。由表3可知，在本實(shí)驗(yàn)條件下，在加S9和不加S9情況下，受試物5000、1000、200、40、8 μg/皿5個(gè)劑量組回變菌落均未見明顯增加，與自發(fā)回變菌落數(shù)之比均小于2，也無劑量-反應(yīng)關(guān)系，Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

2.2.3 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 受試物設(shè)5.00、2.50、1.25 g/kg·bw 3個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照和陽性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺40 mg/kg·bw)，以20 mL/kg·bw的給藥容積于30 h內(nèi)灌胃給藥兩次，并于末次給藥后6 h脫頸椎處死動(dòng)物，取股骨骨髓常規(guī)制片鏡檢。每只小鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞(PCE)中含微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)和每200個(gè)嗜多染紅細(xì)胞(PCE)所觀察到的成熟紅細(xì)胞(RBC)數(shù)。由表4可知，在本實(shí)驗(yàn)條件下，受試物5.00、2.50、1.25 g/kg.bw 3個(gè)劑量組均未見致小鼠骨髓細(xì)胞微核作用。

劑量μg/皿 TA97 TA98 TA100 TA102 -S9+S9-S9+S9-S9+S9-S9+S95000130±11139±937±641±7165±18164±28264±14292±261000123±32138±2138±241±4164±33152±14277±22282±31200148±19137±3538±740±4158±24153±19282±26281±1840127±23142±2337±642±5158±16169±18275±19277±308146±18137±2837±743±4147±24156±22272±19284±28空白對(duì)照132±35134±2542±340±4155±32166±35283±22279±31溶劑對(duì)照126±28143±3437±439±1152±24147±16289±21273±25陽性對(duì)照2611±1541765±1171171±566080±2962984±1103091±39892±56909±43

表4 鐵皮石斛干燥莖小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果

2.2.4 小鼠精子畸變?cè)囼?yàn) 受試物設(shè)5.00、2.50、1.25 g/kg·bw 3個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照和陽性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺40 mg/kg·bw)，以20 mL/kg·bw連續(xù)灌胃給予5 d，于第1次給藥后第35 d處死動(dòng)物，取雙側(cè)附睪按常規(guī)制片染色鏡檢。每只動(dòng)物觀察1000個(gè)精子，記錄畸形精子數(shù)和畸變類型，并計(jì)算畸變率。由表5可知，在本實(shí)驗(yàn)條件下，受試物5.00、2.50、1.25 g/kg·bw 3個(gè)劑量未見致小鼠精子畸形作用。

表5 鐵皮石斛干燥莖小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)結(jié)果

2.3 鐵皮石斛的食用和使用情況 鐵皮石斛是我國(guó)傳統(tǒng)名貴藥材，從歷代中醫(yī)著作的記錄可知其應(yīng)用歷史源遠(yuǎn)流長(zhǎng)。民間有多種食用石斛的方法，以石斛作為膳食熬粥燉湯，例如鐵皮楓斗粥：鐵皮楓斗5 g，梗米50 g，冰糖適量熬粥，具有生津益胃、養(yǎng)陰清熱之功。石斛牛肉粥：鐵皮石斛，粳米，新鮮牛肉粒各取適量，共煮，具有補(bǔ)中益氣的功效。以石斛泡茶，能清咽利喉：鐵皮石斛15 g，麥冬10 g，綠茶葉5 g，將石斛、麥冬和綠茶洗凈一并放入茶杯內(nèi)，開水泡茶，每日1劑，代茶頻飲，能養(yǎng)陰清熱，生津利咽[8]。另外，新鮮鐵皮石斛也可直接口嚼，所含營(yíng)養(yǎng)成分和藥用功能不受影響，早期在山上勞作者往往在饑餓口渴的時(shí)候通過咀嚼鐵皮石斛來減少其饑渴感，具有滋陰益精、開胃健脾等功效?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載其無捷奏之功。根據(jù)國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心發(fā)布的通報(bào)，沒有發(fā)現(xiàn)1例因食用鐵皮石斛出現(xiàn)的不良反應(yīng)。

3 結(jié)論

鐵皮石斛是養(yǎng)陰益精圣品，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功效，可適用于體質(zhì)虛弱者、亞健康狀態(tài)人群，亦可用于腫瘤患者術(shù)后、化療后的輔助調(diào)理，對(duì)化學(xué)性肝損傷和輻射危害進(jìn)行輔助保護(hù)等等。根據(jù)毒理試驗(yàn)，鐵皮石斛莖部安全無毒。鐵皮石斛人工種植技術(shù)成熟，種植規(guī)模和產(chǎn)業(yè)產(chǎn)值不斷擴(kuò)大，可保證食品原料來源的可靠可控。

2018年6月21日國(guó)家衛(wèi)計(jì)委發(fā)布公告，鐵皮石斛花和鐵皮石斛葉作為新食品原料終止審查，審查意見為“鑒于該產(chǎn)品具有地方傳統(tǒng)食用習(xí)慣，建議按照《食品安全法》第29條管理，終止審查”。終止審查被認(rèn)為可作為新食品原料應(yīng)用，這兩種原料以后可作為地方特色食品管理。莖部是鐵皮石斛的傳統(tǒng)藥用部位，《中國(guó)藥典》2010年版和2015年版均收錄鐵皮石斛的藥材標(biāo)準(zhǔn)，明確鐵皮石斛的藥用部位為干燥莖。與鐵皮石斛葉、鐵皮石斛花相比，鐵皮石斛莖部具有更確切的療效，具有地方傳統(tǒng)食用習(xí)慣，且具有易保存、易運(yùn)輸、便于使用等特點(diǎn)。根據(jù)原國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委2013年10月15日頒布的《新食品原料申報(bào)與受理規(guī)定》中對(duì)新食品原料的定義，鐵皮石斛莖部符合新食品原料的定義，具有進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用的價(jià)值。