姚世霞 朱旭江 李 欣

1.甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅 蘭州 730070； 2. 甘肅省中藏藥檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730070

調(diào)經(jīng)益母膠囊處方由益母草、冰糖草、丹參三味藥組成，具有調(diào)經(jīng)活血，祛瘀生新的功效，用于月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)期腹痛，產(chǎn)后瘀血不清，子宮縮不良[1]?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為YBZ16152005-2015Z，此標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)選用丹參酮ⅡA作為測(cè)定指標(biāo)。丹參酮ⅡA為唇形科植物丹參Salvia Miltiorrhiza Bge．的脂溶性成分，具有菲醌類的片狀剛性結(jié)構(gòu)，在水中幾乎不溶，具有抗菌消炎、活血化瘀、抗皮膚衰老等作用[2-3]。調(diào)經(jīng)益母膠囊制劑生產(chǎn)中原藥材均采用水煎煮提取，提取的多為水溶性物質(zhì)。原兒茶醛是常用中藥丹參水溶性成分丹酚酸B降解的主要產(chǎn)物之一，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)心肌、抗血栓等廣泛的藥理活性[4]。因此，選用丹參中的水溶性成分原兒茶醛作為測(cè)定指標(biāo)，研究建立了調(diào)經(jīng)益母膠囊中原兒茶醛含量的測(cè)定方法，可有效用于樣品的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters e2695型高效液相色譜儀；島津LC20A液相色譜儀；Agilent HC-18(4.6×250 nm，5 μm)色譜柱，資生堂 C-18(4.6×250 nm，5 μm)色譜柱，Agilent TC-18(4.6×250 nm，5 μm)色譜柱；Mettler ME-204電子天平；Mettler MS205DU電子天平(十萬(wàn)分之一)。

1.2 試藥 原兒茶醛對(duì)照品(批號(hào)：110810-200506，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；調(diào)經(jīng)益母膠囊樣品(批號(hào)：S17010101、S17010102、S17010-103、S17010104、S17010105、S17010106、S17010-107、S17010108、S17010109、S17010110，甘肅皇普謐制藥有限公司)。流動(dòng)相所用甲醇為色譜純(默克)，水為超純水，其它試劑均為分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 以甲醇為溶劑，在190～400 nm波長(zhǎng)內(nèi)掃描，測(cè)得原兒茶醛紫外吸收?qǐng)D譜，如圖1所示?？梢钥闯鲈瓋翰枞?duì)照品最大吸收波長(zhǎng)278.4 nm處，藥典中原兒茶醛測(cè)定波長(zhǎng)為280 nm[3]，考慮與藥典一致，選擇280 nm處作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-磷酸(7:93)為流動(dòng)相，柱溫30℃，流速：1.0 mL/min，進(jìn)樣量：10 μL；原兒茶醛的檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。

2.3 溶液的制備

2.3.1 供試品溶液的制備 取本品20粒內(nèi)容物，混勻，精密稱定，取約2.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入水50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25 mL，用乙酸乙酯萃取5次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，過(guò)濾，即得。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定原兒茶醛對(duì)照品28.88 mg置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，再精密量取儲(chǔ)備液2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 陰性溶液的制備 取處方中除去丹參的其他藥味，按照制法制備成不含丹參的樣品，取適量，按照供試品溶液制備方法同法制備。

2.4 專屬性考察 分別取上述3種溶液各10 μL，注入液相色譜儀，結(jié)果，在供試品色譜圖上，在原兒茶醛對(duì)照品溶液保留時(shí)間出現(xiàn)相同的色譜峰，紫外圖譜一致，分離度、拖尾因子符合要求，陰性溶液未見(jiàn)干擾。如圖2所示。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線 測(cè)定精密吸取對(duì)照品溶液2、5、10、15、20、30 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值。以對(duì)照品溶液的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為Y=4×106X-2087.1，r=0.9999，結(jié)果表明，原兒茶醛在0.0452～0.6787 μg范圍內(nèi)，峰面積與含量有良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，測(cè)定結(jié)果經(jīng)計(jì)算，RSD為 0.4%，表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品，按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液6份，精密量取供試品溶液10 μL，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果含量平均值為0.2403 mg/g，RSD為2.2%，重復(fù)性較好。

2.8 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液1份，分別在0、4、8、12、16、18 h記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.3%，表明供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定性均良好，。

2.9 回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的供試品9份，每份約1.25 g，精密稱定，至錐形瓶中，分別精密加入一定量的對(duì)照品溶液，按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定，計(jì)算回收率見(jiàn)表1。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果 (n=9)

2.10 樣品含量測(cè)定 結(jié)果 按照擬定的方法測(cè)定10批次樣品含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 提取方法的選擇 原兒茶醛為丹參中的水溶性成分[5-6]，原兒茶醛測(cè)定方法已經(jīng)比較成熟，大多采用超聲提取和回流提取兩種方法[7-8]。選擇了將樣品分別用水和甲醇溶解后采用超聲和回流后用乙酸乙酯萃取分離的方法制備供試品溶液，結(jié)果采用回流提取的樣品，含量明顯高于采用甲醇或水超聲提取的樣品，回流提取的樣品采用乙酸乙酯萃取后，樣品峰在對(duì)照品出峰位置無(wú)干擾，未萃取的樣品雜質(zhì)較多，存在干擾，因此，經(jīng)試驗(yàn)，選擇將樣品用水回流后用乙酸乙酯萃取作為樣品的制備方法。

3.2 流動(dòng)相的選擇 參考文獻(xiàn)[7-9]，分別對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行考察，結(jié)果流動(dòng)相甲醇-0.1%磷酸(7∶93)、甲醇-水(10∶90)、乙腈-水(5∶95)均能達(dá)到統(tǒng)適用性要求，甲醇-0.1%磷酸(7∶93)為流動(dòng)相時(shí)分離度更高，因此作為測(cè)定用流動(dòng)相。

通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，采用擬定的方法測(cè)定調(diào)經(jīng)益母膠囊中原兒茶醛含量的方法準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、線性關(guān)系及耐用性良好，可作為調(diào)經(jīng)益母膠囊的質(zhì)量控制方法。