□ 趙麗艷 陳宇飛 吉林工商學院糧食學院

隨著社會的快速進步和經(jīng)濟的高速發(fā)展，人們對自身健康日益關注，天然食品添加劑的研究范圍也不斷擴大。花色苷是一種安全無毒的水溶性天然色素，具有抑制肥胖，增強人體免疫力，增強體質(zhì)，延緩衰老與提升視力等多種作用[1]，并逐漸被廣泛用在食品、化妝品、醫(yī)藥等方面。目前，花色苷提取、純化工藝和穩(wěn)定性的研究較為成熟，但作為抑菌物質(zhì)也有著特殊的優(yōu)越性，如不產(chǎn)生耐藥性、不會導致環(huán)境污染[2]。本研究旨在通過黑米花色苷體外抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的研究，為黑米的深入開發(fā)利用和相關農(nóng)產(chǎn)品的功能開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黑米花色苷通過乙醇水溶液浸提法提取；大腸桿菌、金黃色葡萄球菌由吉林工商學院微生物實驗室提供。

全自動高壓滅菌鍋，馭諾儀器（上海）有限公司；超凈工作臺（SW-CJIFD），蘇州精華設備責任有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱（DHP-9162），一恒科技（上海）有限公司；恒溫培養(yǎng)振蕩機，北京海天友誠科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備

牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，（瓊脂20 g），水1 000 mL，pH 7.2～ 7.4，121 ℃滅菌 20 min，用于培養(yǎng)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌。

1.2.2 供試菌液的制備

在無菌條件下，將活化后的供試菌種接種到液體培養(yǎng)基中，于37 ℃搖床培養(yǎng)12～16 h（培養(yǎng)到對數(shù)長期），備用。

1.2.3 黑米花色苷的抑菌作用

在無菌條件下，將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基凝固冷卻后，分別加入0.2 mL菌液，并涂布均勻。將無菌濾紙片（直徑6 mm）分別浸泡于黑米花色苷提取液、75%乙醇溶液中，待浸透后，用鑷子夾取，分別放入涂布菌液的培養(yǎng)基表面上。靜置片刻，倒置于37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)36 h后，測量抑菌圈直徑（mm）。

1.2.4 最小抑菌濃度的測定

將已制備好的黑米花色苷濃縮液用二倍稀釋法制成不同濃度梯度的溶液，分別取1 mL加入到裝有供試菌株的培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)36 h，觀察其生長情況，以不長菌的稀釋液濃度為最小抑菌濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 黑米花色苷的抑菌效果

黑米花色苷的抑菌效果（圖1）表明黑米花色苷對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有一定程度的抑制效果，且對大腸桿菌的抑制效果（抑菌圈直徑為17.8 mm）要強于金黃色葡萄球菌（抑菌圈直徑為8.2 mm）。在這兩種菌的對照平板中，沒有檢測到抑菌圈，這與張曼莉[3]報道的黑米花青素抑菌活性結(jié)果基本一致。

圖1 黑米花色苷的抑菌效果

2.2 最小抑菌濃度的測定

采用二倍稀釋法測定黑米花色苷對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度，從表1可以看出，黑米花色苷對這兩種細菌的最小抑菌濃度分別為大腸桿菌1.5 mg/mL、金黃色葡萄球菌6 mg/mL，抑菌效果隨著花色苷濃度的增加而增強。

表1 黑米花色苷的最小抑菌濃度

3 結(jié)論

黑米花色苷對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有一定程度的抑制效果，且對大腸桿菌的抑制效果更強。黑米花色苷對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度分別為1.5、6 mg/mL，隨著花色苷濃度的增加，抑菌效果增強，這為黑米的功能研究與開發(fā)提供了一定的數(shù)據(jù)參考。