王 磊，余志銀，徐冬冬，趙 晨，黃勝雄*，馬亞團(tuán)*

1 西北農(nóng)林科技大學(xué)化學(xué)與藥學(xué)院，楊凌 712100；2 中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所 植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650201；3 西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，楊凌 712100

大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素(macrolides antibiotics)是指在結(jié)構(gòu)上具有12 ～ 16元環(huán)內(nèi)酯骨架并且具有抑菌活性的化合物。自1952年紅霉素被應(yīng)用于臨床治療以來(lái)，一共發(fā)現(xiàn)了超過(guò)100種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素。其中，常用于臨床醫(yī)學(xué)的達(dá)20 ～ 30種，如紅霉素、阿奇霉素、泰利霉素和白絲霉素等[1]。研究表明，大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素通過(guò)與細(xì)菌核糖體50S亞單位的L27及L22蛋白質(zhì)結(jié)合，來(lái)抑制細(xì)菌的蛋白合成，從而實(shí)現(xiàn)抗菌活性[2]。大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)化合物不僅可作為抗生素應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)中，還具有抗哮喘、抗腫瘤、胃腸動(dòng)力作用、防治心血管疾病、抑制肺間質(zhì)纖維化、逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞耐受性等作用[2]。

Aldgamycins和chalcomycins都是十六元內(nèi)酯環(huán)化合物。二者在結(jié)構(gòu)上的區(qū)別是，Aldgamycins在5號(hào)碳連接一個(gè)D-aldgarose或者脫羧基的D-aldgarose，而chalcomycins在5號(hào)碳連接一個(gè)D-chalcose。從天然產(chǎn)物中僅發(fā)現(xiàn)20個(gè)aldgamycins和7個(gè)chalcomycins類(lèi)化合物[3,4]，大多數(shù)aldgamycins和chalcomycins都對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌有較強(qiáng)的抑制作用[5]。

本課題組從采自大理蒼山的土壤樣本中分離獲得一批放線(xiàn)菌株，發(fā)現(xiàn)編號(hào)為Streptomycessp.KIB-K1的鏈霉菌菌株具有抗菌活性，從該菌的發(fā)酵液中共分離得到7個(gè)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)化合物，其中5個(gè)為Aldgamycins類(lèi)化合物，分別是aldgamycin J(3)、aldgamycin K(4)、aldgamycin L(5)、GERI-155(6)、chalcomycin(7)，2個(gè)為Chalcomycins類(lèi)化合物，分別是aldgamycin E(2)和新化合物aldgamycin P(1)。抗菌實(shí)驗(yàn)顯示，化合物1～7對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌有顯著的抑制作用，其中化合物2和7對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC值分別為0.49、0.98 μg/mL，強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照卡那霉素的MIC值(3.91 μg/mL)，新化合物1對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC值為7.81 μg/mL。

1 材料與方法

1.1 儀器與器材

德國(guó)Bruker Avance III 400 MHz/600 MHz核磁共振波譜儀，日本Shimadzu UPLC-IT-TOF型色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，德國(guó)Bruker Tensor 27傅立葉變換中紅外光譜儀，日本Jasco P-1020全自動(dòng)旋光儀，日本Shimadzu UV 2401 PC紫外可見(jiàn)分光光度儀，日立Chromaster高效液相色譜儀，YMC-Triat C18型液相色譜柱(250 × 10 mm I.D.)，Thermo LYNX 6000離心機(jī)，德國(guó)Hei-VAP Value G3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞典Airtech Sephadex LH-20凝膠，青島海洋GF 254薄層色譜硅膠板和200 ～ 300目柱色譜硅膠，上海博訊YXQ-LS-18SI高壓蒸汽滅菌鍋，上海知楚ZQZY-HC恒溫?fù)u床。

1.2 發(fā)酵菌株

發(fā)酵菌株Streptomycessp.KIB-K1分離自大理蒼山云游路(東經(jīng)99°58′～ 100°27′，北緯25°25′ ～ 25°58′)附近土壤。通過(guò)對(duì)其16S rRNA進(jìn)行基因測(cè)序，發(fā)現(xiàn)其序列與Streptomycessp.9-6(2012)的序列相似度為99.86%，參考其形態(tài)特征及培養(yǎng)特性，確定其為鏈霉菌屬。菌株Streptomycessp.KIB-K1保藏于昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.3 培養(yǎng)基及發(fā)酵條件

MS固體培養(yǎng)基：大豆粉20.0 g/L，甘露醇20.0 g/L，技術(shù)瓊脂粉20.0 g/L，pH=7.0；TSB種子培養(yǎng)基：胰蛋白胨17.0 g/L，大豆蛋白胨3.0 g/L，氯化鈉5.0 g/L，磷酸氫二鉀2.5 g/L，葡萄糖2.5 g/L，pH=7.3 ± 0.2；DTY液體發(fā)酵培養(yǎng)基：糊精 40.0 g/L，番茄醬 7.5 g/L，酵母提取粉5 g/L，N-amine-A 2.5 g/L，pH=7.3 ± 0.2。

從保菌管中取出少量Streptomycessp.KIB-K1的孢子在MS固體培養(yǎng)基上活化。將活化后的菌株接種到裝有50 mL TSB培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，置于恒溫?fù)u床上培養(yǎng)36 h，培養(yǎng)條件設(shè)定為轉(zhuǎn)速200 rpm，溫度30 °C。取12.5 mL種子液(接種量為5%)接種到裝有250 mL DTY培養(yǎng)基的1 L三角瓶中發(fā)酵，共發(fā)酵15 L。發(fā)酵條件設(shè)定為轉(zhuǎn)速200 rpm，溫度30 °C。

1.4 提取和分離純化

收集15 L發(fā)酵液，將發(fā)酵液置于轉(zhuǎn)速為4 000 rpm的高速離心機(jī)中分離菌體和上清液。上清液用等量乙酸乙酯萃取5次，減壓濃縮有機(jī)相得粗提物浸膏A。菌體部分用75%甲醇浸泡并超聲萃取2 h，離心后保留甲醇相，減壓去除甲醇后，用乙酸乙酯萃取剩余水相部分，濃縮有機(jī)相后得浸膏B。A、B兩相經(jīng)HPLC-DAD分析后合并，稱(chēng)重共計(jì)3.5 g。

獲得的3.5 g浸膏運(yùn)用硅膠柱粗分。采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(1∶0、10∶1、5∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶3、0∶1)得8個(gè)組分(Fr.A ～ H)。各組分經(jīng)HPLC-DAD分析后，合并F、G和H段得組分Fr.M。Fr.M經(jīng)凝膠色譜分離得7個(gè)亞組(Fr.M 1 ～ 7。Fr.M 1經(jīng)HPLC半制備分離純化(方法：0 ～ 29.0 min，60%甲醇，29.1 ～ 39.0 min，66%甲醇，流速3 mL/min)得化合物2(tR=35.9 min，8.0 mg)、3(tR=17.5 min，56.2 mg)、4(tR=28.8 min，16.5 mg)、5(tR=39.8 min，1.3 mg)、6(tR=25.0 min，2.0 mg)、7(tR=25.8 min，2.8 mg)。Fr.M 2經(jīng)HPLC半制備分離純化(方法：0～25.0 min，38%乙腈，流速3 mL/min)得化合物1(tR=20.8 min，2.8 mg)。

1.5 活性測(cè)試

1.5.1 抑菌圈直徑大小測(cè)定(濾紙片法)[6,7]

本實(shí)驗(yàn)選用兩株農(nóng)作物致病真菌(小麥赤霉病菌Gibberellazeae和玉米小斑病菌HelminthosporiummaydisNisik & Miy)與兩株致病細(xì)菌(金黃色葡萄球菌StaphylococcusaureusATCC 6538和枯草芽孢桿菌BacillussubtilisATCC 6633)作為抑菌活性測(cè)試菌株。將化合物1～7、多菌靈(Carbendazim)和卡那霉素(Kanamycin)分別配制成濃度為2.0 mg/mL的DMSO溶液備用。測(cè)試化合物對(duì)細(xì)菌的抑制作用時(shí)，以DMSO為陰性對(duì)照，以卡那霉素為陽(yáng)性對(duì)照，選用LB培養(yǎng)基(配方：胰蛋白胨10.0 g/L，酵母提取物5.0 g/L，NaCl 10.0 g/L，瓊脂粉20.0 g/L，pH7.4)培養(yǎng)細(xì)菌。測(cè)試化合物對(duì)真菌的抑制作用時(shí)，以DMSO為陰性對(duì)照，以多菌靈為陽(yáng)性對(duì)照，選用PDA培養(yǎng)基(配方：土豆200.0 g/L，瓊脂粉20.0 g/L，葡萄糖20.0 g/L)培養(yǎng)真菌。

取無(wú)菌濾紙片(直徑為5 mm)，滴加6 μL樣品溶液，移入已接菌的培養(yǎng)基平板上。真菌平板放置在28 °C培養(yǎng)24 h后觀(guān)察抑菌圈大小，細(xì)菌平板放置在37 °C培養(yǎng)12 h后觀(guān)察抑菌圈大小。用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑，重復(fù)平行做3次，抑菌圈直徑測(cè)量3次求平均值。

1.5.2 MIC測(cè)定(常量肉湯稀釋法)[8,9]

將金黃色葡萄球菌菌株接種到LB液體培養(yǎng)基中，28 °C培養(yǎng)1 d左右。選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌液，通過(guò)測(cè)定菌液在600 nm波長(zhǎng)處的吸光值將菌液濃度調(diào)整到1×105CFU/mL左右。采用試管二倍稀釋法，以L(fǎng)B培養(yǎng)基為稀釋溶液，配制化合物1～7和卡那霉素的濃度分別為 1 000.00、500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.81、3.91、1.96、0.98 μg/mL。無(wú)菌對(duì)照和受試菌生長(zhǎng)對(duì)照均不加藥液。除無(wú)菌對(duì)照外，向各管中添加等體積濃度約為1×105CFU/mL菌懸液，則各管中化合物濃度分別減少為500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.81、3.91、1.95、0.98、0.49 μg/mL。將各管置于37 ℃條件下恒溫培養(yǎng)。18～24 h后，以肉眼觀(guān)察清澈透明的試管為無(wú)菌生長(zhǎng)，無(wú)菌生長(zhǎng)的最大稀釋度的藥物濃度為該化合物對(duì)該菌的MIC，重復(fù)平行3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色粉末(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z=781.360 8[M+Na]+(Calcd for C15H22O4，781.361 7)分子式為C37H58O16，不飽和度值為9。在紅外譜圖中1 711、1 233 cm-1處有吸收，提示有αβ-不飽和羰基和環(huán)氧體系的存在[10]。在1H NMR譜圖中，低場(chǎng)區(qū)域只存在δH6.77 (H-3)和δH5.99(H-2)兩個(gè)氫信號(hào)，且二者存在耦合相關(guān)信號(hào)(J=15.5 Hz)，推斷可能存在一個(gè)反式雙鍵。結(jié)合13C NMR和DEPT NMR譜圖，可將37個(gè)碳信號(hào)分別歸屬為：五個(gè)季碳信號(hào)(δC213.5、165.1、153.8、85.9、78.6)，十八個(gè)叔碳信號(hào)(δC120.5、151.9、102.3、100.3、86.9、80.9、80.5、79.8、72.8、69.3、69.0、68.6、66.1、58.6、56.2、47.4、40.4、33.2)，五個(gè)仲碳信號(hào)(δC66.4、39.9、32.2、31.3、26.3)，九個(gè)伯碳信號(hào)(δC61.1、57.9、20.8、20.5、17.9、17.8、17.6、14.1、12.8)。在二維譜圖中，根據(jù)1H-1H COSY譜圖中相關(guān)信號(hào)，可以發(fā)現(xiàn)存在H-2/H-3/H-4(H-17)/H-5/H-6(H-18)/H-7/H-8、H-10/H-11/H-12/H-13/H-14(H-20)/H-15/H-16和H-1′′/H-2′′/H-3′′/H-4′′/H-5′′/H-6′′耦合體系。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)存在H-1′/H-2′、H-4′/H-5′/H-6′、H-7′/H-8′耦合信號(hào)片段。在HMBC中，H-1′、H-4′、H-8′與C-3′存在相關(guān)信號(hào)，H-1′與C-5、H-5與C-1′存在相關(guān)信號(hào)，據(jù)此推斷aldgarose片段存在并且連接在C-5。同時(shí)，H-8′′與C-3′′、H-7′′與C-2′′、H-1′′與C-5′′分別存在HMBC相關(guān)信號(hào)，以及H-1′′與C-20、H-20與C-1′′的HMBC相關(guān)信號(hào)證實(shí)allopyranose片段存在并且連接在C-20。H-6與C-8、H-19與C-8、H-19與C-9、H-11與C-9的相關(guān)HMBC信號(hào)證實(shí)C-7/C-8(C-19)/C-9/C-10連接在一起。H-3與C-1、H-2與C-1、H-15與C-1的相關(guān)HMBC信號(hào)證實(shí)雙鍵碳C-2、C-3與C-1連接在一起，且C-1與C-16通過(guò)氧原子連接在一起。據(jù)此可以確定十六元內(nèi)酯環(huán)的存在，據(jù)C-12和C-13化學(xué)位移的大小(δC58.6和56.2)推測(cè)在C-12和C-13處存在三元氧環(huán)結(jié)構(gòu)。通過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研該結(jié)構(gòu)與aldgamycin E(化合物2)結(jié)構(gòu)高度類(lèi)似，僅在8號(hào)位被羥基化。在所有的Aldgamycins類(lèi)化合物中，8號(hào)位僅有兩種取代形式，即僅被甲基取代，或同時(shí)被甲基和羥基取代。上述兩種取代方式中，甲基總是朝向面內(nèi)的，據(jù)此可推斷aldgamycin P的8號(hào)位中，甲基朝內(nèi)，羥基朝外。綜上，化合物1的結(jié)構(gòu)鑒定為圖1所示，命名為aldgamycin P，其關(guān)鍵的COSY和HMBC數(shù)據(jù)見(jiàn)圖1。

化合物1的詳細(xì)結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)原始圖譜可從本刊官網(wǎng)免費(fèi)下載(www.trcw.ac.cn)

圖1 化合物1～7的化學(xué)結(jié)構(gòu)以及化合物1關(guān)鍵COSY、HMBC示意圖Fig.1 The chemical structures of compounds 1-7 and key COSY,HMBC correlations of compound 1

化合物2白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z765[M+Na]+，m/z391[(M+K+H)/ 2]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：6.73(dd，J=15.5，10.5 Hz，1H，H-3)，5.87(d，J=15.4 Hz，1H，H-2)，5.32(dq，J=9.7，6.2 Hz，1H，H-15)，4.65(d，J=7.7 Hz，1H，H-1′)，4.56(d，J=7.7 Hz，1H，H-1′′)，4.39(q，J=6.5 Hz，1H，H-7′)，4.13(dd，J=10.0，3.8 Hz，1H，H-20a)，3.89(m，1H，H-5′)，3.76(t，J=3.1 Hz，1H，H-3′′)，3.64(m，1H，H-20b)，3.62(s，3H，8′′-CH3)，3.55(s，3H，7′′-CH3)，3.52(m，1H，H-5′′)，3.48(m，1H，H-2′)，3.43(d，J=9.5 Hz，1H，H-5)，3.20(m，1H，H-2′′)，3.08(dd，J=7.7，2.9 Hz，1H，H-4′′)，2.83(dt，J=8.3，2.5 Hz，1H，H-12)，2.73(m，2H，H-4，H-10a)，2.54(m，2H，H-8，H-13)，2.10(m，1H，H-11a)，2.03(m，1H，H-10b)，1.86(dd，J=14.3，2.2 Hz，1H，H-4′)，1.78 ～ 1.62(overlap，3H，H-7a，H-4′)，1.59(d，J=6.4 Hz，3H，8′-CH3)，1.53(m，1H，H-6)，1.49 ～ 1.38(overlap，3H，H-7b，H-14，H-11b)，1.35(d，J=6.3 Hz，3H，16-CH3)，1.24(m，6H，17-CH3，19-CH3)，1.19(d，J=6.6 Hz，3H，6′-CH3)，1.11(d，J=6.9 Hz，3H，6′′-CH3)，0.96(d，J=6.6 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：213.4(C-9)，165.7(C-1)，154.0(C-9′)，150.7(C-3)，121.5(C-2)，101.3(C-1′)，101.0(C-1′′)，86.0(C-3′)，84.8(C-5)，82.0(C-2′′)，81.4(C-7′)，79.7(C-3′′)，72.8(C-4′′)，71.8(C-5′′)，70.9(C-2′)，70.0(C-15)，67.4(C-20)，67.3(C-5′)，61.8(C-8′′)，59.8(C-7′′)，59.7(C-12)，58.0(C-13)，48.6(C-14)，45.6(C-8)，41.2(C-4)，41.2(C-4′)，34.8(C-6)，33.5(C-10)，32.5(C-7)，26.7(C-11)，20.7(C-6′)，18.7(C-16)，18.6(C-6′′)，18.2(C-19)，17.9(C-18)，17.1(C-17)，13.8(C-8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故鑒定為aldgamycin E。

化合物3白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z755[M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.78(dd，J=15.5，10.2 Hz，1H，H-3)，5.95(d，J=15.5 Hz，1H，H-2)，5.14(m，1H，H-15)，4.44(d，J=8.4 Hz，1H，H-1′′)，4.42(d，J=9.3 Hz，1H，H-1′)，3.89(m，1H，H-20a)，3.69(m，1H，H-5′)，3.65(m，1H，H-3′′)，3.54 ～ 3.51(overlap，3H，H-7′，H-20b，H-5′′)，3.41(m，1H，H-2′)，3.45(s，3H，8′′-CH3)，3.39(s，3H，7′′-CH3)，3.33(m，1H，H-5)，3.06(dd，J=9.5，2.6 Hz，1H，H-4′′)，2.99(dd，J=8.1，2.8 Hz，1H，H-2′′)，2.83(dt，J=7.5，2.6 Hz，1H，H-14)，2.74～2.62(overlap，3H，H-4，H-10a，H-13)，2.15(ddd，J=16.2，9.6，5.9 Hz，1H，H-10b)，1.97(m，1H，H-11a)，1.80(d，J=13.8 Hz，1H，H-4′)，1.59(d，J=12.8 Hz，2H，H-6a，H-6b)，1.40 ～ 1.29(overlap，5H，H-7a，H-7b，H-11b，H-14，H-4′)，1.24(d，J=6.3 Hz，3H，16-CH3)，1.22(s，3H，19-CH3)，1.14(d，J=6.4 Hz，3H，17-CH3)，1.11 ～ 1.06(overlap，6H，6′-CH3，6′′-CH3)，0.97(d，J=6.3 Hz，3H，8′-CH3)，0.91(d，J=6.8 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：213.6(C-9)，165.2(C-1)，152.3(C-3)，120.3(C-2)，102.8(C-1′)，100.3(C-1′′)，86.5(C-5)，80.6(C-2′′)，79.8(C-3′′)，78.7(C-8)，74.6(C-7′)，72.8(C-3′)，69.3(C-2′)，69.3(C-4′′)，68.6(C-5′′)，66.7(C-15)，66.5(C-20)，65.6(C-5′)，61.1(C-8′′)，58.7(C-7′′)，58.1(C-12)，58.0(C-13)，48.6(C-14)，47.5(C-4)，40.4(C-4′)，35.5(C-7)，33.1(C-6)，31.2(C-10)，26.1(C-11)，25.7(C-19)，21.3(C-6′)，21.2(C-17)，17.9(C-18)，17.8(C-16)，17.6(C-8′)，16.5(C-6′′)。化合物3的碳?xì)浠瘜W(xué)位移與化合物1相比，差異主要體現(xiàn)在C-5所連糖的結(jié)構(gòu)不一致。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，故鑒定為aldgamycin J。

化合物4白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z739[M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.74(dd，J=15.4，10.6 Hz，1H，H-3)，6.02(d，J=15.4 Hz，1H，H-2)，5.16(m，1H，H-15)，4.44(overlap，2H，H-1′，H-1′′)，3.90(dd，J=10.1，3.8 Hz，1H，H-20a)，3.69(m，1H，H-5′)，3.65(t，J=2.8 Hz，1H，H-3′′)，3.54 ～ 3.50(overlap，3H，H-7′，H-20b，H-5′′)，3.45(s，3H，8′′-CH3)，3.41(m，1H，H-2′)，3.39(s，3H，7′′-CH3)，3.36(m，1H，H-5)，3.07(dd，J=9.5，2.7 Hz，1H，H-4′′)，2.99(dd，J=8.0，2.8 Hz，1H，H-2′′)，2.80(dd，J=6.6，4.3 Hz，1H，H-12)，2.73 ～ 2.67(overlap，2H，H-4，H-13)，2.59(dd，J=9.2，2.0 Hz，1H，H-10a)，2.46 ～ 2.36(m，2H，H-10b，H-11a)，1.88(overlap，3H，H-4′a，H-6，H-7a)，1.77 ～ 1.64(m，1H，H-7b)，1.43 ～ 1.27(overlap，3H，H-11b，H-14，H-4′b)，1.24(d，J=6.2 Hz，3H，16-CH3)，1.16(d，J=6.5 Hz，3H，17-CH3)，1.11 ～ 1.06(overlap，9H，6′-CH3，6′′-CH3，19-CH3)，0.98(d，J=6.4 Hz，3H，8′-CH3)，0.88(d，J=6.3 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：213.1(C-9)，165.2(C-1)，152.3(C-3)，120.3(C-2)，102.9(C-1′)，100.4(C-1′′)，84.5(C-5)，80.6(C-2′′)，79.8(C-3′′)，74.6(C-7′)，72.8(C-3′)，69.4(C-4′′)，69.3(C-2′)，68.7(C-5′′)，66.6(C-15)，66.5(C-20)，65.6(C-5′)，61.0(C-8′′)，59.0(C-7′′)，58.0(C-12)，57.3(C-13)，48.6(C-14)，47.5(C-8)，40.8(C-4)，40.1(C-4′)，35.4(C-7)，34.4(C-6)，32.2(C-10)，26.3(C-11)，21.4(C-6′)，21.1(C-17)，18.0(C-8′)，17.9(C-18)，17.8(C-16)，17.1(C-19)，16.5(C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故鑒定為aldgamycin K。

化合物5白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z723[M+Na]+，m/z370[(M+K+H)/ 2]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：6.71(dd，J=15.6，9.9 Hz，1H，H-3)，5.80(d，J=15.5 Hz，1H，H-2)，5.52(ddd，J=13.6，8.4，4.6 Hz，1H，H-12)，5.30(dd，J=15.3，9.3 Hz，1H，H-13)，5.07(m，1H，H-15)，4.66(d，J=7.6 Hz，1H，H-1′)，4.56(d，J=7.7 Hz，1H，H-1′′)，3.95(m，2H，H-20a，H-5′)，3.74(t，J=3.1 Hz，1H，H-3′′)，3.70 ～ 3.62(m，2H，H-2′，H-7′)，3.61(s，3H，8′′-CH3)，3.53(s，3H，7′′-CH3)，3.50 ～ 3.37(overlap，4H，H-5，H-20b，H-6′，H-5′′)，3.20(d，J=10.1 Hz，1H，H-4′′)，3.05(dd，J=7.7，2.9 Hz，1H，H-2′′)，2.71(m，1H，H-4)，2.52(m，1H，H-10a)，2.34(m，1H，H-14)，2.27 ～ 2.07(overlap，3H，H-10b，H-11a，H-11b)，1.67(m，1H，H-7a)，1.53(m，2H，H-6，H-4′a)，1.40(m，1H，H-4′b)，1.34(m，1H，H-7b)，1.28(m，6H，16-CH3，8′-CH3)，1.25(d，J=6.1 Hz，3H，6′′-CH3)，1.19(m，6H，17-CH3，6′-CH3)，1.10(d，J=6.9 Hz，3H，19-CH3)，0.99(d，J=6.7 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：213.8(C-9)，165.7(C-1)，150.5(C-3)，132.8(C-12)，128.7(C-13)，121.7(C-2)，101.8(C-1′)，101.1(C-1′′)，86.1(C-5)，81.9(C-2′′)，79.9(C-3′′)，74.0(C-3′)，73.9(C-7′)，72.8(C-4′′)，72.7(C-2′)，70.7(C-5′′)，70.0(C-20)，69.9(C-15)，67.1(C-5′)，61.8(C-8′′)，59.9(C-7′′)，50.3(C-14)，44.9(C-8)，40.9(C-4)，39.5(C-4′)，38.8(C-10)，34.7(C-6)，33.0(C-7)，26.2(C-11)，20.9(C-6′)，18.9(C-19)，18.7(C-17)，18.6(C-6′′)，18.3(C-16)，17.9(C-8′)，17.2(C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故鑒定為aldgamycin L。

化合物6白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z725[M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.77(dd，J=15.5，10.2 Hz，1H，H-3)，5.97(d，J=15.5 Hz，1H，H-2)，5.14(dd，J=8.9，5.9 Hz，1H，H-15)，4.45(d，J=8.0 Hz，1H，H-1′′)，4.16(d，J=7.6 Hz，1H，H-1′)，3.90(dd，J=10.0，4.2 Hz，1H，H-20a)，3.66(t，J=2.8 Hz，1H，H-3′′)，3.53(m，2H，H-20b，H-5′′)，3.46(s，3H，8′′-CH3)，3.39(s，3H，7′′-CH3)，3.35(overlap，3H，H-5，H-2′，H-3′)，3.31(s，3H，7′-CH3)，3.14(ddd，J=11.2，9.1，5.2 Hz，1H，H-4′′)，3.07(dd，J=9.4，2.6 Hz，1H，H-2′′)，3.00(m，1H，H-5′)，2.84(dt，J=7.6，2.6Hz，1H，H-13)，2.69(overlap，3H，H-4，H-10a，H-12)，2.14(ddd，J=16.2，9.8，5.8 Hz，1H，H-10b)，2.01(overlap，3H，H-7a，H-11a，H-4′a)，1.78(dd，J=20.8，9.1 Hz，1H，H-7b)，1.59(m，1H，H-11b)，1.44 ～ 1.28(overlap，3H，H-6，H-14，H-4′b)，1.24(m，6H，16-CH3，19-CH3)，1.13(overlap，9H，17-CH3，6′-CH3，6′′-CH3)，0.90(d，J=6.7 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：213.5(C-9)，165.2(C-1)，152.1(C-3)，120.4(C-2)，104.0(C-1′)，100.3(C-1′′)，86.8(C-5)，80.5(C-2′′)，80.4(C-2′)，79.8(C-8)，79.2(C-3′)，78.7(C-3′′)，74.0(C-5′)，72.8(C-4′′)，69.3(C-5′′)，68.6(C-15)，66.6(C-20)，66.5(C-8′′)，61.1(C-7′′)，58.7(C-12)，58.0(C-13)，56.5(C-7′)，47.6(C-14)，47.4(C-4)，38.0(C-4′)，37.3(C-7)，33.2(C-6)，31.2(C-10)，26.1(C-19)，26.0(C-11)，20.9(C-17)，17.9(C-18)，17.8(C-16)，17.7(C-6′)，17.5(C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，故鑒定為GERI-155。

化合物7白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z723[M+Na]+；1HNMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.08(d，J=15.4 Hz，1H，H-10)，6.56(dd，J=15.5，10.3 Hz，1H，H-3)，6.32(dd，J=15.4，9.3 Hz，1H，H-11)，6.13(d，J=15.3 Hz，1H，H-2)，5.18(m，1H，H-15)，4.50(d，J=8.0 Hz，1H，H-1′′)，4.38(s，1H，H-20a)，4.13(d，J=7.6 Hz，1H，H-1′)，3.96(dd，J=10.4，2.9 Hz，1H，H-20b)，3.67(t，J=2.9 Hz，1H，H-3′′)，3.61 ～ 3.51(m，2H，H-5′，H-5′′)，3.46(s，3H，8′′-CH3)，3.41(s，3H，7′′-CH3)，3.30(s，3H，7′-CH3)，3.21 ～ 2.93(overlap，6H，H-5，H-13，H-2′，H-3′，H-2′′，H-4′′)，2.74(td，J=10.2，5.8 Hz，1H，H-4)，2.02(m，2H，H-7a，H-4′a)，1.80(d，J=5.6 Hz，1H，H-7b)，1.58(m，1H，H-14)，1.37(t，J=10.0 Hz，1H，H-4′b)，1.30(m，3H，16-CH3)，1.26(d，J=6.3 Hz，3H，19-CH3)，1.14(overlap，10H，H-6，17-CH3，6′-CH3，6′′-CH3)，0.92(d，J=6.7 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：200.0(C-9)，165.0(C-1)，151.9(C-3)，143.7(C-11)，127.4(C-10)，120.8(C-2)，103.7(C-1′)，100.5(C-1′′)，87.3(C-5)，80.6(C-2′′)，80.4(C-3′)，80.0(C-3′′)，78.1(C-8)，74.1(C-2′)，72.8(C-5′′)，69.3(C-15)，67.9(C-5′)，66.5(C-20)，61.1(C-8′′)，58.5(C-13)，58.1(C-7′′)，58.1(C-12)，56.5(C-7′)，48.5(C-14)，40.9(C-4)，37.3(C-7)，36.5(C-4′)，33.7(C-6)，27.7(C-19)，22.7(C-6′)，20.8(C-18)，18.7(C-16)，18.0(C-17)，17.8(C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道一致，故鑒定為chalcomycin。

2.2 活性測(cè)試結(jié)果

濾紙片抑菌活性實(shí)驗(yàn)顯示，化合物1～7對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌有顯著的抑制作用(見(jiàn)表1)，其中化合物2、6、7對(duì)兩株細(xì)菌的抑制作用強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照卡那霉素。而化合物1、3、4、5對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用與卡那霉素的抑制效果相當(dāng)，抑菌圈大小均為14～15 mm?；衔?～7對(duì)于被測(cè)試的兩株真菌小麥赤霉病菌和玉米小斑病菌沒(méi)有表現(xiàn)出抑制作用。

在測(cè)定化合物對(duì)細(xì)菌的MIC實(shí)驗(yàn)中，由于化合物量太少，因此只測(cè)定了化合物1～4和7對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC值。

MIC實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果如表2所示，化合物1～4和7對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制效果基本與卡那霉素相近。其中，化合物2和7對(duì)于金黃色葡萄球菌的MIC值分別為0.49和0.98 μg/mL，強(qiáng)于卡那霉素對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC值(3.91 μg/mL)?；衔?對(duì)于金黃色葡萄球菌的MIC值為7.81 μg/mL，表現(xiàn)出中等強(qiáng)度的抑菌活性。

注：NT意味著沒(méi)有進(jìn)行該試驗(yàn)。

Note:NT means this test was not carried out.

表2 化合物1～7對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC 值

注：NT意味著該沒(méi)有進(jìn)行該試驗(yàn)。

Note:NT means this test was not carried out.

3 討論

我們從土壤鏈霉菌Streptomycessp.KIB-K1發(fā)酵液中共分離得到7個(gè)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)化合物，其中化合物1為首次報(bào)道的大環(huán)內(nèi)酯，命名為aldgamycin P(1)?；衔?～7對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌都有顯著的抑制作用，而對(duì)被測(cè)試的兩株真菌都沒(méi)有表現(xiàn)出抑制活性。新化合物1對(duì)于金色葡萄球菌的MIC值分別為7.81 μg/mL，接近陽(yáng)性對(duì)照卡那霉素的MIC值(3.91 μg/mL)。Jiang[10]、Wang[11]、Kim[13]的研究表明，Aldgamycins類(lèi)化合物對(duì)大部分的革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性菌有很好的抑制作用，而對(duì)真菌一般不表現(xiàn)出活性，這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。同時(shí)，Wang[11]在研究Aldgamycins類(lèi)化合物的構(gòu)效關(guān)系時(shí)，提出環(huán)氧體系對(duì)于抑菌活性有促進(jìn)作用，同時(shí)糖片段的不同對(duì)于抑菌活性強(qiáng)弱并沒(méi)有直接關(guān)系的假設(shè)。我們分到的7個(gè)化合物中，只有化合物5不具備環(huán)氧體系，且其抑菌活性相對(duì)其他化合物較弱；化合物1和3、2和4之間也沒(méi)有明顯活性強(qiáng)弱的差距，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一定程度上為該假設(shè)提供了數(shù)據(jù)支持。

活性化合物aldgamycin P的發(fā)現(xiàn)，為aldgamycins家族類(lèi)化合物增添了新的成員，豐富了活性十六元大環(huán)內(nèi)酯化合物的種類(lèi)，為此類(lèi)化合物后續(xù)深入的開(kāi)發(fā)和利用提供了菌株資源，是潛在的抗生素藥物資源。