趙燕， 楊文秀， 馮江龍

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 臨床醫(yī)學(xué)院 病理學(xué)教研室， 貴州 貴陽(yáng) 550004； 2.貴州省人民醫(yī)院 眼科， 貴州 貴陽(yáng) 550002)

惡性黑素瘤(malignant melanoma，MM)是一種起源于黑色素細(xì)胞的惡性腫瘤，常見(jiàn)于皮膚、黏膜、眼等部位[1-2]，近年來(lái)MM的發(fā)病率有不斷上升的趨勢(shì)[3]。MM起病隱襲、惡性程度高，易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移，目前尚無(wú)有效的系統(tǒng)治療，病死率較高[4-6]。因此，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療對(duì)于提高M(jìn)M患者的生存率意義重大。由于MM的病理形態(tài)多樣、臨床特征也缺乏特異性，故容易誤診或漏診。因此，探討MM組織形態(tài)學(xué)特點(diǎn)并結(jié)合臨床特征、免疫組織化學(xué)染色的綜合診斷方法，是有望提高M(jìn)M患者早期診斷率和生存率的關(guān)鍵點(diǎn)。MM的診斷和鑒別診斷中黑色素瘤單克隆抗體45(Human Melanoma Black 45，HMB45)、S100和Melan-A是經(jīng)典的免疫組化染色抗體組合[7-8]，近年來(lái)一種特殊的轉(zhuǎn)錄因子Y染色體性別決定區(qū)相關(guān)高遷移率盒10蛋白(SRY-related HMG-box 10protein ，SOX10)作為黑色素細(xì)胞的標(biāo)記應(yīng)用已被逐漸推廣[9]，但這些MM免疫組化標(biāo)記都有自己的表達(dá)特征和一定的表達(dá)盲區(qū)[10]，因此臨床病理中常常是幾種蛋白抗原相對(duì)應(yīng)的抗體組合進(jìn)行診斷。多發(fā)性骨髓瘤基因 (multiple myeloma oncogene1，MUM1) 是一種多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)的癌基因，又稱干擾素調(diào)節(jié)因子4(Interferon regulator 4,IRF4)[11]，MUM1蛋白是干擾素調(diào)節(jié)因子家族中的新成員，在基因調(diào)控中起重要作用[12]。近年來(lái)已有研究發(fā)現(xiàn)，MUM1/IRF4在神經(jīng)脊和黑色素細(xì)胞中表達(dá)[13]；IRF4基因多態(tài)性與黑色素細(xì)胞的分化發(fā)育、色素形成有關(guān)[14]；黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展涉及到多條信號(hào)通路的異常[15]。然而，IRF4編碼的MUM1蛋白表達(dá)對(duì)黑色素瘤影響的研究較少，尤其MUM1蛋白表達(dá)與MM腫瘤細(xì)胞免疫表型的關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)MM患者M(jìn)UM1蛋白和常見(jiàn)的MM瘤細(xì)胞免疫表型S100、Melan-A、HMB45和SOX10的表達(dá)情況，探討MUM1蛋白在MM病理診斷評(píng)估中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年3月～2018年3月某院MM手術(shù)切除的組織標(biāo)本，按照2005年版惡性黑色素瘤WHO分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[16]，選擇資料相對(duì)完整的MM患者60例，男31例、女29例，年齡23～65歲，平均(43.2±2.39)歲；病程1～5年，平均(2.78±0.89)年；病變部位在鼻腔16例，足15例，內(nèi)臟黏膜15例(直腸7例、結(jié)腸8例)，眼睛5例，其他部位(如大腿、小腿等)9例；既往史有黑痣史39例，外傷史10例，其他11例；臨床分期為Ⅰ、Ⅱ期40例，Ⅲ、Ⅳ期20例。

1.2 研究方法

1.2.1免疫組織化學(xué) 石蠟包埋組織切片厚3 μm，脫蠟、水化、消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，采用乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)pH 9.0高壓熱修復(fù)，采用Power Vision兩步法，pH7.4的0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline，PBS)代替一抗作空白對(duì)照，3，3′-二氨基聯(lián)苯胺(3,3-Diaminobenzidine，DAB)顯色，Harris蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。MUM1(福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，1 ∶50)、S100、Melan-A、SOX10及HMB45(福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，1 ∶100為單克隆抗體)均為單克隆抗體。

1.2.2研究指標(biāo) 每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野(400×)，MUM1蛋白和S100蛋白陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞核，Melan-A蛋白、HMB45蛋白及SOX10蛋白表達(dá)于細(xì)胞漿[17-18]，蛋白表達(dá)陽(yáng)性率<20%定為陰性，≥20%定為陽(yáng)性[19]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 MUM1、S100、Melan-A、HMB45及SOX10蛋白表達(dá)

MUM1蛋白陽(yáng)性率為51.7%(31/60)，S100蛋白陽(yáng)性率為86.66%(52/60)，Melan-A蛋白陽(yáng)性率為85.00%(51/60)，HMB45蛋白陽(yáng)性率為93.33%(56/60)，SOX10蛋白陽(yáng)性率為80.00%(48/60)。見(jiàn)圖1。

2.2 MUM1與S100、Melan-A、SOX10及HMB45蛋白的關(guān)系

MUM1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與Melan-A蛋白的陽(yáng)性表達(dá)相關(guān)有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但與S100、SOX10、HMB45蛋白的陽(yáng)性表達(dá)相關(guān)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

3 討論

MM的發(fā)生是由于各種因素導(dǎo)致黑色素細(xì)胞增殖失控，并不同程度地失去分化所致[20]。皮膚是MM的常見(jiàn)部位，眼脈絡(luò)膜MM約占眼部惡性腫瘤的5.3%，黏膜的MM約占全身各處MM的1.3%，由于MM的惡性程度高，容易早期轉(zhuǎn)移，且MM(尤其是黏膜的MM)的病理形態(tài)多樣、臨床特征往往也缺乏特異性，因此，在病理診斷中形態(tài)學(xué)特征結(jié)合臨床特征、免疫組織化學(xué)染色標(biāo)記物的綜合診斷方法，是提高M(jìn)M患者早期診斷率和生存率的一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，多種特異性和敏感性高的免疫組化標(biāo)記指標(biāo)聯(lián)合運(yùn)用，對(duì)于提高M(jìn)M診斷具有重要的意義[21]。MM的診斷和鑒別診斷中HMB45、S100和Melan-A是經(jīng)典的免疫組化染色抗體組合[22]。S100蛋白是一種分子量為21 000的酸性鈣結(jié)合蛋白，在MM中高表達(dá)，并且一定程度上可反映MM病情的進(jìn)展；Melan-A蛋白是MM鑒別診斷中常用的敏感性和特異性都比較高的腫瘤標(biāo)記物，在MM腫瘤細(xì)胞中廣泛表達(dá)，但在梭形細(xì)胞黑素瘤中敏感性差，在促纖維形成性黑素瘤中幾乎不表達(dá)；HMB45也是一種特異性抗細(xì)胞質(zhì)糖蛋白(黑素小體復(fù)合物的成分之一)的單克隆抗體，在MM的診斷中具有較高的特異性和較低的敏感性，其中皮膚MM中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，無(wú)色素型MM組織中陽(yáng)性表達(dá)率高，但在軟組織、真皮或淋巴結(jié)內(nèi)的MM中常呈陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)，在促纖維生成MM或梭形細(xì)胞黑素瘤中幾乎不表達(dá)[23-25]；SOX10蛋白是脊椎動(dòng)物的一種高度保守的蛋白，是神經(jīng)嵴干細(xì)胞的標(biāo)志分子，SOX10蛋白信號(hào)通路常常與神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘的形成有關(guān)，是施旺細(xì)胞和黑素細(xì)胞系腫瘤更為敏感和特異的標(biāo)志物，近年來(lái)作為黑色瘤的標(biāo)記已經(jīng)逐漸被推廣[26]。由于上述蛋白在MM中的表達(dá)特征差異，臨床病理診斷中免疫組化染色時(shí)的抗體選擇常常是幾種蛋白抗原相對(duì)應(yīng)的抗體的組合，而不是單一使用所謂個(gè)別特異性和敏感性高的抗體[27]。本研究結(jié)果顯示，MUM1蛋白表達(dá)與Melan-A蛋白表達(dá)相關(guān)有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但與S100、SOX-10和HMB45表達(dá)相關(guān)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這些結(jié)果表明，MUM1蛋白表達(dá)與Melan-A的表達(dá)有相關(guān)性，這似乎提示MUM1蛋白可作為MM鑒別診斷的細(xì)胞免疫表型之一，對(duì)MM的診斷和鑒別診斷具有一定的價(jià)值。

圖1 MM中MUM1、S100、Melan-A、HMB45及SOX10蛋白的表達(dá)(PV，×400)

表1 MUM1蛋白表達(dá)與MUM1、S100、Melan-A、HMB45及SOX10的關(guān)系(n)