周玉航

（惠州市中信惠州醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東 惠州 516006）

乙肝病毒標(biāo)志物包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 5項(xiàng)，ELISA是常用的篩查方法，但其對(duì)檢測(cè)HBsAg結(jié)果僅可反映機(jī)體對(duì)HBV感染的免疫反應(yīng)狀態(tài)，此外因抗原、抗體變異、窗口期等因素影響可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不可靠[1-2]。目前FQ-PCR是檢測(cè)HBV-DNA的最佳方案，該技術(shù)是一種核酸檢測(cè)技術(shù)，該技術(shù)應(yīng)用優(yōu)勢(shì)包括完全閉管檢測(cè)，不需要進(jìn)行PCR后處理，可連續(xù)檢測(cè)出熒光信號(hào)的變化，定量的準(zhǔn)確性較高，可較好反應(yīng)HBV復(fù)制情況[3-4]。研究納入ABC組3項(xiàng)標(biāo)本，行FQ-PCR檢測(cè)后的A組陰性、B、C組陽性樣本再作HBV-M（乙肝病毒標(biāo)志物）檢測(cè)，現(xiàn)將具體報(bào)道如下：

1.資料與方法

1.1 一般資料

本單位于2017年1月－2018年1月對(duì)10721份無償獻(xiàn)血者采集血漿標(biāo)本，獻(xiàn)血者年齡范圍在22～55周歲，其中男57390人、女46669人。

1.2 方法

儀器設(shè)備：廈門新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)的HBsAg試劑；上?？迫A公司生產(chǎn)的ELISA 試劑、瑞士HAMILTON公司生產(chǎn)的FAME全自動(dòng)酶分析系統(tǒng)；由專業(yè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說明書完成操作，結(jié)果判定：有反應(yīng)性：s/co≥1；無反應(yīng)性：s/co＜0.8；灰區(qū)可疑：0.8 ≤s/co＜1。

HBV-M 5項(xiàng)檢測(cè)：采用ELISA試劑，實(shí)驗(yàn)人員嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，進(jìn)行分析，結(jié)果判定：有反應(yīng)性：s/co≥1 ；無反應(yīng)性：s/co＜1。

FQ-PCR檢測(cè)：采用中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的HBV-DNA試劑盒；美國 PE-5700 型 PCR擴(kuò)增儀，實(shí)驗(yàn)人員嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，待反應(yīng)結(jié)束后使用電腦自動(dòng)分析計(jì)算HBVDNA定量結(jié)果，以cP/ml表示結(jié)果。需注意的是以下情況不參加平均值的統(tǒng)計(jì)：求算術(shù)平均值的方法計(jì)算HBV-DNA平均拷貝數(shù)時(shí)發(fā)現(xiàn)無反應(yīng)性結(jié)果。結(jié)果判定：有反應(yīng)性：≥1000 cP/ml；無反應(yīng)性：＜1000 cP/ml。

2.結(jié)果

A組標(biāo)本經(jīng)FQ-PCR檢測(cè)，HBV-DNA有反應(yīng)性為108例(54.55%)；無反應(yīng)性90例(標(biāo)本A1)。

B組標(biāo)本檢測(cè)后HBV-DNA有反應(yīng)性34例(32.38%)，作為標(biāo)本B1。

C組標(biāo)本檢測(cè)后HBV-DNA有反應(yīng)性為5例(0.51%)，作為標(biāo)本C1。分別對(duì)標(biāo)本A1、B1、C1組再進(jìn)行HBV-M 5項(xiàng)檢測(cè)，結(jié)果見表1-3。

表1 標(biāo)本A1的HBV-M檢測(cè)結(jié)果

從表1可以看出,FQ-PCR檢測(cè)為陰性樣本，ELISA HBsAg均為陽性。

表2 標(biāo)本B1的HBV-M檢測(cè)結(jié)果

表3 標(biāo)本C1的HBV-M檢測(cè)結(jié)果

從表2和表3可以看出,FQ-PCR檢測(cè)為陽性樣本，再經(jīng)ELISA HBsAg檢測(cè)，為可疑或陰性。

3.討論

A組標(biāo)本ELISA檢測(cè)有反應(yīng)性經(jīng)FQ-PCR檢測(cè)，陽性率僅為54.55%，實(shí)際上血液中的HBsAg多為空殼，不含有病毒顆粒，對(duì)病毒復(fù)制、傳染性強(qiáng)弱不能直觀反映，而HBV-DNA指標(biāo)可直接反映HBV復(fù)制情況，可直接檢測(cè)病毒本身，由此可見血站可采用ELISA法結(jié)合FQ-PCR檢測(cè)，表1結(jié)果顯示90例HBsAg有反應(yīng)性，大部分患者屬于“正?！钡腍BsAg攜帶者。表1中模式2、3、4說明ELISA檢測(cè)結(jié)果中無論存在幾項(xiàng)有反應(yīng)性，無完整的病毒顆粒依然會(huì)存在，表示機(jī)體未出現(xiàn)病毒復(fù)制，病毒相對(duì)靜止，處于無活動(dòng)狀態(tài)。出現(xiàn)該現(xiàn)象情況亦可能與HBV-DNA所用引物不匹配有關(guān)；此外HBV-DNA檢測(cè)結(jié)果如呈假陰性則可能表示HBV-DNA整合于宿主細(xì)胞基因中，該情況下采用FQ-PCR檢測(cè)方法依然無法檢出，表示機(jī)體傳染性相對(duì)較低[5]。

標(biāo)本B 34例(32.38%)，該結(jié)果說明HBsAg“窗口期”可能指部分灰區(qū)可疑，采用FQ-PCR檢測(cè)方法具有高度靈敏性，結(jié)果同樣驗(yàn)證出血站有必要架設(shè)灰區(qū)可疑。表2模式1與表3模式1的存在可能說明目前HBsAg檢測(cè)試劑盒檢測(cè)后可能出現(xiàn)ayr、ayw等亞型的檢測(cè)漏檢現(xiàn)象，該試劑盒主要針對(duì)adr、adw亞型進(jìn)行檢測(cè)[6]。FQ-PCR可對(duì)病毒本身進(jìn)行檢測(cè)，具有高特異性。此外有研究顯示HBsAg與HBsAb2者結(jié)合后可能出現(xiàn)免疫復(fù)合物，易導(dǎo)致血清中雖然存在HBsAg但無法檢測(cè)到[7]。表2中模式2中的HBsAb是免疫保護(hù)性抗體，其中6例對(duì)HBV-DNA有反應(yīng)性，考慮到可能因HBsAg灰區(qū)可疑有關(guān)，由此我們認(rèn)為表2模式2、表3模式1可能是HBV隱性感染的恢復(fù)期，該階段機(jī)體雖然出現(xiàn)免疫反應(yīng)，但依然處于HBsAg向HBsAb轉(zhuǎn)化階段，但該階段體內(nèi)依然存在殘余病毒，該結(jié)果表明低滴度的HBsAg缺少有效的免疫殺傷細(xì)胞，依然存在感染風(fēng)險(xiǎn)[8]。表2中的3、4、5、6結(jié)果表明在一定條件下HBcAb、HBeAb一類的非保護(hù)性抗體依然可發(fā)生復(fù)制，具有傳染性風(fēng)險(xiǎn)。標(biāo)本3中有反應(yīng)性5例，結(jié)果表明HBV-DNA檢測(cè)具有靈敏性與特異性。

綜上所述，應(yīng)用ELIS法檢測(cè)HBsAg，對(duì)血液進(jìn)行篩選去除有反應(yīng)性血液標(biāo)本后，再對(duì)無反應(yīng)性血液標(biāo)本進(jìn)行HBV-DNA核酸檢測(cè)，最終排除有反應(yīng)性血液，提高輸血安全。