李欣諭，周建華

（山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250014）

楊枸花又名楊樹序［1］、楊樹吊、楊樹花、楊序花，系楊柳科楊屬植物干燥雄花序［2］，目前對(duì)該屬植物的利用大多集中在木材本身，而鮮有涉及楊枸花。楊枸花富含淀粉、纖維素、多糖等多種營(yíng)養(yǎng)成分，蛋白質(zhì)含有量豐富，氨基酸組成比例適當(dāng)，并含有麥角甾醇、豆甾醇［3］、總黃酮等多種成分。其中，總黃酮包括喬松酮、白楊素、喬松素等，具有消炎、抑菌［4］、抗病毒［5］、抗炎癥、抗過敏［6］、抗腫瘤［7］、抗氧化［8-9］等多種生理活性，提取工藝有超聲提取法［10］、超臨界二氧化碳萃取法［11］、直接浸提法等，本實(shí)驗(yàn)采用超聲提取法提取該成分，并通過正交試驗(yàn)優(yōu)化該工藝。

春夏季節(jié)隨著氣溫回暖，蚊蟲滋生，蟲咬性皮炎出現(xiàn)的頻率顯著增高，在蚊蟲叮咬處常出現(xiàn)丘疹、風(fēng)團(tuán)、水腫性紅斑等癥狀，伴有不同程度的刺痛、奇癢等感受，給人們生活帶來極大困擾。目前，市場(chǎng)上驅(qū)蚊止癢產(chǎn)品主要為花露水和風(fēng)油精，雖然可以起到一定作用，但不具備治療功效，而且產(chǎn)品中一些農(nóng)藥成分還有可能引起過敏、接觸性皮炎等不良反應(yīng)。楊枸花總黃酮有消炎、抑菌、抗病毒的功效，對(duì)皮膚瘙癢療效理想，因此，本實(shí)驗(yàn)制備一種兼具驅(qū)蚊、止癢功效的該成分濕巾，取材天然無刺激，適合各類人群使用。

1 材料

1.1 試藥 蘆丁對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）。楊枸花采自山東師范大學(xué)千佛山校區(qū)，經(jīng)山東師范大學(xué)生科院植物教研室專家鑒定為毛白楊雄花序，采集后自然風(fēng)干，紫外燈下粉碎過篩，密封保存。無紡布（耐用型）；迷迭香精油（化妝品級(jí)）；絲瓜絡(luò)選用絲瓜收獲后自然風(fēng)干者，洗凈晾干備用。無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、褐藻酸鈉、氯化鈣均為分析純。

1.2 儀器 KQ-250DE 數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf 公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；JYL-390料理機(jī)（九陽股份有限公司）；電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)艾卡公司）。

2 方法和結(jié)果

2.1 總黃酮提?。?2］毛白楊雄花序→清洗→低溫烘干→粉碎→按一定料液比加溶劑浸潤(rùn)→超聲處理→離心取上清液→測(cè)定總黃酮含有量→分離純化。

2.2 線性關(guān)系考察 精密稱取干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品10 mg，80%乙醇溶解，定容至25 mL，制得0.40 mg／mL 對(duì)照品溶液，精密吸取0、400、800、1 200、1 600、2 000、2 800 μL，置于10 mL 比色管中，依次加入80%乙醇4 mL、5% NaNO2溶液400 μL，搖勻，放置6 min。加入10%Al（NO3）3溶液400 μL，搖勻，放置6 min，加入1 mol／L NaOH 溶液2 mL，80%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置10～15 min，以試劑空白為參比液，于510 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），吸光度為縱坐標(biāo)（A）進(jìn)行回歸，得方程為A=8.885 4X（R2=0.999 2）。

2.3 工藝優(yōu)化 取200 mg 藥材于試管中，80% 乙醇超聲（250 W）提取，對(duì)提取時(shí)間（A）、提取溫度（B）、料液比（C）3 個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，因素水平見表1。然后，提取液在4 200 r／min 下離心10 min，取上清液，按“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮得率，以其為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

結(jié)果見表2，方差分析見表3，可知各因素影響程度依次為A＞B＞C，最優(yōu)工藝為A2B3C3，但表2 中得率最高時(shí)參數(shù)為A3B3C2，進(jìn)一步驗(yàn)證后發(fā)現(xiàn)前者總黃酮含有量高于后者。最終確定，最優(yōu)工藝為A2B3C3，即提取時(shí)間30 min，提取溫度60 ℃，料液比1∶30。

表1 因素水平

表2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表3 方差分析

2.4 驅(qū)蚊止癢濕巾制備 楊枸花為楊屬植物的干燥雄花序，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)種類多樣，含有量豐富，具有清熱利濕、治療急性肝炎的作用，對(duì)治療皮膚瘙癢、蕁麻疹癥療效理想［13］。褐藻酸鈉是聚陰離子多糖（海藻酸）鈉鹽，對(duì)革蘭氏陽性菌的抑制作用強(qiáng)于革蘭氏陰性菌［14］。迷迭香為唇形科迷迭香屬植物，其精油的主要化學(xué)成分為酚類和揮發(fā)油類，如鼠尾草酸、鼠尾草酚，具有抗氧化、抗菌、消炎等諸多作用，其中主要驅(qū)蚊成分為檸檬烯。絲瓜絡(luò)為葫蘆科植物絲瓜老熟后去皮和種子的絲瓜果實(shí)維管束，具有耐磨性、吸水性，又兼具抗炎鎮(zhèn)痛等藥用價(jià)值［15］，可作為濕巾的良好載體。本研究以楊枸花、褐藻酸鈉、迷迭香精油、絲瓜絡(luò)為原料，經(jīng)過一定配比和工藝流程制得一種兼具驅(qū)蚊、止癢功效的濕巾。

2.4.1 工藝流程 見圖1。

2.4.2 操作要點(diǎn) （1）以優(yōu)化工藝提取總黃酮后，將提取液中乙醇蒸去，即得總黃酮提取液；將藥材粉末加入水中浸提后離心，取上清液，即得藥材浸提液，再將兩者按2.2∶42 比例均勻混合，即得驅(qū)蚊止癢液。另外，民間有用楊枸花水浸液治療皮膚瘙癢的方法，止癢效果良好，故用水作溶劑，采取直接浸提法進(jìn)行提取，可不經(jīng)加熱處理，從而減少對(duì)有效成分的破壞。

圖1 工藝流程

（2）將褐藻酸鈉溶液、迷迭香精油按一定比例均勻混合，注射器吸取混合好的凝膠狀物質(zhì)，置于CaCl2溶液［16］上方，針頭垂直液面，緩慢推動(dòng)針筒，使凝膠狀物質(zhì)形成的小球滴入溶液中，待其凝固變硬成型后過濾，即得凝膠小球。

（3）絲瓜絡(luò)洗凈晾干后剪成0.5～1.5 mm3的小塊，備用。

（4）將干凈的無紡布裁剪成長(zhǎng)10 cm、寬6 cm、厚3 mm的小塊，備用。

（5）將絲瓜絡(luò)鋪在透水透氣的下包覆層上，形成絲瓜絡(luò)層；將凝膠小球鋪在絲瓜絡(luò)層上，形成凝膠小球?qū)?；將絲瓜絡(luò)鋪在凝膠小球?qū)由希纬闪硪粚咏z瓜絡(luò)層，在絲瓜絡(luò)層上鋪設(shè)透水透氣性的上包覆層，連接上下包覆層的接口處，再將其置于驅(qū)蚊止癢液中浸泡片刻后拿出，即得驅(qū)蚊止癢濕巾，見圖2。

圖2 驅(qū)蚊止癢濕巾示意圖

2.4.3 產(chǎn)品指標(biāo) 感官指標(biāo)：呈淺棕黃色，溶液均勻透亮，無雜質(zhì)。衛(wèi)生指標(biāo)：菌落總數(shù)≤20 cfu／g，大腸菌、致病菌不得檢出。

3 討論與結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過正交試驗(yàn)，得到楊枸花總黃酮最優(yōu)提取工藝為提取時(shí)間30 min，提取溫度60 ℃，料液比1∶30。然后，以楊枸花、褐藻酸鈉、迷迭香精油、絲瓜絡(luò)為主要原料制備楊枸花驅(qū)蚊止癢濕巾，其中絲瓜絡(luò)能增加摩擦，減少皮膚瘙癢感；藥液具有抑菌、消炎、抗病毒功效，可有效緩解瘙癢癥狀；將迷迭香精油加到凝膠小球中，使用時(shí)通過按壓使小球破裂，味道逐漸釋放，從而起到長(zhǎng)久驅(qū)蚊的功效，而且濕巾取材天然，溫和不刺激，單獨(dú)包裝，便于攜帶。

楊枸花營(yíng)養(yǎng)成分全面豐富，同時(shí)具有抗腫瘤、消炎、抑菌等多種生物活性，是一種重要的植物資源。目前其產(chǎn)量很高，但利用率很低，而本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了它具有很好的開發(fā)和利用前景，值得研究人員關(guān)注。