田奎蓉,孫華林,洪 業(yè),劉俊林，藺國(guó)珍

（西北民族大學(xué) 生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅 蘭州 730030）

高血壓(Hy pertension)以動(dòng)脈壓升高為特征，伴有心臟、血管、腦和腎等組織器官功能性或器質(zhì)性改變的一種發(fā)病率很高的疾病[1]。發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)、腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS) 活性增高、血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙等眾多因素有關(guān)[2]。芹菜(Apium graveolens L.)是一種二年生的傘形科芹菜屬的草本植物，具有降血壓、鎮(zhèn)靜健胃、利尿、潤(rùn)肺等功效。張桂等對(duì)芹菜的根、莖、葉三部分進(jìn)行了提取研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芹菜莖葉中都含有較高的黃酮化合物，且具有降血壓功效的主要為芹菜中的黃酮化合物。芹菜中黃酮物質(zhì)主要為槲皮素、芹菜素和木犀草素[3-6]。芹菜素作為一種分布廣泛的天然植物成分，對(duì)高血壓有一定的治療作用。芹菜在科學(xué)飲食控制高血壓的食療蔬菜中占有十分重要的地位。因此，芹菜不同部位活性物質(zhì)對(duì)高血壓降壓效果的觀察研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料與方法

1.1 藥品、材料與儀器

實(shí)驗(yàn)藥品：無水乙醇、氯化鈉、甲醛、冰醋酸、二甲苯(均為分析純)，購(gòu)自天津市富宇精細(xì)化工有限公司;醇溶性伊紅、蘇木精，購(gòu)自上海伯奧生物科技有限公司；各熔點(diǎn)石蠟，上海標(biāo)本模型廠生產(chǎn)。常規(guī)試劑購(gòu)自天津大茂化學(xué)試劑廠；“利血平”原產(chǎn)海南制藥廠有限公司，購(gòu)自蘭州本地零售藥店。

實(shí)驗(yàn)儀器：BP-100A 全自動(dòng)大小鼠無創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)（成都泰盟軟件有限公司）；UV-1800 紫外可見光分光光度計(jì)（日本島津公司）；N-1100D 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；真空冷凍干燥器（北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；Nikoncoolpix 4500數(shù)碼照相機(jī)(日本尼康公司)；LEICA Histo stat 820 石蠟切片機(jī)；LEI-CA-DM500 光學(xué)顯微鏡（德國(guó)萊卡公司生產(chǎn))；BX-UCB/BX61 圖像采集系統(tǒng)、Image-Pro Plus 6. 0 圖像測(cè)量分析系統(tǒng)(日本奧林巴斯公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

60 只Wister 大鼠（雌雄各半），體重200～300g 由蘭州獸醫(yī)研究所提供。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 芹菜各部位藥液的制備 購(gòu)置蘭州本地毛芹 10 kg，將芹菜水洗后，晾干，切碎后分別放置于烘干箱內(nèi)，55℃烘干，研磨成粉。70% 的乙醇 65℃ 水浴浸提 2 h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮（45～60℃）至濃縮液呈膏體狀，然后轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)，冷凍干燥完全[5-10]。取其干燥粉末分別配制成含生藥 0.001 mg、0.005 mg、0.008 mg/ml 的藥液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.2 高血壓模型建立 將60 只大鼠（雌雄各半），適應(yīng)性生存 3 d 后均分為 6 個(gè)大組，給予正常飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，按 6% 劑量的氯化鈉溶液給予實(shí)驗(yàn)組大鼠自由飲用[11,12]，對(duì)照組給予等量蒸餾水。待實(shí)驗(yàn)組大鼠出現(xiàn)血壓升高且恢復(fù)正常飲水，血壓穩(wěn)定不降低時(shí)建模成功[13,14]。

1.4 芹菜提取物對(duì)高鹽高血壓大鼠模型降壓效果

1.4.1 給藥治療 將高鹽飲水高血壓模型大鼠分為 3 組，分別標(biāo)記為： 陽性對(duì)照組，“利血平”藥片研磨成粉末，按大鼠體重進(jìn)行灌胃（0.001mg·kg-1BW）；實(shí)驗(yàn)組，選取 1.3.1 中配制的藥液分別標(biāo)記為低、中、高三個(gè)濃度（0.001 mg、0.005 mg、0.008mg/ml）。按體質(zhì)量給予實(shí)驗(yàn)組灌胃治療(10 ml· kg-1BW)；陰性對(duì)照組給予等量生理鹽水，治療期間大鼠自由飲食、飲水；持續(xù)2周[15-17]。

1.4.2 顯著性差異分析 使用 spss 23.0 軟件對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行差異顯著性分析。

1.5 高鹽高血壓大鼠模型組織切片的制作及相關(guān)臟器系數(shù)的測(cè)定

1.5.1 大鼠心臟系數(shù)、腎臟系數(shù)、肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)的測(cè)定

稱量各組大鼠體質(zhì)量，頸椎脫臼處死后快速摘除心臟、腎臟、肝臟、脾臟并稱重。

1.5.2 組織切片制作 對(duì)治療后大鼠分組進(jìn)行解剖，取其心臟、血管、肝臟、腎臟用10%甲醛進(jìn)行固定，然后制作HE染色病理組織切片。（如圖1）

圖1 芹菜不同部位提取物對(duì)大鼠不同組織的影響

A-1 陰性組大鼠心臟 (HE，200×)，A-2 陰性組大鼠肝臟(HE，200×)，A-3 陰性組大鼠腎臟(HE，200×)，A-4陰性組大鼠血管 (HE，200×)。

B-1 芹莖組大鼠心臟 (HE，200×)，B-2 芹莖組大鼠肝臟(HE，200×)，B-3 芹莖組大鼠腎臟(HE，200×)，B-4芹莖組大鼠血管(HE，200×)。

C-1 芹根組大鼠心臟 (HE，200×)，C-1 芹根組大鼠肝臟(HE，200×)，C-1 芹根組大鼠腎臟(HE，200×)，C-1芹根組大鼠血管(HE，200×)。

D-1 芹葉組大鼠心臟 (HE，200×)，D-1 芹葉組大鼠肝臟(HE，200×)，D-1 芹葉組大鼠腎臟(HE，200×)，D-1芹葉組大鼠血管(HE，200×)。

E-1 陽性組大鼠心臟 (HE，200×)，E-1 陽性組大鼠心臟(HE，200×)，E-1 陽性組大鼠心臟(HE，200×)，E-1陽性組大鼠心臟(HE，200×)。

F-1 正常組大鼠心臟 (HE，200×)，F(xiàn)-1 正常組大鼠肝臟(HE，200×)，F(xiàn)-1 正常組大鼠腎臟(HE，200×)，F(xiàn)-1正常組大鼠血管(HE，200×)。

如圖 1 所示 A-1中心肌細(xì)胞肥大，心肌纖維增粗，纖維間間隙增大，有部分?jǐn)嗔亚闆r出現(xiàn)，局灶區(qū)域有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；B-1中心肌纖維部分區(qū)域出血，纖維間間隙增大，心肌纖維有部分?jǐn)嗔亚闆r和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；C-1中心肌纖維略有增粗、纖維間間隙增寬、有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；D-1中心肌纖維形態(tài)正常，纖維間隙略有增寬；E-1中心肌纖維基本正常，局部區(qū)域有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；F-1中心肌纖維正常。A-2中肝臟細(xì)胞充血水腫，有大量脂滴樣空泡出現(xiàn)，局灶地區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，B-2、C-2、D-2、E-2 中肝組織有不同程度水腫，但無脂滴空泡和壞死情況出現(xiàn)，局部區(qū)域有不同程度炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。 A-3中腎組織水腫，有漿液性滲出物彌漫，局部地區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管和集合管細(xì)胞變性壞死，腎小球纖維化，腎小管萎縮；B-3腎組織水腫，腎小球有部分出血情況并有漿液性滲出物，部分腎小球纖維化伴隨局部炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；C-3腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞部分壞死，腎組織充血水腫，腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞中有漿液性滲出物彌漫，組織內(nèi)有輕微脂滴樣空泡出現(xiàn)，局灶地區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯；D-3中腎組織有輕微水腫和漿液性滲出，部分腎組織細(xì)胞壞死，腎小管和集合管周有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、E-3 中腎組織形態(tài)基本正常，有輕微漿液性滲出物，腎小球部分萎縮，有輕微炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。A-4、B-4、C-4、D-4、E-4 中較 F-4 中有不同程度血管充血、出血，血管周炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管平滑肌纖維細(xì)胞纖維化以及變性壞死、血管壁重構(gòu)等現(xiàn)象，以A-4、C-4中最為嚴(yán)重。

2 結(jié)果

由表 1可知中劑量組和高劑量組對(duì)大鼠血壓降低具有一定作用，中劑量組治療降壓效果與陰性對(duì)照組相比具有顯著性，高劑量組提取物降壓效果與陰性對(duì)照組相比具有極顯著性差異，而低劑量組降壓效果與陰性對(duì)照組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，低劑量組對(duì)大鼠血壓降低效果較低，高劑量組治療效果最好。

表1 芹菜提取物對(duì)大鼠血壓的影響（`x±s ）

表2 芹菜提取物對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響(`x±s )

由表 2 可知，中劑量組、高劑量組、陽性對(duì)照組心臟系數(shù)較陰性對(duì)照組均有較明顯的降低，低劑量組降低情況不明顯；中劑量組、高劑量組、陽性對(duì)照組腎臟系數(shù)較陰性對(duì)照組均有較明顯的降低，低劑量組降低情況不明顯；低劑量組、中劑量組、高劑量組、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、正常組肝臟系數(shù)和脾臟系數(shù)無明顯差異。

3 討論

選用的氯化鈉溶液建立大鼠高血壓模型。對(duì)大鼠組織制作病理組織切片結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組大鼠各組織器官均有不同程度的病理變化。心臟左室肥大、心臟肌纖維變粗，心肌細(xì)胞肥大；肝臟有不同程度炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；動(dòng)脈血管壁增厚、細(xì)胞充血出血、血管壁重構(gòu)；腎臟有不同程度的水腫，腎小管、集合管細(xì)胞變性壞死，腎臟血管硬化，腎小管萎縮，且采用芹菜提取物治療的大鼠器官病變相對(duì)陰性對(duì)照組有一定程度的減輕。科學(xué)研究表明芹菜中含有較多的黃酮化合物，且具有降血壓功效的主要為黃酮化合物。芹菜中黃酮物質(zhì)主要為槲皮素、芹菜素和木犀草素。槲皮素降壓機(jī)制可能與減少氧化應(yīng)激、干擾腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)( RAAS) 和以內(nèi)皮依賴性和非依賴性方式改善血管內(nèi)皮功能等有關(guān)[3]，芹菜素能夠有效提高高血壓大鼠Ang II水平、降低血脂、改善心肌抗氧化酶活性、抑制氧化應(yīng)激損傷有關(guān)[14]。芹菜提取物對(duì)大鼠高血壓有一定的治療效果，但具體機(jī)制尚未闡述清楚，需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析探討。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)芹菜活性物質(zhì)進(jìn)行提取并作用于高鹽高血壓大鼠，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其對(duì)高血壓癥狀具有良好的治療作用。結(jié)論如下：芹菜提取物對(duì)大鼠高鹽高血壓模型有良好治療效果，在一定范圍給藥濃度越高，治療效果越好。以高劑量組(0.008 mg/ml)芹菜提取物治療效果最佳，且與陰性對(duì)照組相比差異極顯著。中劑量組與陰性對(duì)照組相比有顯著性差異，低劑量組無顯著性差異。