林毅雄，林河通,*，陳藝暉，王 慧，林藝芬,*

（1.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350002；2.福建農(nóng)林大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)后技術(shù)研究所，福建 福州 350002；3.亞熱帶特色農(nóng)產(chǎn)品采后生物學(xué)（福建農(nóng)林大學(xué)）福建省高等學(xué)校重點實驗室，福建 福州 350002）

龍眼（Dimocarpus longan Lour.）俗稱‘桂圓’，是一種著名的亞熱帶水果，主要種植在中國的南方地區(qū)如福建、廣東、廣西等，其具有較高食用品質(zhì)和藥用價值，深受人們的喜愛[1-7]。龍眼果實成熟于夏季高溫、高濕季節(jié)，采后易發(fā)生品質(zhì)劣變，在室溫（25 ℃）下極不耐貯藏，一周左右全部腐爛，表現(xiàn)為果皮先發(fā)生褐變，后果肉自溶，最后整個果實腐爛變質(zhì)[7-10]。這嚴重影響采后龍眼果實食用品質(zhì)和商業(yè)價值，造成龍眼產(chǎn)業(yè)巨大經(jīng)濟損失，限制了其產(chǎn)業(yè)發(fā)展[11-14]。因此，龍眼果實采后保鮮成為產(chǎn)業(yè)發(fā)展和生產(chǎn)上亟待解決的難題。

前期研究認為，能量虧缺、病原菌侵染、外源活性氧（雙氧水）處理會降低采后龍眼果實果皮超氧化物歧化酶（superoxidase dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）和抗壞血酸過氧化物酶（ascorbate peroxidase，APX）等活性氧清除酶活力，保持較高的還原型抗壞血酸（ascorbic acid，AsA）和還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）等內(nèi)源抗氧化物質(zhì)的含量，同時降低1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除能力和總還原能力，進而降低活性氧清除能力，導(dǎo)致活性氧和膜脂過氧化產(chǎn)物丙二醛（malondialdehyde，MDA）在細胞內(nèi)的積累，最后使采后龍眼果實因活性氧代謝失調(diào)而降低其耐貯性[5,15-18]。何燕文等[19]研究發(fā)現(xiàn)，在采前1 周和采前1 d分別噴施6 g/L殼聚糖和質(zhì)量分數(shù)20%高良姜提取液可提高采后龍眼果實果皮和果肉的SOD活力，降低果皮和果肉的MDA含量及果實的質(zhì)量損失率和腐爛率，提高采后龍眼果實的耐貯性。據(jù)此認為，采后龍眼果實的耐貯性與活性氧清除系統(tǒng)的清除能力密切相關(guān)，同時其活性氧清除能力可以通過采前或采后處理措施進行調(diào)節(jié)。但是，目前對龍眼果實保鮮主要集中在采后處理，而采前處理較少。因此，很有必要開發(fā)采前管理措施控制采后龍眼果實活性氧代謝和提高其耐貯性的新型采前栽培技術(shù)。

胺鮮酯，化學(xué)名稱為己酸二乙氨基乙醇酯（diethyl aminoethyl hexanoate，DA-6），是一種新型植物生長調(diào)節(jié)劑，其具有安全、無毒及使用簡易等優(yōu)點，同時可促進作物生長、提高產(chǎn)量及改善作物食用品質(zhì)[20-21]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，采前噴施DA-6可有效降低采后貯藏期間龍眼果實呼吸強度，保持較高的果皮色素（葉綠素、類胡蘿卜素、花色素苷、類黃酮）含量，及較高的果肉營養(yǎng)物質(zhì)（可溶性固形物、可溶性總糖、蔗糖、VC）含量，提高龍眼果實耐貯性和保鮮效果，如延緩龍眼果皮褐變和果肉自溶的發(fā)生、降低果實質(zhì)量損失率、保持較高的好果率[21]。但是，目前有關(guān)采前噴施DA-6對采后龍眼果實活性氧代謝的影響及其與耐貯性的關(guān)系鮮見報道。因此，本實驗研究采前噴施DA-6對采后龍眼果實果皮活性氧代謝的影響，旨在為龍眼果實保鮮提供適用技術(shù)和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

本實驗基地選擇在福建省安溪縣龍眼科技示范果園，其果樹樹齡為8 年，選擇生長較為一致并且樹勢中等的‘福眼’龍眼（Dimocarpus longan Lour. cv. Fuyan）果樹進行采前噴施DA-6。

氮藍四唑、甲硫氨酸、核黃素、對氨基苯磺酸、二硫代硝基苯甲酸、硫代巴比妥酸、鄰菲羅啉和α-萘胺北京索萊寶科技有限公司；過氧化氫、抗壞血酸、三氯乙酸、鹽酸羥胺、三氯化鐵、乙醇、磷酸、乙二胺四乙酸、磷酸二氫鈉、石英沙和碳酸鈣 國藥集團化學(xué)試劑有限公司；硫酸 北京化工廠。

1.2 儀器與設(shè)備

HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司；GL-20G-II高速冷凍離心機 上海安亭科學(xué)儀器有限公司；T6新世紀(jì)紫外-可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；BSA224S電子天平 賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 原料處理

本課題組前期預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)，龍眼果實采前噴施不同含量的DA-6（0～15 mg/kg），其最佳含量為10 mg/kg。因此，本實驗在龍眼盛花期后70、90、110 d各噴施10 mg/kg DA-6 1 次，同時以噴施蒸餾水作為對照組，每一處理噴施6 株龍眼果樹。

龍眼果實于盛花期后120 d采收，采收當(dāng)天先在冷庫預(yù)冷，之后用冷藏車3 h內(nèi)運到福建農(nóng)林大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)后技術(shù)研究所（福州），經(jīng)過精細挑選（選擇大小均勻、色澤一致、無病蟲、無損傷的健康果實）的龍眼果實用蒸餾水清洗并取出自然晾干，接著用聚乙烯薄膜袋包裝（0.015 mm厚，50 個果實/袋），對照組和DA-6處理組各50 袋，然后在（28±1）℃、相對濕度80%下貯藏。貯藏期間每天取樣，測定果皮O2-·產(chǎn)生速率、MDA含量、活性氧清除酶活力、內(nèi)源抗氧化物質(zhì)含量、DPPH自由基清除率和總還原力。

1.3.2 測定方法

1.3.2.1 果皮O2-·產(chǎn)生速率和MDA含量測定

O2-·產(chǎn)生速率測定：從10 個龍眼果實中取果皮1 g，參照林河通等[22]的方法測定，單位為nmol/（min·g）。

MDA含量測定：從10 個龍眼果實中取果皮1 g，參照Sun Junzheng等[18]的方法測定，單位為mmol/g。

1.3.2.2 果皮活性氧清除酶活力和酶蛋白質(zhì)含量測定

酶液提?。簭?0 個龍眼果實中取果皮1 g，加入液氮研磨后轉(zhuǎn)移到研缽中，加入適量磷酸鹽緩沖液（50 mmol/L、pH 7.0）并在冰浴中研磨，使樣品與提取液充分混勻，轉(zhuǎn)入10 mL離心管并定容，在4 ℃、15 000×g下離心20 min，轉(zhuǎn)移上清液并用磷酸鹽緩沖液定容至20 mL，取上清液作為活性氧清除酶提取液。

SOD、CAT和APX活力測定：參照Sun Junzheng等[18]的方法測定；谷胱甘肽還原酶（glutathione reductase，GR）活力測定：參照朱廣廉等[23]的方法測定。

酶蛋白質(zhì)含量測定：按照考馬斯亮藍G250染色法[24]測定蛋白質(zhì)含量，以牛血清白蛋白作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

以上酶活力單位均為U/mg，結(jié)果以蛋白質(zhì)量計。

1.3.2.3 果皮AsA和GSH含量測定

從10 個龍眼果實中取果皮組織1 g，參照Sun Junzheng等[18]的方法測定，單位為g/kg。

1.3.2.4 果皮DPPH自由基清除率和總還原能力測定

從10 個龍眼果實中取果皮組織1 g，參考Lin Yifen等[17]的方法測定DPPH自由基清除率和總還原能力，其單位分別為%和g/kg。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

以上各指標(biāo)測定均重復(fù)3 次，取其平均值；采用SPSS 17.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析和T檢驗法進行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 采前噴施DA-6對采后龍眼果實果皮O2-·產(chǎn)生速率和MDA含量的影響

圖1 采前噴施DA-6對采后龍眼果皮·產(chǎn)生速率（A）和MDA含量（B）的影響Fig. 1 Effect of pre-harvest spraying of DA-6 on O2-· production rate (A)and MDA content (B) in pericarp of harvested longan fruit

由圖1A可知，對照龍眼果實的果皮O2-·產(chǎn)生速率隨采后貯藏時間的延長而緩慢增加；進一步比較發(fā)現(xiàn)，采前噴施DA-6可有效降低采后龍眼果實的果皮O2-·產(chǎn)生速率，且在采后同一貯藏時間，其果皮O2-·產(chǎn)生速率極顯著低于對照龍眼果實（P＜0.01）。如在采收當(dāng)天，采前噴施DA-6的龍眼果皮O2-·產(chǎn)生速率比對照龍眼果實低43.43%；貯藏至第6天時，采前噴施DA-6的龍眼果皮O2-·產(chǎn)生速率比對照龍眼果實低26.57%。

由圖1B可知，對照龍眼果實的果皮MDA含量隨采后貯藏時間的延長而逐漸升高；進一步比較發(fā)現(xiàn)，采前噴施DA-6可有效降低采后龍眼果實的果皮MDA含量，且在采后同一貯藏時間，其果皮MDA含量極顯著低于對照龍眼果實（P＜0.01）。如在采收當(dāng)天和貯藏的第6天，采前噴施DA-6的龍眼果實果皮MDA含量分別比對照龍眼果實低47.83%和44.13%。

上述結(jié)果表明，采前噴施DA-6可降低采后龍眼果實的果皮O2-·產(chǎn)生速率和減少膜脂過氧化產(chǎn)物MDA的生成。

2.2 采前噴施DA-6對采后龍眼果實果皮活性氧清除酶活力的影響

圖2 采前噴施DA-6對采后龍眼果皮SOD（A）、CAT（B）、APX（C）和GR（D）活力的影響Fig. 2 Effect of pre-harvest spraying of DA-6 on activities of SOD (A),CAT (B), APX (C) and GR (D) in pericarp of harvested longan fruit

由圖2A可知，對照和采前噴施DA-6的采后龍眼果實果皮SOD活力在貯藏0～1 d快速升高，貯藏1 d之后不同處理組變化不同。其中，對照龍眼果實的果皮SOD活力在貯藏1～2 d急速下降，2～4 d緩慢升高，4～5 d緩慢下降，5～6 d急速下降；而采前噴施DA-6的龍眼果實果皮SOD活力在貯藏1～2 d急速下降，2～5 d變化不大，5～6 d快速下降。在整個采后貯藏期間，采前噴施DA-6的龍眼果實果皮SOD活力都高于對照龍眼果實，兩者間的差異達到顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）水平。如貯藏至第3天和第6天，采前噴施DA-6的龍眼果實果皮SOD活力分別比對照龍眼果實高10.93%和23.51%。

由圖2B可知，對照龍眼果實的果皮CAT活力在貯藏0～2 d快速升高，2～3 d急速下降，3～4 d基本保持不變，4～5 d急速上升，5～6 d急速下降；采前噴施DA-6的龍眼果實果皮CAT活力在貯藏0～2 d緩慢上升，2～3 d急速下降，3～4 d急速上升，4～5 d變化不大，5～6 d急速下降。進一步比較發(fā)現(xiàn)，采前噴施DA-6可保持采后龍眼果實較高的果皮CAT活力，且在采后同一貯藏時間，其果皮CAT活力顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）高于對照龍眼果實。如采收當(dāng)天和貯藏至第6天，采前噴施DA-6的龍眼果實果皮CAT活力分別比對照組龍眼果實高34.54%和16.95%。

由圖2C可知，對照龍眼果實的果皮APX活力在貯藏0～1 d急速升高，1～4 d較慢下降，4～5 d快速升高，5～6 d急速下降；采前噴施DA-6的龍眼果實果皮APX活力在貯藏0～1 d變化不大，1～2 d急速升高，2～4 d快速下降，4～6 d緩慢下降。進一步比較發(fā)現(xiàn)，在采后同一貯藏時間，采前噴施DA-6的龍眼果實果皮APX活力都顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）高于對照龍眼果實。如采收當(dāng)天、貯藏第2天和第6天，采前噴施DA-6的龍眼果皮APX活力分別是對照龍眼果實的1.71、2.04 倍和2.06 倍。

由圖2D可知，對照龍眼果實的果皮GR活力在貯藏前期（0～2 d）變化不大，2～4 d快速升高，4～5 d較慢下降，5～6 d急速下降；采前噴施DA-6的龍眼果實果皮GR活力在0～2 d較慢上升，2～3 d快速上升，3～5 d較慢下降，5～6 d急速下降。進一步比較發(fā)現(xiàn)，在采后同一貯藏時間，采前噴施DA-6的龍眼果實果皮GR活力都極顯著高于對照龍眼果實（P＜0.01）。如采后當(dāng)天、貯藏中期（3 d）和貯藏后期（6 d），采前噴施DA-6龍眼果皮GR活力分別是對照龍眼果實的1.41、1.70 倍和1.41 倍。

上述結(jié)果表明，采前噴施DA-6可保持采后龍眼果實較高的果皮SOD、CAT、APX和GR等活性氧清除酶活力。

2.3 采前噴施DA-6對采后龍眼果實果皮內(nèi)源抗氧化物質(zhì)含量的影響

圖3 采前噴施DA-6對采后龍眼果皮AsA（A）和GSH（B）含量的影響Fig. 3 Effect of pre-harvest spraying of DA-6 on contents of AsA (A)and GSH (B) in pericarp of harvested longan fruit

由圖3A可知，采后龍眼果實的果皮AsA含量隨采后貯藏時間的延長而逐漸下降。對照龍眼果實的果皮AsA含量下降速度快于采前噴施DA-6的龍眼果實。如貯藏第6天時，與采收當(dāng)天相比，對照龍眼果實的果皮AsA含量下降了37.59%，而采前噴施DA-6的龍眼果實果皮AsA含量僅下降了8.37%。進一步比較發(fā)現(xiàn)，在采后同一貯藏時間，采前噴施DA-6的龍眼果皮AsA含量都顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）高于對照龍眼果實。如在采收當(dāng)天和貯藏第6天，采前噴施DA-6的龍眼果實果皮AsA含量分別是對照龍眼果實的1.06 倍和1.56 倍。

由圖3B可知，采后龍眼果實的果皮GSH含量隨采后貯藏時間的延長而逐漸下降。對照龍眼果實的果皮GSH含量在貯藏0～1 d變化不大，1～2 d急速下降，2～3 d較慢升高，3～5 d快速下降，5～6 d略有下降；采前噴施DA-6的龍眼果實果皮GSH含量在0～4 d緩慢下降，4～5 d急速下降，5～6 d變化不大。進一步比較發(fā)現(xiàn)，在采后2～6 d的同一貯藏時間，采前噴施DA-6的龍眼果皮GSH含量都顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）高于對照龍眼果實。如采后貯藏第3天和第6天，采前噴施DA-6的龍眼果實果皮GSH含量分別比對照龍眼果實高13.30%和23.09%。

上述結(jié)果表明，采前噴施DA-6可有效延緩采后龍眼果實果皮內(nèi)源抗氧化物質(zhì)（AsA、GSH）含量的下降。

2.4 采前噴施DA-6對采后龍眼果實果皮DPPH自由基清除率和總還原能力的影響

由圖4A可知，采后龍眼果實的果皮DPPH自由基清除率隨采后貯藏時間的延長整體呈下降趨勢。對照龍眼果實的果皮DPPH自由基清除率在貯藏0～1 d略有升高，1～2 d急速下降，2～5 d緩慢下降，5～6 d快速下降；采前噴施DA-6的龍眼果實果皮DPPH自由基清除率在貯藏0～1 d略有升高，1～2 d較快下降，2～6 d緩慢下降。進一步比較發(fā)現(xiàn)，在采后同一貯藏時間，采前噴施DA-6的龍眼果實果皮DPPH自由基清除率都顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）高于對照龍眼果實。如采收當(dāng)天、貯藏第3天和第6天，經(jīng)采前噴施DA-6的龍眼果實果皮DPPH自由基清除率分別比對照龍眼果實高7.496%、21.03%和24.37%。

由圖4B可知，對照龍眼果實的果皮總還原能力在采后貯藏0～1 d略有升高，1～2 d快速下降，2～4 d緩慢下降，4～6 d較快下降；采前噴施DA-6的龍眼果實果皮總還原能力在采后貯藏0～1 d略有升高，1～2 d較快下降，2～3 d快速下降，3～5 d緩慢下降，5～6快速下降。進一步比較發(fā)現(xiàn)，在采后同一貯藏時間，采前噴施DA-6的龍眼果實果皮總還原能力都顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）高于對照龍眼果實。如采收當(dāng)天、貯藏第2天和第6天，采前噴施DA-6的龍眼果實果皮總還原能力分別比對照龍眼果實高6.25%、16.05%和18.52%。

圖4 采前噴施DA-6對采后龍眼果皮DPPH自由基清除率（A）和總還原能力（B）的影響Fig. 4 Effect of pre-harvest spraying of DA-6 on DPPH radical scavenging ability (A) and total reducing power (B) in pericarp of harvested longan fruit

上述結(jié)果表明，采前噴施DA-6可延緩采后龍眼果實果皮DPPH自由基清除率和總還原能力的下降，并保持在較高水平。

3 討 論

果蔬自身積累的活性氧可通過自身的活性氧清除系統(tǒng)清除，其活性氧清除系統(tǒng)包括活性氧清除酶系統(tǒng)（SOD、CAT、APX和GR）和非酶清除系統(tǒng)內(nèi)源抗氧化物質(zhì)（AsA和GSH）[5-6,15-18,25-30]。果蔬采后活性氧代謝強弱與果蔬的耐貯性有關(guān)。通常情況下，果蔬活性氧清除能力越強，則果蔬越耐貯藏；反之，果蔬活性氧清除能力越弱，則果蔬越不耐貯藏[5-6,15-18,25-30]。Sun Junzheng等[18]研究報道，焦腐病菌（Lasiodiplodia theobromae(Pat.) Griff. & Maubl.）侵染采后龍眼果實，會導(dǎo)致活性氧清除酶（SOD、CAT、APX）活力和內(nèi)源抗氧化物質(zhì)（AsA、GSH）含量快速下降，DPPH自由基清除率和總還原能力維持較低水平，使活性氧清除能力下降而積累大量活性氧和MDA，進而破壞細胞膜結(jié)構(gòu)，最后導(dǎo)致龍眼果皮褐變和病害的發(fā)生。Lin Yifen等[17]研究報道，2,4-二硝基苯酚處理可降低擬莖點霉（Phomopsis longanae Chi）接種龍眼果實的果皮活性氧清除能力而積累大量活性氧和MDA，進而加快龍眼果皮褐變和病害的發(fā)生進程；而外源ATP處理可使擬莖點霉接種龍眼果實保持較高的果皮活性氧清除能力，從而減緩龍眼果皮褐變和病害的發(fā)生。此外，Lin Yifen等[15]研究報道，外源活性氧（過氧化氫）處理可降低龍眼果實的果皮活性氧清除能力而促進活性氧的產(chǎn)生和積累、促進膜脂過氧化產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生，從而加快采后龍眼果實果皮褐變的發(fā)生；但外源活性氧清除劑（棓酸丙酯）處理可保持采后龍眼果實較高的果皮活性氧清除能力，從而減少活性氧產(chǎn)生和MDA積累，最后延緩采后龍眼果實果皮褐變的發(fā)生[16]。Chomkitichai等[31]研究認為，用二氧化氯熏蒸處理可提高采后龍眼果實果皮活性氧清除能力，進而減少活性氧在細胞內(nèi)的積累，同時可以抑制脂質(zhì)過氧化作用和保持較好的細胞膜結(jié)構(gòu)，延緩衰老進程的速度，最后提高其耐貯性。張帆等[32]研究發(fā)現(xiàn)，采前噴施濃度為1 mmol/L的水楊酸可提高采后樹莓果實DPPH自由基清除率和總抗氧化能力，從而提高采后樹莓果實耐貯性。馮磊等[33]研究認為，在桃果樹不同盛花期，采前噴施氯化錳和氯化鈣可提高采后桃果實活性氧清除酶活力，而降低O2-·產(chǎn)生速率和MDA含量，進而提高采后桃果實耐貯性和貯藏品質(zhì)。綜上所述，采后果蔬的耐貯性與其活性氧代謝密切相關(guān)。由此可見，活性氧代謝強度可以通過采前或采后處理進行調(diào)節(jié)，從而控制采后果蔬的耐貯性和保鮮效果。DA-6作為一種新型植物生長調(diào)節(jié)劑，目前鮮見采前噴施DA-6對采后龍眼果實果皮活性氧代謝影響的報道。因此，本研究結(jié)果可為龍眼及其他果蔬采后保鮮提供新的科學(xué)依據(jù)。

本研究發(fā)現(xiàn)，與對照龍眼果實比較，采前噴施DA-6可提高采收當(dāng)天和采后貯藏期間龍眼果實的果皮活性氧清除酶（SOD、CAT、APX、GR）活力和內(nèi)源抗氧化物質(zhì)（AsA、GSH）含量，保持較高果皮DPPH自由基清除率和總還原能力，降低果皮O2-·產(chǎn)生速率和MDA含量。聯(lián)系到本課題組前期研究結(jié)果，采前噴施DA-6可以降低采收當(dāng)天和采后貯藏期間龍眼果實呼吸強度、保持較高果皮色素含量及果肉營養(yǎng)物質(zhì)含量，減少果皮褐變和果肉自溶，最后提高其耐貯性和保鮮效果[21]。據(jù)此認為，采前噴施DA-6可提高采后龍眼果實的耐貯性與其提高采收當(dāng)天和采后貯藏期間果皮的活性氧清除能力有關(guān)。