侯愛(ài)香，李珂，肖愈，李宗軍

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)a.食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院；b.食品科學(xué)與生物技術(shù)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；c.國(guó)家植物功能成分利用工程技術(shù)研究中心，長(zhǎng)沙410128)

0 引言

OPO被作為一種顯著有效的功能成分被廣泛添加到嬰幼兒配方乳粉中，通常以O(shè)PO乳脂粉的形式添加，用棕櫚油和酶制成富含OPO（40%）的植物乳脂油，然后加入乳糖等成分，經(jīng)乳化、干燥，制成粉劑，即富含OPO的植物乳脂粉（簡(jiǎn)稱OPO乳脂粉）。對(duì)照國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn)GB1488-2012年食品營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充使用標(biāo)準(zhǔn)，嬰幼兒配方奶粉OPO的添加量為24～96 g/kg，在此范圍內(nèi)，多少濃度的OPO能更好的促進(jìn)益生菌的生長(zhǎng)并未明確。本研究以24月齡幼兒的糞便為菌源，研究不同濃度OPO乳脂粉24 h體外發(fā)酵過(guò)程中主要腸道微生物的變化情況，對(duì)雙歧桿菌、總厭氧菌、擬桿菌、梭狀芽孢桿菌、乳酸桿菌、腸桿菌和總需氧菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，并計(jì)算對(duì)應(yīng)的益生元指數(shù)PI和B/E值，評(píng)價(jià)不同濃度OPO-P的益生效果。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料

OPO乳脂粉（OPO-P）：又稱富含OPO的植物乳脂粉，其中有質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%植物精煉油（該植物精煉油為含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)40%的OPO棕櫚油）；乳糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為41.63%；蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.21%；水份質(zhì)量分?jǐn)?shù)3.72%；穩(wěn)定劑、乳化劑、維生素、和礦物質(zhì)等成分合計(jì)為0.44%。

糞便樣選擇主要參考文獻(xiàn)[1-2]中方法。選擇斷奶半年，均未食用OPO配方奶粉的24月齡3名幼兒為志愿者，幼兒2月內(nèi)未服用抗生素，無(wú)腸道病史，采集3名志愿者的新鮮糞便。

含氮基礎(chǔ)發(fā)酵液為空白對(duì)照的基礎(chǔ)發(fā)酵液，其配方如下[3]：1 L水中含2 g酵母粉，2 g蛋白胨，2 g NaHCO3，4 m L質(zhì)量濃度為0.025 g/100 m L的刃天青，2 m L吐溫-80，0.5 g膽汁酸鹽，0.5 g L-半胱氨酸，0.l g N aC l，0.05 g氯化血紅素，0.04 g K2HPO4，0.01 g M g-SO4-7H2O，0.01 g CaC l2.7H2O，10μL VK。

傳統(tǒng)培養(yǎng)技術(shù)采用的選擇性培養(yǎng)基：計(jì)數(shù)總厭氧菌的培養(yǎng)基為W ilkins and Chalgren瓊脂[4]；計(jì)數(shù)雙歧桿菌的培養(yǎng)基為BBL培養(yǎng)基[5]；計(jì)數(shù)乳桿菌的培養(yǎng)基為R ogosa培養(yǎng)基[6]；計(jì)數(shù)梭狀芽孢桿菌的培養(yǎng)基為Sulfite-polym yxin-milk瓊脂[7]；擬桿菌用擬桿菌礦物鹽瓊脂計(jì)數(shù)[8]；腸桿菌用紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂計(jì)數(shù)[9]；總需氧菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂計(jì)數(shù)[10]。

1.2 儀器與設(shè)備

TP-213分析天平，SP500高壓蒸氣滅菌鍋，SW-CJ-2D超凈工作臺(tái)，YQX-I厭氧培養(yǎng)箱，SPX-250B-Z恒溫生化培養(yǎng)箱，C-1厭氧產(chǎn)氣袋，C-43圓底立式培養(yǎng)袋，旋渦振蕩器，XK 97-A菌落計(jì)數(shù)器。

1.3 方法

1.3.1 菌源處理

將所取糞便樣在厭氧操作箱中迅速解凍，將baby1，baby2和baby3糞樣各取10 g混勻，記為mixbaby，將mixbaby加入90 m L PBS緩沖液(pH=7.0)中稀釋，加無(wú)菌玻璃珠渦旋振蕩，使糞便充分分散。稀釋后的糞液用4層無(wú)菌紗布過(guò)濾，除去濾渣，取稀釋后的濾液為菌源，整個(gè)處理過(guò)程在1 h內(nèi)完成。

1.3.2 OPO乳脂粉的厭氧發(fā)酵

通過(guò)查閱喬來(lái)艷[11]和XinZhang[2]等人做體外發(fā)酵研究的文獻(xiàn)，將他們所用的體外發(fā)酵方法進(jìn)行改進(jìn)，用于OPO乳脂粉對(duì)人體腸道微生物的影響研究。在37℃條件下，模擬人體腸道環(huán)境，配置對(duì)照組基礎(chǔ)發(fā)酵液和實(shí)驗(yàn)組OPO乳脂粉發(fā)酵液，加入采集處理好的菌源，進(jìn)行間歇式靜態(tài)厭氧發(fā)酵24 h，監(jiān)測(cè)各發(fā)酵階段（0，4，8，12，24 h）微生物指標(biāo)，對(duì)總厭氧菌、擬桿菌、雙歧桿菌、梭狀芽孢桿菌、乳酸桿菌、腸桿菌和總需氧菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。

將菌源按接種量10%的量，分別加入空白組發(fā)酵液和實(shí)驗(yàn)組發(fā)酵液中。研究以含氮基礎(chǔ)發(fā)酵液為空白組，以添加了不同濃度OPO-P的發(fā)酵液為實(shí)驗(yàn)組。其中實(shí)驗(yàn)組OPO的添加量參考國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn)GB1488-2012年食品營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充使用標(biāo)準(zhǔn)“嬰幼兒配方奶粉OPO的添加量為24～96 g/kg”的要求，再結(jié)合實(shí)際沖泡奶粉時(shí)，一般常用的稀釋比為4.5 g奶粉兌30 m L水，分別以國(guó)標(biāo)上限96 g/kg，中間質(zhì)量分?jǐn)?shù)50 g/kg和下限24 g/kg的添加量，在含氮基礎(chǔ)發(fā)酵液中加入OPO植物乳脂粉為實(shí)驗(yàn)組，結(jié)合稀釋比在發(fā)酵液中折算成OPO的質(zhì)量濃度，分別為3.6，7.5，14.4 m g/m L，分別記為3.6 m g/m L組，7.5 m g/m L組，14.4 m g/m L組。將空白組和各濃度實(shí)驗(yàn)組發(fā)酵液分別分裝在Hungate厭氧滾管，置于37℃厭氧培養(yǎng)箱中發(fā)酵，所有試驗(yàn)都進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)。

1.3.3 微生物檢測(cè)計(jì)數(shù)

參考Palfram an等人[12]和江南大學(xué)趙蘭濤[13]所用的腸道微生物計(jì)數(shù)方法，用傳統(tǒng)的稀釋平板法，選取合適梯度稀釋液100μL均勻涂布在7種選擇性培養(yǎng)基上。涂布后總厭氧菌、擬桿菌、雙歧桿菌和梭狀芽孢桿菌在37℃厭氧培養(yǎng)48～96 h后分別計(jì)數(shù)；乳酸桿菌、腸桿菌和總需氧菌在37℃,培養(yǎng)48 h后分別計(jì)數(shù)。

1.3.4 益生元指數(shù)計(jì)算

評(píng)價(jià)腸道菌群是否正常、平衡的重要指標(biāo)有益生元指數(shù)，眾多研究者采納Palfram an等人的計(jì)算方法[12]，其計(jì)算公式如下：

式中：T，Bif，L，Bac，C分別指取樣時(shí)發(fā)酵液中總菌數(shù)、雙歧桿菌數(shù)、乳酸桿菌數(shù)、擬桿菌數(shù)、梭狀芽孢桿菌數(shù)量和接種時(shí)發(fā)酵液中總菌數(shù)、雙歧桿菌數(shù)、乳酸桿菌屬、擬桿菌數(shù)、梭狀芽孢桿菌數(shù)量的比值。

1.3.5 B/E值的計(jì)算

B/E值為腸道內(nèi)雙歧桿菌和腸桿菌數(shù)量之比，計(jì)算公式為B/E=Bif/Ent。

1.3.6 數(shù)據(jù)處理

研究所有試驗(yàn)均進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)，每個(gè)樣品進(jìn)行了3次測(cè)定，數(shù)據(jù)通過(guò)Excel 2013軟件完成統(tǒng)理，結(jié)果以SPSS.21.0軟件的單因素分析方法（ANOVA）進(jìn)行顯著性分析，兩兩比較采用最小差異法（LSD）,檢驗(yàn)性水準(zhǔn)a=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 雙歧桿菌和乳桿菌變化結(jié)果

雙歧桿菌和乳酸桿菌通常作為腸道微生物有益菌的代表，通過(guò)添加不同質(zhì)量濃度的OPO-P進(jìn)行24 h體外發(fā)酵，將兩類菌的計(jì)數(shù)結(jié)果列表，如表1所示。

表1 體外發(fā)酵過(guò)程中雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果 cfu·m L-1

表2 體外發(fā)酵過(guò)程中擬桿菌、梭狀芽孢桿菌和腸桿菌的數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果 cfu·m L-1

由表1可以看出，所有發(fā)酵液，雙歧桿菌數(shù)都存在先上升后下降的趨勢(shì)。3個(gè)不同濃度OPO-P的添加，都能促進(jìn)雙歧桿菌的生長(zhǎng)繁殖，在發(fā)酵的前8 h內(nèi)，雙歧桿菌數(shù)量與OPO-P的添加量成正比，添加的OPO-P濃度越大雙歧桿菌的數(shù)量越多，在發(fā)酵8 h的時(shí)候各組發(fā)酵液的雙歧桿菌數(shù)都達(dá)到最大值；在8～24 h的發(fā)酵階段，所有發(fā)酵液中雙歧桿菌數(shù)量都呈不同程度的下降，14.4 m g/m L濃度組發(fā)酵液中雙歧桿菌數(shù)下降幅度最大。3個(gè)不同濃度OPO-P的添加，都能大幅度的促進(jìn)雙歧桿菌的生長(zhǎng)繁殖，但促進(jìn)作用與OPO-P的添加量沒(méi)有表現(xiàn)出特定的量效規(guī)律。同時(shí)，0 h的乳酸桿菌初始菌數(shù)水平較為一致，沒(méi)有顯著性差異。添加了OPO-P的3個(gè)發(fā)酵液乳酸桿菌數(shù)均呈先上升后下降趨勢(shì)，各組發(fā)酵液乳酸桿菌數(shù)均在12 h時(shí)達(dá)到最大，3個(gè)添加了OPO-P的發(fā)酵液在發(fā)酵前12 h內(nèi)呈線性上升趨勢(shì)，12 h之后，均呈不同程度的下降趨勢(shì)，3.6 m g/m L組乳酸桿菌的下降幅度略大于14.4 m g/m L組和7.5 m g/m L組；但空白基礎(chǔ)發(fā)酵液整個(gè)發(fā)酵過(guò)程乳酸桿菌數(shù)均呈遞減趨勢(shì)。3個(gè)不同濃度OPO-P的添加，都能促進(jìn)乳酸桿菌的生長(zhǎng)繁殖，但促進(jìn)作用沒(méi)有表現(xiàn)出特定的量效規(guī)律。

2.2 擬桿菌和梭狀芽孢桿菌變化結(jié)果

擬桿菌、梭狀芽孢桿菌和腸桿菌通常作為腸道菌群中無(wú)益菌群的代表，通過(guò)添加不同濃度OPO-P進(jìn)行24 h體外發(fā)酵，三類菌計(jì)數(shù)結(jié)果如表2所示。

由表2可以看出，擬桿菌、梭狀芽孢桿菌和腸桿菌的菌數(shù)初始水平在各組中均無(wú)顯著性差異，擬桿菌和腸桿菌在4 h階段，各組發(fā)酵液菌數(shù)水平也無(wú)明顯差異。但后期發(fā)現(xiàn)，OPO-P對(duì)擬桿菌和梭狀芽孢桿菌均有一定的抑制作用，空白基礎(chǔ)發(fā)酵液這兩菌各階段的數(shù)量均高于實(shí)驗(yàn)組發(fā)酵液，但抑制作用與OPO-P添加量沒(méi)有明顯的量效規(guī)律。OPO-P的添加在整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中對(duì)腸桿菌數(shù)量沒(méi)有表現(xiàn)出一致的抑制或促進(jìn)作用，在4 h和8 h階段，能促進(jìn)腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖，之后呈現(xiàn)抑制作用，使腸桿菌數(shù)量呈不同程度的下降。

2.3 總厭氧菌與總需氧菌的變化結(jié)果

腸道微生物包括厭氧菌和需氧菌，通過(guò)添加不同質(zhì)量濃度的OPO-P進(jìn)行24 h體外發(fā)酵，將兩類菌的計(jì)數(shù)結(jié)果列表，如表3所示。

由表3可以看出,體外發(fā)酵24 h的過(guò)程中，所有發(fā)酵液中總厭氧菌數(shù)量與時(shí)間呈正相關(guān)，隨著時(shí)間的延續(xù)不斷遞增，且發(fā)酵前8h階段的遞增速度大于后期，添加了OPO-P的試驗(yàn)組均高于空白的基礎(chǔ)對(duì)照組，添加量對(duì)總厭氧菌數(shù)量影響沒(méi)有明顯的量效規(guī)律。所有發(fā)酵液的總需氧菌總體呈上升趨勢(shì)，但在前8 h時(shí)呈線性上升趨勢(shì)，并在8 h時(shí)總需氧菌數(shù)量達(dá)到最大，8 h后呈不同程度的下降趨勢(shì)。

2.4 OPO-P添加量對(duì)PI值的影響

由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)組不可避免的有接種不均勻和初始菌數(shù)不一致的情況，單獨(dú)通過(guò)對(duì)各類菌群不同發(fā)酵時(shí)間段的菌落數(shù)進(jìn)行比較來(lái)衡量營(yíng)養(yǎng)素的益生作用存在偏差。因此，21世紀(jì)初Palframan等人提出了益生元指數(shù)PI，他們通過(guò)比較PI值的大小，定量描述試驗(yàn)中各類低聚糖的益生效果。本研究借鑒使用PI指標(biāo)，用以評(píng)價(jià)不同質(zhì)量濃度OPO-P與嬰幼兒腸道微生物互作的益生作用。

表3 體外發(fā)酵過(guò)程中總厭氧菌、總需氧菌的數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果 m L-1

由圖1可以看出，基礎(chǔ)發(fā)酵液空白組的PI值為負(fù)，不呈現(xiàn)益生作用。添加了不同濃度OPO-P的試驗(yàn)組的益生元指數(shù)PI，都呈先上升后下降趨勢(shì)，且均在8 h階段達(dá)到最大值，說(shuō)明3個(gè)質(zhì)量濃度OPO-P的添加，都有明顯的益生作用，分批一次培養(yǎng)過(guò)程中，都在8 h階段益生效果最好。綜合比較，發(fā)現(xiàn)各時(shí)間段益生元指數(shù)最高的一組均為7.5 m g/m L組，以此評(píng)判該組益生效果最好，并在8 h階段PI值最大，達(dá)到2.73。研究中，益生效果與OPO-P的添加量不成嚴(yán)格的正比關(guān)系。這結(jié)果與微生物計(jì)數(shù)中雙歧桿菌數(shù)和乳酸桿菌數(shù)的結(jié)果并不完全一致。在雙歧桿菌計(jì)數(shù)過(guò)程中，由表1可以看出，發(fā)酵8 h階段，14.4 m g/m L組的雙歧桿菌數(shù)量最多，發(fā)酵12 h和24 h階段，14.4 m g/m L組的乳酸桿菌數(shù)量最多，但在圖1中PI在8,12 h和24 h階段都是7.5 m g/m L組最大，因?yàn)镻I值還與這些時(shí)間段的擬桿菌數(shù)和梭狀芽孢桿菌數(shù)相關(guān)。

圖1 不同質(zhì)量濃度OPO-P的益生元指數(shù)（PI）

圖2 不同質(zhì)量濃度OPO-P的B/E值

2.5 OPO-P添加量對(duì)B/E值的影響

借鑒Van Der W aaij等以將B/E值作為腸道菌群定殖抗力指標(biāo)的研究，本研究用B/E值反映幼兒腸道菌群結(jié)構(gòu)，作為益生效果評(píng)價(jià)的補(bǔ)充指標(biāo)。將表1中雙歧桿菌數(shù)量和表2中腸桿菌數(shù)量帶入計(jì)算公式，得B/E值如圖2所示。

若B/E＞1，表示腸道菌群中雙歧桿菌的水平高于腸桿菌科的水平；若B/E≤1，則表示腸道菌群中雙歧桿菌的水平低于腸桿菌科的水平，B/E越大說(shuō)明腸道菌群越平衡，定殖能力越強(qiáng)，相應(yīng)的益生效果越好。由圖2可以看出，空白組的B/E值在發(fā)酵的各個(gè)階段都小于添加了OPO-P的試驗(yàn)組，說(shuō)明沒(méi)有添加OPO-P的基礎(chǔ)發(fā)酵液體系中雙歧桿菌沒(méi)能迅速形成優(yōu)勢(shì)菌。但在添加了OPO-P的所有實(shí)驗(yàn)組中，B/E值都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于1，說(shuō)明糞便樣品作為菌源，在發(fā)酵過(guò)程中雙歧桿菌迅速成為優(yōu)勢(shì)菌，占有明顯的優(yōu)勢(shì)地位，均顯示出明顯的改善腸道菌群的作用。但這種益生效果與OPO-P濃度的量效關(guān)系不固定，在0～8 h階段14.4 m g/m L組的B/E值最大，表現(xiàn)的益生效果最好，而最后12～24 h的階段7.5 m g/m L組的B/E值最大，表現(xiàn)出最好的益生效果。

3 討論

3.1 腸道微生物的檢測(cè)

本研究采用的傳統(tǒng)培養(yǎng)技術(shù)對(duì)腸道微生物中典型的有益菌、無(wú)益菌進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。傳統(tǒng)培養(yǎng)方法，設(shè)備要求簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)要求不高，試驗(yàn)成本不貴，試驗(yàn)周期也不長(zhǎng)，數(shù)據(jù)直觀，數(shù)據(jù)處理簡(jiǎn)單，是很多研究腸道微生物的學(xué)者經(jīng)常采用的方法[14]。趙敏[15]、李艷莉[16]和曾艷華[17]等人先后用傳統(tǒng)培養(yǎng)技術(shù)研究了山萊英-熟地黃藥對(duì)與腸道菌群的相互作用、低聚糖對(duì)嬰兒腸道菌群的益生功能和中性大蒜果聚糖調(diào)節(jié)腸道菌群功能。但是這種方法也有很多局限，一是能培養(yǎng)的微生物種類有限，腸道微生物的類群多樣，不能準(zhǔn)確的反映腸道菌群的真實(shí)情況；二是只能對(duì)樣品體系中的活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，數(shù)據(jù)有所遺漏。因此，本研究中厭氧培養(yǎng)的擬桿菌、雙歧桿菌和梭狀芽孢桿菌的總數(shù)并不等于測(cè)得的總厭氧菌數(shù)，需氧培養(yǎng)的乳酸桿菌和腸桿菌之和也不等于測(cè)得的總需氧菌數(shù)。再此基礎(chǔ)上，為克服傳統(tǒng)培養(yǎng)技術(shù)的缺陷，有研究者改良腸道微生物計(jì)數(shù)的方法，如謝旻皓[18],張?chǎng)蝃19]Vernazza[20]和Sánchez-Patán[21]等人采用FISH(fluorescence in situ hybridization)計(jì)數(shù)技術(shù)，來(lái)檢測(cè)腸道菌群的變化情況。隨著微生物檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的研究者采用高通量測(cè)序的方法研究腸道微生物[22-23]。吳根梁[24]等人采用Illum ina M iSeq平臺(tái)高通量測(cè)序研究茶多酚對(duì)腸道微生物的組成、多樣性的影響，M inhao X ie等人[25]，利用16S rRNA高通量測(cè)序研究苦丁茶的有效成分二咖啡酰奎寧酸體外發(fā)酵對(duì)腸道微生物的影響；陳蕾[26]等人通過(guò)傳統(tǒng)培養(yǎng)技術(shù)之后進(jìn)一步采用PCR-TGGE技術(shù)檢測(cè)苦蕎對(duì)腸道微生物多樣性的影響。因此，可以借鑒現(xiàn)代測(cè)序技術(shù)進(jìn)一步研究OPO-P或OPO對(duì)幼兒腸道微生物的影響作用。

3.2 益生效果的評(píng)價(jià)

雙歧桿菌，乳酸桿菌通常作為腸道微生物中的有益菌，腸桿菌、梭狀芽胞桿菌和擬桿菌通常會(huì)被認(rèn)為是無(wú)益菌，某種物質(zhì)若能促進(jìn)雙歧桿菌或乳酸桿菌的大量生長(zhǎng)，或能抑制腸桿菌、梭狀芽胞桿菌和擬桿菌的生長(zhǎng)，通常會(huì)被認(rèn)為具有益生效果，能夠調(diào)節(jié)腸道微生物，促進(jìn)腸道菌群平衡，彭春喜[27]，張寧[28]等人先后采用這種方法評(píng)價(jià)膳食纖維和大蒜果聚糖的益生功效。但這種方法無(wú)法避免接種不均勻、初始菌數(shù)不一致和體系中總菌數(shù)存在差異的實(shí)際問(wèn)題，且無(wú)法確定營(yíng)養(yǎng)素對(duì)有益菌的促進(jìn)作用是否大于對(duì)無(wú)益菌的抑制作用，有益菌是否形成優(yōu)勢(shì)菌定殖于腸道。因此，研究者們以B/E值、PI值等指數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)益生效果，如Palfram an等人[12],用PI值評(píng)價(jià)低聚果糖的益生效果，趙蘭濤等人[13],以PI值評(píng)價(jià)全谷物對(duì)腸道菌群的益生作用，Van Der W aaij等人[29],用B/E值衡量益生效果。此外，曾艷華[17],改良Palfram an等人的計(jì)算方法，利用益生元活性分?jǐn)?shù)來(lái)衡量益生效果，其計(jì)算公式如下：“益生元活性分?jǐn)?shù)=[(24 h益生元培養(yǎng)基中的益生菌-0h益生元培養(yǎng)基中的益生菌)/(24 h葡萄糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的益生菌-0h葡萄糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的益生菌)]-[(24 h益生元培養(yǎng)基中的腸桿菌-0h益生元培養(yǎng)基中的腸桿菌)/(24 h葡萄糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的腸桿菌-0h葡萄糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的腸桿菌]”。其計(jì)算公式中的益生菌以雙歧桿菌和乳酸桿菌來(lái)計(jì)算，腸桿菌以大腸桿菌和腸球菌來(lái)計(jì)算。

此外，大量腸道微生物與膳食因子互作的研究通常還以代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸以及乳酸作為衡量膳食因子益生效果的指標(biāo)之一。以增加短鏈脂肪酸產(chǎn)量特別是丁酸、乳酸產(chǎn)量，改變腸道p H值，作為益生指標(biāo)，如Jelena Vu levic等人[30]，則將代謝產(chǎn)物乳酸納入影響因素，以益生元效果指數(shù)（M easurement of prebiotic effect M PE）來(lái)計(jì)算益生效果。本研究雖然結(jié)合了微生物計(jì)數(shù)、PI值和B/E值進(jìn)行益生效果評(píng)價(jià)，還可以結(jié)合更多合適的指標(biāo)進(jìn)行進(jìn)一步評(píng)價(jià)。

4 結(jié)論

本研究通過(guò)對(duì)腸道微生物中傳統(tǒng)的有益菌和無(wú)益菌進(jìn)行分別計(jì)數(shù)，并結(jié)合益生元評(píng)價(jià)指標(biāo)PI值和B/E值評(píng)估了國(guó)標(biāo)范圍內(nèi)不同質(zhì)量濃度OPO-P的益生效果，兩者結(jié)合，比采用單一評(píng)價(jià)方式得出的結(jié)論更準(zhǔn)確。研究發(fā)現(xiàn)不同質(zhì)量濃度OPO-P都能有效調(diào)節(jié)腸道菌群，但7.5 m g/m L組益生效果最好，為嬰幼兒配方奶粉中OPO-P的高效添加提供了基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)。但本研究采用傳統(tǒng)培養(yǎng)技術(shù)對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)有一定的局限性，益生效果評(píng)價(jià)的指標(biāo)也有限，要獲得OPO-P或OPO益生效果更全面的評(píng)價(jià)，一方面可以采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)微生物數(shù)量變化進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析，另一方面還可以結(jié)合腸道微生物的p H值環(huán)境，短鏈脂肪酸、有機(jī)酸等代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量和種類等指標(biāo)進(jìn)行更全面的評(píng)價(jià)。