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        術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色在肺癌浸潤程度診斷中的成效分析

        2019-11-05 07:58:54陳惠玉林潔陳小巖
        關(guān)鍵詞:冰凍石蠟彈力

        陳惠玉 林潔 陳小巖

        作者單位:福建省立醫(yī)院病理科,福建 福州 350001

        肺癌是常見的胸部惡性腫瘤,近年來其發(fā)病率逐年上升[1-2]。2009年,國際抗癌聯(lián)盟發(fā)布第7版腫瘤TNM分期標(biāo)準(zhǔn)(Tumor Node Metastasis),著重強(qiáng)調(diào)肺癌胸膜侵犯在TNM分期中的作用,不論腫瘤大小,將侵犯臟層胸膜的腫瘤歸為T2期[3-4]。彈力纖維(elastic fibers, EFs)是肺內(nèi)支氣管及肺泡結(jié)構(gòu)的主要骨架[5],當(dāng)肺部發(fā)生病變時(shí),EFs也會發(fā)生一定的改變[6]。病理上應(yīng)用胸膜的EFs染色,能直觀地觀察腫瘤細(xì)胞是否到達(dá)或突破胸膜層,對肺癌臨床分期及在肺癌治療策略的制定和預(yù)后判斷中起重要作用[7-8]。彈力纖維Gomori醛復(fù)紅染色法完整過程約需時(shí)45~60分鐘,較長時(shí)間的制片染色過程在與冰凍診斷及制片技術(shù)的緊急原則權(quán)衡下,各大醫(yī)院常規(guī)病理工作中,肺組織的彈力纖維染色多于術(shù)后制作并診斷[9]?;诖?,本文旨在探討優(yōu)化彈力纖維染色技術(shù)是否適宜在術(shù)中冰凍進(jìn)行,并為術(shù)中醫(yī)師的手術(shù)決策及時(shí)提供參考依據(jù)。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        組織標(biāo)本所來源患者的診斷標(biāo)準(zhǔn):(1)納入標(biāo)準(zhǔn):于2018年全年臨床入院診斷為肺癌可疑(ICD-10編碼C34.9001)、收治于我院胸外科、臨床醫(yī)師為其開具術(shù)中冰凍申請、病理肉眼取材時(shí)可見可疑肺結(jié)節(jié)≤2 cm;(2)排除標(biāo)準(zhǔn):冰凍肉眼取材時(shí)明確未取到肺被膜、冰凍切片HE染色后鏡下觀察明確診斷為浸潤性肺癌或?yàn)檠仔圆∽兊摹?018年全年收集標(biāo)本117例。男53例,女64例。年齡26~78歲,中位數(shù)為57歲。所有資料經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

        1.2 方法

        采用自身前后配對設(shè)計(jì)方法,對符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)的組織在術(shù)中冰凍時(shí)采用優(yōu)化彈力纖維染色法進(jìn)行制片和病理讀片診斷,術(shù)后相同組織待石蠟切片后進(jìn)行彈力纖維Gomori醛復(fù)紅染色制片及病理診斷。

        1.2.1 取材制片過程 首先,對新鮮肺組織將其進(jìn)行取材,大小1.5 cm×1.5 cm左右,厚度為3 mm,注意取材時(shí)要保證同時(shí)取到可疑肺結(jié)節(jié)于鄰近肺被膜,然后使用OCT包埋劑(Optimal Cutting Temperature Compound)對其進(jìn)行包埋,將其放置在LEICA CM 1950冰凍切片機(jī)中,待包埋劑稍凝固即可進(jìn)行冰凍切片,切忌凍過頭,對標(biāo)本進(jìn)行連續(xù)切片2張,厚度約在6 μm。將切片迅速放入裝有AAF液(95%乙醇:40%甲醛:冰醋酸=17:2:1)的立式染缸中,固定數(shù)秒。隨后將已經(jīng)固定的切片使用自來水速洗,取其中一張切片滴染蘇木素液1 min,接著使用濃度為1%的鹽酸乙醇迅速分化。進(jìn)行溫水藍(lán)化和伊紅染色,使用酒精脫水、二甲苯透明化,中性樹膠行封片;另外一張切片進(jìn)行改良后Gomori醛復(fù)紅染色。同一病例待病理醫(yī)師常規(guī)全面取材鏡檢后挑選適宜蠟塊進(jìn)行術(shù)后彈力纖維染色。

        1.2.2 染色過程 見表1。

        1.2.3 研究中應(yīng)用的試劑 彈力纖維染色試劑盒(產(chǎn)品編號:MST-8047/8048,批號1802068048,規(guī)格15 mL)。

        1.2.4 觀察指標(biāo) 所有組織切片遵循三級診斷制度,由住院病理醫(yī)師讀片并下初步診斷,主治病理醫(yī)師復(fù)片,如有疑問再由上級病理醫(yī)師(副高及以上)審核。本研究中陽性指相應(yīng)染色方法制片后診斷結(jié)果為浸潤性,陰性指診斷結(jié)果為微浸潤或原位。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        運(yùn)用SPSS 19.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用配對計(jì)數(shù)資料的χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。將數(shù)據(jù)結(jié)果用“陽性”或“陰性”二分變量呈現(xiàn),采用McNemar檢驗(yàn)分析配對資料結(jié)果是否有差異,用Kappa值來度量測量結(jié)果的一致性。所有結(jié)果以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 鏡下觀察病理特點(diǎn)

        切片中富含彈力纖維的組織如血管、肺被膜等呈深紫色波浪狀,背景呈不同程度的淡黃色,二者鏡下呈像無明顯分別,見圖1、圖2。

        2.2 診斷結(jié)果

        經(jīng)病理學(xué)觀察顯示,使用術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色,陽性患者23例,陰性94例,陽性率為19.66%。對相同組織進(jìn)行術(shù)后石蠟切片彈力纖維Gomori醛復(fù)紅染色,陽性患者28例,陰性患者89例,陽性率為23.93%。采用配對計(jì)數(shù)資料的χ2檢驗(yàn),McNemar檢驗(yàn)結(jié)果為P=0.063,兩法診斷結(jié)果無顯著差異。兩種方法的診斷吻合系數(shù)Kappa=0.875,P=0.000,說明兩種方法的吻合度有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義且較強(qiáng)。見表2。

        3 討論

        圖1 術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色顯微鏡下裁圖

        圖2 術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色顯微鏡下裁圖

        表1 術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色與術(shù)后石蠟切片彈力纖維Gomori 醛復(fù)紅染色方法比較

        表2 應(yīng)用兩種彈力纖維染色技術(shù)診斷肺癌浸潤程度的結(jié)果描述

        冰凍切片技術(shù)是一種較為常用的術(shù)中病理診斷方法,由于其檢測迅速,因而能為手術(shù)操作提供較為可靠的依據(jù),對于提高手術(shù)效果具有重要的作用[10]。冰凍切片作為一項(xiàng)條件因素要求嚴(yán)格的技術(shù),臨床和病理醫(yī)師考慮術(shù)中冰凍切片診斷與術(shù)后石蠟切片診斷存在一定漏診率,故對于肺癌患者的彈力纖維染色常規(guī)采用術(shù)后石蠟切片Gomori醛復(fù)紅染色。如若將肺組織彈力纖維染色診斷結(jié)果提前至術(shù)中,將對術(shù)中醫(yī)師的手術(shù)決策及患者預(yù)后產(chǎn)生較大臨床意義。本次研究中,采用術(shù)后石蠟切片彈力纖維染色作為對比,研究結(jié)果顯示同一塊組織術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色診斷結(jié)果與其無顯著差異,可見術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色診斷準(zhǔn)確性較高。并且,從診斷結(jié)果絕對值差異上看,二者的差異存在于術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色診斷結(jié)果為陰性,而術(shù)后石蠟切片彈力纖維染色診斷為陽性,可能與取材數(shù)量范圍等原因有關(guān)。但這種漏診情況并不影響加做術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色對臨床術(shù)中醫(yī)師手術(shù)范圍抉擇的指導(dǎo)價(jià)值。

        與對照組的術(shù)后石蠟切片彈力纖維Gomori醛復(fù)紅染色比較,試驗(yàn)組的術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色方法部分步驟時(shí)間縮減,同時(shí)鏡下觀察舒適,顏色清晰,界限分明,將組織彈力纖維染色成深紫色,從而判定彈力纖維的完整性、是否斷裂,進(jìn)而推斷肺癌有無浸潤[11]。二者鏡下呈像無明顯分別,術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色達(dá)到理想的制片效果。我院病理科常規(guī)要求一例術(shù)中冰凍報(bào)告時(shí)限為30 min,開展肺癌術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色能夠在規(guī)定時(shí)限內(nèi)報(bào)送診斷結(jié)果,在最為恰當(dāng)時(shí)刻為手術(shù)醫(yī)師提供診斷和手術(shù)參考依據(jù),具有一定臨床意義。

        在術(shù)中冰凍切片檢測中,除上述的制片質(zhì)量、工作時(shí)間外,診斷結(jié)果還受檢測組織、取樣質(zhì)量等因素影響[12]。因此,為保證術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性,必須強(qiáng)調(diào)術(shù)中肺癌組織取樣的規(guī)范性,同時(shí)還要求病理醫(yī)生取材、讀片的質(zhì)量。

        綜上所述,針對肺癌手術(shù)患者,保證病理切片和診斷質(zhì)量前提下,采用術(shù)中冰凍優(yōu)化彈力纖維染色,其準(zhǔn)確率高,為臨床醫(yī)生的手術(shù)方式提供有力依據(jù),增加手術(shù)醫(yī)生信心,避免患者二次手術(shù),提高患者預(yù)后。

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