胡國(guó)娟

（白銀市白銀區(qū)獸醫(yī)局，甘肅 白銀 730900）

近年來，一些研究者們針對(duì)提高精液質(zhì)量開展了相關(guān)研究，發(fā)現(xiàn)精子活力和保存時(shí)間是反映其品質(zhì)的兩個(gè)主要因素主。精子活力和保存時(shí)間受眾多因素的影響，如公豬的遺傳因素、年齡、日糧、環(huán)境、管理及疾病等[1]。本研究通過精液的采集、稱量、稀釋、檢測(cè)精子活力和密度以及封裝保存的方法，搜集了有關(guān)稀釋度、采精頻率、保存溫度等相關(guān)數(shù)據(jù)，分析了其對(duì)大白豬精子活力和保存時(shí)間的影響，為提高豬精液品質(zhì)提供參考。

1 影響精液品質(zhì)的因素

1.1 稀釋度

人工授精采取的精液不會(huì)立刻投入使用，需經(jīng)過適當(dāng)?shù)南♂屧偈褂?，一方面可擴(kuò)大精液體積，另一方面有助于延長(zhǎng)精子存活時(shí)間，提高母豬受胎率。由于未經(jīng)稀釋的精液中副性腺分泌物的濃度高，加入稀釋液后副性腺分泌物得到稀釋,從而鞏固了原生質(zhì)膜，同時(shí)稀釋液還供給精子充分的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，提供緩沖劑，保持精液適當(dāng)?shù)膒H值，為較長(zhǎng)期保存和長(zhǎng)途運(yùn)輸提供了便利[2]。

1.2 采精頻率

小公豬訓(xùn)練成功后，每隔5 d采精一次，成年公豬每隔兩天即可采精。精子從精原干細(xì)胞到生成具有受精能力的成熟精子大約需要42 d才能完成。采精頻率過高，精子的結(jié)構(gòu)和功能尚未完全發(fā)育，導(dǎo)致其品質(zhì)差、密度小、活力低；而采精頻率過低，精子會(huì)在附睪內(nèi)大量積壓，使得采集的精液精子活力較差，畸形率高，同時(shí)精子產(chǎn)生大量活性氧（ROS）與精子質(zhì)膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，造成精子質(zhì)膜損傷，精子活力下降，不適合配種[3]。

有研究發(fā)現(xiàn)，采精頻率在一定范圍內(nèi)時(shí)，對(duì)種豬的影響最小，淘汰率也最低，精液品質(zhì)也相對(duì)較好。采精次數(shù)太少，會(huì)導(dǎo)致精液在附睪中積壓過多，影響精子質(zhì)量；同時(shí)，采精次數(shù)過多不僅會(huì)影響種豬性欲，也會(huì)由于附睪產(chǎn)精子供應(yīng)不足，采集的精液大多為精清。

1.3 保存方法

到目前為止，將豬精液常溫保存3 d以上而保持良好受精率的稀釋液配方尚未取得令人滿意的結(jié)果，但卻有所進(jìn)步[4]。研究發(fā)現(xiàn)，豬精液最適合常溫保存，在15～25℃時(shí)，由于微生物生長(zhǎng)迅速而影響精液質(zhì)量，使得精液的保存時(shí)間和成活率都不高[5]。當(dāng)精子處于休眠狀態(tài)時(shí)，活力較穩(wěn)定，從而可以延長(zhǎng)保存時(shí)間。

1.4 其他因素

不同品種的種公豬其精液密度會(huì)因其遺傳特性有所差異，而種公豬的精液密度與總產(chǎn)仔數(shù)、初生窩重、窩產(chǎn)活仔數(shù)表現(xiàn)為強(qiáng)的正相關(guān)[6]。對(duì)于不同使用年限的公豬，精液質(zhì)量也是不同的，剛開始進(jìn)行馴化、誘情的小公豬不僅采精量少，而且精液質(zhì)量也相對(duì)較差。一般來講，投入生產(chǎn)1～2年左右的種公豬生產(chǎn)的精液品質(zhì)是最好的。達(dá)到一定年限，將會(huì)按照種公豬淘汰規(guī)則定期淘汰不能繼續(xù)生產(chǎn)的種公豬。嚴(yán)格執(zhí)行操作流程，保持干凈無菌的環(huán)境，可以有效地避免精液污染。因此公豬站的建立一般是按照SPF 標(biāo)準(zhǔn)建立。

公豬的飼養(yǎng)環(huán)境條件要求很高，濕度不宜太大，一般控制在 65% 左右。公豬對(duì)于熱的應(yīng)激遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于冷應(yīng)激；溫度范圍在18～22 ℃ 可以使公豬感到舒適。公豬舍在冬天溫度應(yīng)該在15 ℃ 以上，夏天在30 ℃以內(nèi)，超過或低于相應(yīng)限度均會(huì)影響公豬的誘情，降低公豬性欲，從而影響精液質(zhì)量。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 精液的采集 試驗(yàn)豬為武川李家豬場(chǎng)飼養(yǎng)的1～2歲大白種公豬，以同一采精員采集的精液作為試驗(yàn)材料。采用徒手法采精，具體操作為：將經(jīng)過馴化的公豬擠出尿液后引至假母臺(tái)，通過母豬尿液或公豬精液對(duì)其誘情，引發(fā)公豬性欲，待公豬陰莖呈螺旋狀抽動(dòng)，用手卡在陰莖頭部，用保溫杯接取精液，將比較濃稠的部分收集保存，經(jīng)過過濾處理后保存于保溫杯中，放入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。

2.1.2 儀器設(shè)備 可調(diào)精液保存箱、恒溫水浴鍋、電子顯微鏡（400倍）、37 ℃ 保溫板、精液封裝機(jī)、離心管、恒溫磁力加熱攪拌器。

2.2 方法

2.2.1 不同稀釋比例對(duì)精子活力和保存時(shí)間的影響 每500 g稀釋粉與1 000 ml蒸餾水的比例配置成稀釋液，放置在攪拌器上攪拌15 min后，靜置15 min，二次攪拌15 min后再靜置15 min，然后與原精混合。

用離心管將靜置后的稀釋液與原精按1:1、1:3、1:6、1:9、1:12的比例混合，靜置于37℃的保溫板上分別鏡檢一次（鏡檢后存于可調(diào)精液保存箱中，每次鏡檢前均需在恒溫水浴鍋中加熱），根據(jù)鏡檢結(jié)果計(jì)算精子活力，觀察是否有死精以及精液的粘連程度，判斷精子畸形率。

精子的活力是指原精液在 37 ℃ 下呈直線運(yùn)動(dòng)的精子占全部精子總數(shù)的百分率[7]。

2.2.2 采精頻率對(duì)精子活力的影響 隨機(jī)抽取9頭種公豬，記錄對(duì)應(yīng)耳牌號(hào)、采精日期、采精量、活力比、密度，分別觀察記錄一個(gè)月內(nèi)正常采精次數(shù)下采精量的多少、檢測(cè)精子活力，并對(duì)采精量、活力比、密度求均值進(jìn)行分析。種公豬采精頻率為每3 d 采精1次[8]。

2.2.3 不同常溫保存方法對(duì)精子活力的影響精液保存技術(shù)通過降低或抑制精子的新陳代謝強(qiáng)度從而達(dá)到延長(zhǎng)精子在體外存活時(shí)間的目的[9]。將配制好的同一種豬同比例精液（本實(shí)驗(yàn)中用1:9）等量分成6份置于離心管中，放在37 ℃ 保溫板上，將6份精液分次放入可調(diào)精液保存箱中儲(chǔ)存1 h ，溫度分別調(diào)為15 ℃、17 ℃、19 ℃、21 ℃、23 ℃、25 ℃，連續(xù)觀察5 d天，記錄觀察精子活力變化。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同稀釋比例對(duì)與精子活力和保存時(shí)間的影響

不同比例稀釋液下精子活力變化差異顯著，也間接影響其畸形。不同稀釋比例下精子活力大小、畸形變化和保存時(shí)間的關(guān)系分析結(jié)果見表1。

從表1可見，在1:1、1:3、1:6條件下，第五天時(shí)精子基本失去活力。第四天時(shí)通過精子的粘連程度來看，此時(shí)精子畸形率最高，不宜使用。在1：9和1:12條件下，精子保持較高活力狀態(tài)的保存時(shí)間可以達(dá)到第五天且畸形率低。綜合考慮，精子在1:9稀釋比例條件下品質(zhì)最佳。

3.2 采精頻率對(duì)精子活力的影響

針對(duì)所選種豬，將采精量、活力比以及密度求均值后進(jìn)行比較。同一品系大白豬在4月份不同采精次數(shù)采精量、活力比和密度均值見表2。

由表2可見，采精次數(shù)在5～6次的種豬采精量相對(duì)普遍較高，且活力比也較為穩(wěn)定。就對(duì)比結(jié)果來看，一頭種豬一個(gè)月內(nèi)的采精次數(shù)需在5～6次，過少或過多的采精頻率均會(huì)影響精子活力，降低精液品質(zhì)。

3.3 不同保存溫度對(duì)精子活力和保存時(shí)間的影響

為制作更高品質(zhì)的精液，將溫度范圍精確到單個(gè)溫度值波動(dòng)范圍內(nèi)。不同溫度下保存時(shí)間和精子活力大小見表3。

表1 不同稀釋度與精子活力和保存時(shí)間的關(guān)系

表2 采精頻率與精子活力的關(guān)系

由表3可見，精液儲(chǔ)存在略低的溫度下可以延長(zhǎng)精子的存活期，在17 ℃下精子活力最為穩(wěn)定，基本處于休眠狀態(tài)。因此，可以選用17 ℃精液保存箱保存，以提高精液質(zhì)量。

4 總結(jié)

影響精液質(zhì)量的因素除了上述的公豬年齡、季節(jié)、稀釋液對(duì)精液質(zhì)量的影響外，還有飼養(yǎng)管理、營(yíng)養(yǎng)水平、采精操作、保存運(yùn)輸?shù)萚10]。綜合考慮影響精液品質(zhì)的不同因素，能夠大范圍影響精液品質(zhì)的因素主要有配比稀釋液的濃度、月均每頭豬的采精頻率和保存時(shí)間及溫度的控制三個(gè)方面。

本研究結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)：原精液與稀釋液的配制比例應(yīng)該控制在1:9左右，可以有效維持精子活力，降低畸形率；每頭可正常生產(chǎn)的大白豬每月采精頻率應(yīng)控制在5～6次，可以維持公豬良好的生產(chǎn)狀態(tài)，延長(zhǎng)使用期限；精液保存溫度應(yīng)控制在17 ℃，盡量保證隨產(chǎn)隨用，減少儲(chǔ)精積壓，保證精液活力。

表3 不同保存溫度與精子活力的關(guān)系