張繼東 曹立華 趙培利 楊延源

（河北省秦皇島市第三醫(yī)院 河北 秦皇島 066001）

肝炎是由乙肝病毒（HBV）傳播造成的一種疾病，其中乙型肝炎是對(duì)患者威脅最大的肝炎之一[1]。目前，國(guó)內(nèi)通常主要根據(jù)患者血清內(nèi)HBsAg含量和HBV-DNA載量對(duì)乙肝患者的病情精心診斷鑒別[2]。但是由于醫(yī)療設(shè)備等原因，利用熒光定量PCR法檢測(cè)患者血清HBV-DNA載量的做法難以在全國(guó)各個(gè)醫(yī)院進(jìn)行普及[3]。為了提高對(duì)乙型肝炎患者的診斷鑒別能力，本文探討的電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）定量檢測(cè)乙型肝炎表面抗原（HBsAg）與熒光定量PCR檢測(cè)乙肝病毒DNA（HBV-DNA）載量的關(guān)系，希望對(duì)診斷和治療乙型肝炎患者提供有意義的參考。

1.資料和方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月至2019年2月我院收治的170例慢性乙型肝炎患者為研究對(duì)象，其中男性患者116例，女性患者54例，患者年齡在13歲至65歲之間，平均年齡為（38.15±10.21）歲，抽取患者靜脈血液分離血清，檢測(cè)后留存血清標(biāo)本。

1.2 方法

采用ECLIA法對(duì)患者血清進(jìn)行HBsAg含量檢測(cè)和采用熒光定量PCR法對(duì)患者血清進(jìn)行HBV-DNA載量檢測(cè)。電化學(xué)發(fā)光法所使用的儀器羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)E602，檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑（來(lái)自羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司）的說(shuō)明書(shū)來(lái)進(jìn)行操作。熒光定量PCR法所用儀器為上海宏石SLAN96S熒光定量PCR儀，檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑（來(lái)自東北制藥股份有限公司）的說(shuō)明書(shū)來(lái)進(jìn)行操作以取得最終結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用Microsoft Excel軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，整理后用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行Pearson相關(guān)分析和處理。

2.結(jié)果

2.1 HBs Ag定性與HBV-DNA定性檢測(cè)結(jié)果比較

170例患者中，有151例患者血清檢測(cè)結(jié)果為HBsAg陽(yáng)性，所占比率為88.82%，有96例患者血清檢測(cè)結(jié)果為HBV-DNA陽(yáng)性，所占比率為56.47%，有96例患者的血清檢測(cè)結(jié)果同時(shí)為HBsAg和HBV-DNA陽(yáng)性，所占比率為56.47%，有55例（32.3 5%）患者的血清檢測(cè)結(jié)果為HBsAg陽(yáng)性和HBV-DNA陰性，有19例（11.1 8%）患者的血清檢測(cè)結(jié)果為HBsAg陰性和HBV-DNA陰性，有0例患者的血清檢測(cè)結(jié)果為HBsAg陰性和HBV-DNA陽(yáng)性。見(jiàn)下表1。

表1 HBs Ag定性與HBV-DNA定性檢測(cè)結(jié)果比較

2.2 HBV-DNA載量與HBsAg定量檢測(cè)結(jié)果平均值比較

根據(jù)HBV-DNA載量進(jìn)行分組，分為陰性組、低載量組、中載量組和高載量組。若患者血清HBV-DNA載量小于等于1000IU/ml，則為陰性組；若患者血清HBV-DNA載量在103至105IU/ml之間，則為低載量組；若患者血清HBV-DNA載量在10^5 至10^7IU/ml之間，則為中載量組；若患者血清HBV-DNA載量大于1.0*10^7IUml，則為高載量組。各組患者血清HBVDNA載量和HBsAg定量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)下表2。

表2 HBV-DNA載量與HBsAg定量檢測(cè)結(jié)果平均值比較

2.3 HBsAg定量與HBV-DNA相關(guān)性分析

通過(guò)Pearson相關(guān)性分析方法，對(duì)四組中患者血清HBsAg定量與HBVDNA載量進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示兩者之間的r值均小于3，P＞0.05，說(shuō)明兩者之間缺乏相關(guān)性，具體見(jiàn)表3。

表3 HBsAg定量與HBV-DNA相關(guān)性分析

3.討論

肝炎是由乙肝病毒（HBV）傳播造成的一種疾病，其中乙型肝炎是對(duì)患者威脅最大的肝炎之一，傳播途徑包括血液、性接觸以及母嬰等。乙型肝炎患者的臨床表現(xiàn)具有多樣性、不明顯性的特點(diǎn)，較難被患者發(fā)覺(jué)，很容易惡化轉(zhuǎn)變成肝硬化，小部分患者甚至?xí)夯稍l(fā)性肝癌，嚴(yán)重威脅著患者的生命健康。目前，我國(guó)乙型肝炎患者群體越來(lái)越多，越來(lái)越威脅著國(guó)民的生命健康[4-5]。

隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，在臨床應(yīng)用上熒光定量PCR法愈發(fā)的成熟，利用熒光定量PCR法檢測(cè)患者血清HBV-DNA載量成為主要的診斷鑒別乙肝的有效方法[6]?；颊吒腥綡BV主要在于乙肝病毒在宿主體內(nèi)不斷進(jìn)行復(fù)制，所以若可以對(duì)乙肝病毒的復(fù)制活動(dòng)進(jìn)行檢測(cè)，那對(duì)乙肝患者的診斷就會(huì)更加準(zhǔn)確，而恰好HBV-DNA載量水平便可以很好的反應(yīng)乙肝病毒的復(fù)制活動(dòng)。有相關(guān)文獻(xiàn)表明，目前評(píng)價(jià)乙肝病毒在宿主體內(nèi)的復(fù)制情況的“金標(biāo)準(zhǔn)”就是患者血清的HBV-DNA載量水平。測(cè)定HBV-DNA載量水平為診斷治療患者提供了可靠的依據(jù)，是非常重要的指標(biāo)。但是，熒光定量PCR法的操作非常復(fù)雜，需要非常專(zhuān)業(yè)的高能力的人員和非常好的實(shí)驗(yàn)室條件才可以進(jìn)行，這種苛刻的條件嚴(yán)重束縛了這種技術(shù)在全國(guó)的推廣，只有那些具有非常好人力資源和技術(shù)資源的醫(yī)院才有能力獨(dú)自進(jìn)行熒光定量PCR法的操作。此外，慢性乙型肝炎患者在經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的藥物治療后，一定比例的患者血清HBV-DNA會(huì)下降到較為低的水平，難以被檢測(cè)。因此，以其為依據(jù)，判定何時(shí)對(duì)患者停止抗病毒藥物的使用具有一定的局限性。

乙型肝炎病毒在感染患者正常的肝細(xì)胞過(guò)程中，由病毒S基因編碼的多肽的HBV外膜蛋白起到了重要的作用。正常健康者在受到HBV感染后的5到7天內(nèi)，血清中就會(huì)有HBsAg的出現(xiàn)，在非活動(dòng)攜帶狀態(tài)期、免疫耐受期、再活動(dòng)期和免疫清除期，HBV感染以及部分肝硬化和肝癌患者的血清中均可檢測(cè)到HB s A g；在HBV感染的急性期，對(duì)患者的血清進(jìn)行檢測(cè)，仍舊可以檢測(cè)到HB s A g，所以對(duì)患者血清進(jìn)行HBsAg進(jìn)行檢測(cè)一直是臨床上一種傳統(tǒng)的診斷HBV感染的方法。對(duì)于HBsAg的檢測(cè)方法，以往一般采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進(jìn)行檢測(cè)。有一部分文獻(xiàn)以該方法進(jìn)行HBsAg檢測(cè)，得出了患者血清內(nèi)HBsAg水平和HBV-DNA載量之間具有正的相關(guān)性的結(jié)論。但也有一部分文獻(xiàn)認(rèn)為患者血清內(nèi)HBsAg水平和HBV-DNA載量之間之間不具有相關(guān)性。

近幾年來(lái)，國(guó)際上對(duì)通過(guò)電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）檢測(cè)血清HBsAg含量而非ELISA法，分析HBsAg含量與HBV-DNA表現(xiàn)出了較強(qiáng)的興趣。本文也是在電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）的基礎(chǔ)上，探討電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）定量檢測(cè)乙型肝炎表面抗原（HBsAg）與熒光定量PCR檢測(cè)乙肝病毒DNA（HBV-DNA）載量的關(guān)系，希望對(duì)診斷和治療乙型肝炎患者提供有意義的參考。本次研究結(jié)果顯示，在170例患者當(dāng)中，有151例患者血清檢測(cè)結(jié)果為HBsAg陽(yáng)性，所占比率為88.82%，有96例患者血清檢測(cè)結(jié)果為HBV-DNA陽(yáng)性，所占比率為56.47%，有96例患者的血清檢測(cè)結(jié)果同時(shí)為HBsAg和HBV-DNA陽(yáng)性，所占比率為56.47%。利用統(tǒng)計(jì)學(xué)知識(shí)，分析發(fā)現(xiàn)，HBsAg含量和HBV-DNA載量之間不具有相關(guān)性，P＞0.05。本次研究認(rèn)為HBsAg含量和HBV-DNA載量之間不具有相關(guān)性，這與一些文獻(xiàn)的結(jié)論相一致，但是也與采用ELISA方法檢測(cè)HBsAg的文獻(xiàn)結(jié)論不同。不同原因可能在于所用方法不同，也可能是由于研究對(duì)象本身所具有的特性不同。

綜上所述，ECLIA法定量檢測(cè)HBsAg和熒光定量PCR法檢測(cè)HBV-DNA載量之間不具有相關(guān)性，在對(duì)患者進(jìn)行診斷時(shí)候，同時(shí)采用這兩種方法檢測(cè)HBsAg和HBV-DNA載量，可以為臨床提供更優(yōu)的診斷依據(jù)，提高治療效果。