王 蕾，張習本2*，高 翔，付登平，杜 傲，楊 馳

(1.畢節(jié)市液氮站，貴州 畢節(jié) 551700；2.畢節(jié)巿畜牧獸醫(yī)科學研究所，貴州 畢節(jié) 551700)

雞白痢是嚴重危害家禽養(yǎng)殖業(yè)的傳染病，不同品種、年齡的雞均可感染，且沒有地域限制，給家禽養(yǎng)殖業(yè)造成很大的經(jīng)濟損失。雛雞主要通過種蛋垂直感染，發(fā)病率和死亡率均很高；青年雞一般呈隱性感染，臨床癥狀不明顯，死亡率不高[1]。相關調研發(fā)現(xiàn)，在貴州省雞群中，雞白痢的隱性感染率高達20%～30%，嚴重危害貴州家禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展[2]?，F(xiàn)將1例雞白痢的實驗室診斷及防治報道如下，供參考。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

2019年5月13日，納雍縣化作鄉(xiāng)養(yǎng)殖大戶李某求診，其養(yǎng)殖的1 000只蛋雞中有40只相繼死亡(大多是30日齡左右)，另有220只青年雞、成年雞精神不振，雞冠發(fā)白，產(chǎn)蛋率急劇下降。發(fā)病率26%(260/1 000)，病死率15.38%(40/260)。臨床檢查：發(fā)現(xiàn)80%病雞和死亡雞的肛門被糞便粘結，腳趾充血、腫大。

2 病理變化

解剖病、死雞10只，發(fā)現(xiàn)肝臟腫大，有黃白色壞死點；肺發(fā)生明顯病變，表面有灰白色壞死點；盲腸增厚且內壁有顆粒狀物，觸摸有明顯黏膩感；卵巢萎縮，輸卵管狹小，均有卵黃性腹膜炎。

通過發(fā)病情況、臨床癥狀和病理變化初步診斷為疑似雞白痢。

3 實驗室檢查

3.1ELISA實驗采集病雞血液50份，8 000 r/min離心取血清，用ELISA血清抗體檢測試劑盒(購自廣州市益滿生物科技有限公司)進行檢測。方法：用包被緩沖液將已知抗原稀釋至10 μg/mL，每孔加0.1 mL，4 ℃過夜，次日洗滌3次。加10倍稀釋的血清0.1 mL于上述已包被反應孔中，置37 ℃ 孵育1 h，洗滌(同時做空白、陰性、陽性對照)，加入10倍稀釋的酶標第二抗體0.1 mL，37 ℃孵育30 min，洗滌，最后1次用超輕水(DDW)洗滌。加入TMB底物溶液0.1 mL，37 ℃孵育30 min，根據(jù)試劑盒的配套標準判定結果。結果顯示，有48份血清樣品雞白痢抗體呈陽性，陽性率96%。

3.2PCR檢測采集病雞的肝、肺、胃、腸病料組織6份進行PCR分子生物學檢測。方法：通過劃板、純化、搖菌等細菌分離方法從病雞的肝、肺、胃、腸病料組織中提取菌液108CFU/mL，用細菌DNA提取試劑盒[購自天根生化科技(北京)有限公司]提取菌液DNA，并用細菌16S rDNA基因序列測定。采用通用引物：27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；1492R：5’-TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3’。PCR擴增體系25 μL：mix 13 μL，ddH2O 8 μL，上、下游引物各1 μL，DNA 2 μL。反應條件：95 ℃預變性5 min；94 ℃變性1 min；54 ℃退火45 s；72 ℃延伸1 min，40個循環(huán)；72 ℃延伸1 min。擴增產(chǎn)物經(jīng)1.5% 瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像系統(tǒng)觀察到 1 383 bp 的清晰條帶，與預期大小相同(見圖1)。將PCR產(chǎn)物送擎科生物技術公司測序，將序列輸入GenBank中進行BLAST比對，與已發(fā)表序列的基因進行同源性分析，結果顯示檢測細菌與已發(fā)表的沙門氏菌同源性高達98%。遺傳進化分析，分離菌與雞白痢沙門氏菌基因序列親緣關系最近，確定其為雞白痢沙門氏菌(見圖2)。

圖1 分離菌16S rDNA PCR擴增結果M：16S rDNA 通用引物；1：肝臟中提取純化的細菌；2：肺臟中提取純化的細菌；3～5：胃組織中提取純化的細菌；6：腸組織中提取純化的細菌

圖2 分離菌基因序列遺傳進化樹分析注：★為分離菌

4 診斷

通過臨床癥狀、病理變化、實驗室ELISA和PCR檢測，確診為沙門氏菌引起的雞白痢。

5 治療

將220只病雞分為2組(各110只)，一組進行西藥治療，二組進行中藥治療。

5.1 一組用藥磺胺嘧啶溶液50 L (0.5 g/L)，雞群通過自由飲水的方式連續(xù)使用3 天。為了防止產(chǎn)生耐藥性，3天后更換藥物為慶大霉素溶液50 L (0.5 g/L)，雞群同樣通過自由飲水的方式連續(xù)服藥3天。6天后70%的病雞癥狀明顯好轉，沒有出現(xiàn)新的發(fā)病癥狀。對于病情較重的30%病雞，根據(jù)文獻資料[3]每天用卡那霉素1 mL/只，分2次肌肉注射，連續(xù)用藥3天，病情明顯好轉。

5.2 二組用藥根據(jù)文獻資料[3]按每只雞10 g的用量取大蒜1 100 g，搗成蒜泥汁，用水稀釋成10倍液，按每次0.5 mL/只飲服，每日3次，連續(xù)5天。經(jīng)治療后病雞癥狀均有明顯好轉，治愈率達90%以上，效果優(yōu)于西藥治療組。

6 預防

6.1 科學規(guī)范引種雞白痢傳播速度快且途徑多，必須加強引種管理，從雞白痢陰性的規(guī)范養(yǎng)殖場引種，從源頭上杜絕雞白痢沙門氏菌的污染。

6.2 加強養(yǎng)殖場的清潔消毒管理建立科學規(guī)范的消毒制度，可選擇有效的消毒藥品“消毒威”(二氯異氰尿酸鈉)對養(yǎng)殖環(huán)境、人員、車輛、用具等進行全面消毒，殺滅病原。

6.3 全面做好雞白痢凈化工作參照國家或地方標準，對蛋雞在120～140天進行雞白痢檢測凈化，檢測間隔30天，對陽性雞做淘汰處理，直到達到凈化標準。選擇科學規(guī)范的養(yǎng)殖設施，網(wǎng)上平養(yǎng)優(yōu)于地面平養(yǎng)，減少與糞便的接觸，可大大降低接觸性感染的發(fā)生率。