姜鷹雁 ，楊海霞 ，鄭 靜，張治云 ，趙國(guó)敏 *

（1.山東省藥學(xué)科學(xué)院 山東省生物藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250101；2.山東福瑞達(dá)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司 山東省黏膜與皮膚給藥技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250101；3.山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東 濟(jì)南250101）

溴芬酸鈉是由Wyeth-Ayerst公司開發(fā)的非甾體抗炎藥，具有強(qiáng)力鎮(zhèn)痛作用，2005年在美國(guó)上市。日本千壽公司開發(fā)了溴芬酸鈉滴眼液，主要用于外眼部及眼前節(jié)的炎癥性疾病的對(duì)癥治療，如眼瞼炎、角膜潰瘍、結(jié)膜炎、鞏膜炎及術(shù)后炎癥及疼痛等[1-6]。

溴芬酸鈉合成工藝過(guò)程中使用三氯化硼為催化劑，ICH Q3D（元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則）規(guī)定硼為其他類金屬元素[7-8]，限度為50 ppm。硼測(cè)定方法主要有分光光度法、電化學(xué)方法、原子吸收法、電感耦合等離子體質(zhì)譜法及電感耦合等離子體發(fā)射光譜法等[9-14]，這些方法中分光光度法、原子光譜法是硼測(cè)定的經(jīng)典方法。分光光度法大多采用姜黃素或甲亞胺-H為顯色劑，操作繁瑣復(fù)雜，測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性差，靈敏度低，耗時(shí)較長(zhǎng)。電感耦合等離子體發(fā)射光譜法是一種準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好的方法，干擾硼測(cè)定的元素較少，該法簡(jiǎn)便、快速、檢出限低，線性范圍寬。本研究首次采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法測(cè)定溴芬酸鈉中硼含量，為藥物中其他類金屬元素硼的測(cè)定及質(zhì)量控制提供了參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

PerkinElmer Optima 7000 DV型電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀（美國(guó)珀金埃爾默公司）；氬氣（濟(jì)南德洋特種氣體公司，純度99.999 %）；XS-205型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司，十萬(wàn)分之一）。

1.2 試藥

溴芬酸鈉（自制，批號(hào)：20170301，20170501，20170502，20170503，純度≥99.0 %）；硼標(biāo)準(zhǔn)溶液（上海安譜，含量：1000 μg/ml）；氨水（優(yōu)級(jí)純，天津科密歐，批號(hào)20160920，含量≥99.5 %）；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 儀器條件

發(fā)射譜線：249.772 nm；功率：1300 W；蠕動(dòng)泵試樣流速：1.5 ml/min；輔助氣流量：0.2 L/min；等離子體流量：15.0 L/min；霧化器流量：0.8 L/min；試樣沖洗時(shí)間：30 S；等離子光源穩(wěn)定延遲：15 s。

2.2 溶液的制備

2.2.1 硼標(biāo)準(zhǔn)品貯備液的制備 精密量取硼標(biāo)準(zhǔn)溶液1 ml，置入10 ml量瓶，用0.2 %氨水溶液稀釋至刻度，搖勻，作為硼標(biāo)準(zhǔn)貯備液（100 μg/ml）。

2.2.2 系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備 精密量取硼標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.01，0.05，0.1，0.5，1.0，2.0 ml，分別置入100 ml量瓶，用0.2 %氨水溶液稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液（濃度分別為0.01，0.05，0.1，0.5，1.0，2.0 μg/ml）。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品約0.2 g，精密稱定，置入10 ml量瓶，用0.2 %氨水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.4 空白對(duì)照溶液 取0.2 %氨水溶液，作為空白對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 取空白對(duì)照溶液、標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液及供試品溶液，在249.772 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，結(jié)果表明，空白對(duì)照溶液無(wú)吸收，供試品溶液及對(duì)照品溶液均有較強(qiáng)響應(yīng)值。

2.3.2 線性關(guān)系考察 取2.2項(xiàng)硼系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，按2.1項(xiàng)條件進(jìn)行測(cè)定，以響應(yīng)值（Y）為縱坐標(biāo)，以硼標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（X，μg/ml）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸。線性方程為：Y=463 848X-5382.6，r=0.9998。試驗(yàn)結(jié)果表明，硼在0～2.00 μg/ml線性范圍內(nèi)，濃度與信號(hào)值之間線性關(guān)系良好。

2.3.3 檢測(cè)限與定量限的測(cè)定 取空白對(duì)照溶液，平行測(cè)定11次，計(jì)算11次空白讀數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD），根據(jù)儀器檢出限為3SD/K（K：標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率），計(jì)算得到硼元素最低檢出濃度為0.002μg/ml；儀器定量限為10SD/K，計(jì)算得到硼元素最低定量濃度為0.007 μg/ml。

2.3.4 精密度試驗(yàn) 取2.2項(xiàng)硼標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00 μg/ml），按2.1項(xiàng)條件連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算測(cè)定結(jié)果的RSD為1.33 %（n=6），結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取濃度為1.00 μg/ml的硼標(biāo)準(zhǔn)溶液及供試品溶液，室溫下放置，分別在0，1，2，4，6，8，24 h時(shí)，按2.1項(xiàng)條件測(cè)定，計(jì)算硼標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的RSD為1.73 %（n=7），供試液濃度的RSD為2.04 %（n=7），結(jié)果表明硼標(biāo)準(zhǔn)溶液及供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 分別配制6份溴芬酸鈉供試品溶液（批號(hào)：20170301），按2.1項(xiàng)條件進(jìn)行測(cè)定，硼含量的平均值為0.25 ppm，RSD為1.95 %（n=6），結(jié)果表明本法重復(fù)性較好。

2.3.7 回收率試驗(yàn) 取9份已知硼含量的樣品（批號(hào)：20170301，硼含量0.25 ppm），每份約0.5 g，精密稱定，置入25 ml量瓶，加0.2 %氨水溶液適量使溶解，分別向溶液中精密加入硼貯備液0.025，0.25，0.5 ml，各3份，用0.2 %氨水溶液稀釋至刻度，搖勻，制成3組不同濃度的溶液，按2.1項(xiàng)條件測(cè)定，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算硼含量，計(jì)算得硼的平均回收率為105.35 %，RSD為1.95 %（n=9），表明該方法回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率測(cè)定結(jié)果（n=9）

2.3.8 耐用性試驗(yàn) 取濃度為1.0 μg/ml的硼標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別調(diào)整等離子體流量、霧化器流量等條件，記錄濃度值，結(jié)果表明，等離子體流量、霧化器流量對(duì)硼含量結(jié)果影響均較小，說(shuō)明此方法耐用性良好。

2.3.9 樣品測(cè)定 取溴芬酸鈉（批號(hào)：20170501，20170502，20170503），按2.2.3項(xiàng)方法配制供試品溶液，并按2.1項(xiàng)條件測(cè)定，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算硼含量分別為0.48，0.35，0.28 ppm。數(shù)批樣品結(jié)果均低于1 ppm，ICH Q3D規(guī)定硼的限度為50 ppm，自制樣品中硼含量遠(yuǎn)低于限度。

3 討論

研究過(guò)程中參考中國(guó)藥典2015年版二部硫酸沙丁胺醇中硼含量測(cè)定方法[15]，取溴芬酸鈉適量，采用迅速熾灼的方法進(jìn)行有機(jī)破壞，以姜黃素為顯色劑，乙醇為溶劑，通過(guò)測(cè)定對(duì)照溶液及供試液吸光度的方法測(cè)定硼含量，該方法操作復(fù)雜，干擾因素較多，且檢出限較高。本品中硼含量較低，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定時(shí)重復(fù)性較差，檢出靈敏度不高，電感耦合等離子體發(fā)射光譜法無(wú)需加掩蔽劑及釋放劑，操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，基體效應(yīng)小，重復(fù)性好，標(biāo)準(zhǔn)加樣回收率試驗(yàn)驗(yàn)證了測(cè)定結(jié)果的可靠性，本法能很好地控制溴芬酸鈉中硼的含量。

實(shí)驗(yàn)室中大多數(shù)玻璃器皿中含有硼元素，因此實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)盡量避免使用玻璃器具。溴芬酸鈉遇酸有沉淀析出，如用稀酸溶解提取硼，樣品處理較麻煩且可能會(huì)干擾硼測(cè)定，因此本法采用稀氨水溶解樣品并提取其中的硼進(jìn)行測(cè)定。