(1.貴州省開陽縣雙流鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州 貴陽 550300；2.貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，貴州 貴陽 550005)

隨著我省生態(tài)環(huán)境保護(hù)工作的推進(jìn)及畜牧業(yè)相關(guān)政策的落實(shí)，貴州黑山羊的飼養(yǎng)逐漸從放牧轉(zhuǎn)為舍飼或半舍飼。宋德榮等[1]試驗(yàn)表明，貴州黑山羊進(jìn)行舍飼是可行的，并能有效促進(jìn)養(yǎng)羊與生態(tài)的平衡發(fā)展。由于舍飼或半舍飼后貴州黑山羊的生活習(xí)性發(fā)生了改變，活動空間和運(yùn)動量減少、飼料營養(yǎng)不均衡、密度過大以及飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)?，造成患病的概率日益增高，甚至影響其免疫能力[2，3]。因此，提高舍飼或半舍飼羊的抗病力和免疫力對提高養(yǎng)羊經(jīng)濟(jì)效益和保障養(yǎng)羊業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展至關(guān)重要。已有研究表明，發(fā)酵菜籽粕代替部分豆粕飼喂仔豬能提高日增重，降低料重比和腹瀉率[4，5]；飼喂肉仔雞能提高生長性能、免疫功能和腸道消化酶活性的作用[6]；飼喂肉鴨能提高生長性能和改善腸道微生物[7]。本試驗(yàn)通過研究發(fā)酵菜籽粕等氮替代日糧中豆粕對貴州黑山羊羔羊生長性能和免疫功能的影響，為半舍飼或舍飼條件下精飼料的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物和時(shí)間地點(diǎn)選擇3～4月齡、平均體重(14.90±0.89)kg的健康貴州黑山羊羔羊12只作為試驗(yàn)動物。試驗(yàn)于2017年8—10月在貴州省畜牧獸醫(yī)研究所基地羊場進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)材料(1)枯草芽孢桿菌、黑曲霉、釀酒酵母、糞鏈球菌，分別購自中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院(中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，CICC)和中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心(ACCC)；(2)羊免疫球蛋白 G(IgG)、γ干擾素(IFN-γ)、胰島素樣生長因子-1(IGF-1)、生長激素(GH)、三碘甲狀腺原氨酸(T3)、四碘甲狀腺原氨酸(T4)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測試劑盒，購自上海優(yōu)選生物科技有限公司。

1.3 發(fā)酵菜籽粕的制備稱取菜籽粕40 kg，玉米粉2 kg，麩皮2 kg，無水氯化鈣0.04 kg，氯化銨0.60 kg，發(fā)酵菌種液8 kg(枯草芽孢桿菌∶糞鏈球菌∶釀酒酵母∶黑曲霉=5∶1∶1∶1)，自來水48 kg(靜置3 d)，攪拌均勻，裝袋壓實(shí)，密封發(fā)酵15 d。發(fā)酵完成后檢查顏色和聞氣味(發(fā)酵正常為褐色帶酒香味，發(fā)酵不正常的為黑色帶苦味)，將發(fā)酵正常的菜籽粕自然風(fēng)干，裝袋備用。經(jīng)檢測發(fā)酵菜籽粕的營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))為：干物質(zhì)88.00%、粗蛋白46.37%、消化能12.29 MJ/kg、粗脂肪2.01%、粗纖維7.80%、粗灰分9.26%、中性洗滌纖維16.70%、酸性洗滌纖維12.80%、鈣0.95%、磷1.61%。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理試驗(yàn)采用完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)(RCBD)將試驗(yàn)羊分為3組，每組4只，組間體重差異不顯著(P>0.05)。用發(fā)酵菜籽粕等氮替代精料日糧中16%豆粕，比例分別為：對照組0、試驗(yàn)1組50%、試驗(yàn)2組100%。日糧參考肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(2004)[8]營養(yǎng)需要配制，組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 羔羊精料組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

注：營養(yǎng)水平為計(jì)算值。預(yù)混料為北京科恩柯生物科技有限公司生產(chǎn)，每千克預(yù)混料中：VA20萬～23萬IU，VD338萬～39萬IU，VE≥100 IU，賴氨酸≥12 000 mg，水分≤14.0%，生物素≥2.5 mg，鈣4%～11%，鐵750～1 500 mg，銅300～500 mg，鋅1 000～1 700 mg，錳500～1 000 mg，碘4～11 mg，硒5～10 mg，鈷2.5～6 mg，磷2%～4%

試驗(yàn)羊采取“放牧+補(bǔ)飼”的模式飼養(yǎng)，每只山羊每天按照體重的2%飼喂精料，每日07：30和16：30 按照1∶ 1.5比例各飼喂1次，自由飲水。試驗(yàn)期 67 d(預(yù)試期7 d，正試期 60 d)。

1.5 指標(biāo)測定

1.5.1生長性能：正試期間準(zhǔn)確記錄各組羊的投料量和剩料量，計(jì)算日均精料采食量。分別于試驗(yàn)第1、30、60 d早上空腹稱量記錄試驗(yàn)羊體重，計(jì)算正試期各組的平均日增重、料重比。

1.5.2腹瀉情況：試驗(yàn)期間每天觀察羔羊糞便，計(jì)算羔羊的腹瀉率。腹瀉率(%)=(腹瀉羔羊只數(shù)×腹瀉天數(shù))/(羔羊總只數(shù)×總試驗(yàn)天數(shù))×100%。

1.5.3免疫性能和血清激素指標(biāo)：各組試驗(yàn)羊分別在正試期的第1、30、60 d早晨空腹稱重后，用無菌采血管從山羊頸靜脈采血4 mL，靜置析出血清，于3 500 r/min 離心30 min制備血清，用移液槍吸出血清，分裝于2支1.5 mL離心管中，做好標(biāo)記，放入-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩２捎肊LISA測定IgG、IFN-γ、IGF-1、GH、T3、T4含量。

1.6 數(shù)據(jù)分析處理使用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)前處理，用SAS for Windows 9.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多重比較用SNK法。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 生長性能由表2可見：(1)試驗(yàn)全期各組的平均日采食量差異不顯著(P>0.05)。(2)平均日增重以試驗(yàn)1組最高為80.21 g/只，各組間差異不顯著(P>0.05)。(3)料重比以試驗(yàn)1組最低為3.71，與對照組(3.81)差異不顯著(P>0.05)，比試驗(yàn)2組(4.14)低10.39%，差異顯著(P<0.05)。

2.2 腹瀉情況試驗(yàn)組無羔羊腹瀉，無死亡。對照組第1～30 d有1只羔羊腹瀉3 d，經(jīng)治療痊愈，無死亡，全期羔羊腹瀉率為1.25%，死亡率為0。

2.3 免疫功能指標(biāo)由表3可見：(1)IgG在試驗(yàn)第 1 d以試驗(yàn)1組最高為2.25 g/L，各組間差異不顯著(P>0.05)；第30 d以試驗(yàn)1組最高為 2.22 g/L，比對照組(2.05 g/L)、試驗(yàn)2組(2.05 g/L)高8.29%，差異顯著(P<0.05)；第60 d以試驗(yàn)1組最高為2.72 g/L，各組間差異不顯著(P>0.05)。(2)INF-γ在試驗(yàn)第 1 d以試驗(yàn)1組最高為 692.32 pg/mL，各組間差異不顯著(P>0.05)；第30 d以試驗(yàn)1組最高為664.30 pg/mL，比對照組(570.14 pg/mL)高16.52%，差異顯著(P<0.05)，比試驗(yàn)2組(463.64 pg/mL)高43.28%，差異顯著(P<0.05)；第60 d以試驗(yàn)1組最高為996.11 pg/mL，與對照組(989.39 pg/mL)差異不顯著(P>0.05)，比試驗(yàn)2組(777.52 pg/mL)高28.11%，差異顯著(P<0.05)。

表2 各組羔羊生長性能統(tǒng)計(jì)

注：同行無字母標(biāo)記或字母相同表示組間差異不顯著(P>0.05)，字母不同表示組間差異顯著(P<0.05)。下表同

表3 各組羔羊免疫功能指標(biāo)檢測

2.4 血清激素水平的變化由表4可見：(1)GH在第1、30、60 d以試驗(yàn)1組最高，分別為30.15、25.94、32.08 μg/L，各組間差異不顯著(P>0.05)。(2)IGF-1在試驗(yàn)第 1 d以試驗(yàn)1組最高為42.73 μg/L，各組間差異不顯著(P>0.05)；第30 d以試驗(yàn)1組最高為32.05 μg/L，比對照組(27.42 μg/L)高16.89%，差異顯著(P<0.05)，與試驗(yàn)2組(31.24 μg/L)差異不顯著(P>0.05)；第60 d以試驗(yàn)1組最高為39.47 μg/L，比對照組(29.54 μg/L)高33.60%，差異顯著(P<0.05)，比試驗(yàn)2組(34.47 μg/L)高14.51%，顯著差異(P<0.05)。(3)T3在試驗(yàn)第 1 d以試驗(yàn)1組最高為48.97 ng/mL，各組間差異不顯著(P>0.05)；第30 d以試驗(yàn)1組最高為48.18 ng/mL，比對照組(39.82 ng/mL)高21.01%，差異顯著(P<0.05)，比試驗(yàn)2組(38.73 ng/mL)高24.40%，差異顯著(P<0.05)；第60 d以試驗(yàn)1組最高為48.75 ng/mL，與對照組(48.47 ng/mL)差異不顯著(P>0.05)，比試驗(yàn)2組(44.33 ng/mL)高9.96%，差異顯著(P<0.05)。(4)T4在試驗(yàn)第 1 d以試驗(yàn)1組最高為724.67 ng/mL，各組間差異不顯著(P>0.05)；第30 d以試驗(yàn)1組最高為669.91 ng/mL，與對照組(646.23 ng/mL)差異不顯著(P>0.05)，比試驗(yàn)2組(610.79 ng/mL)高9.68%，差異顯著(P<0.05)；第60 d以試驗(yàn)1組最高為683.85 ng/mL，各組間差異不顯著(P>0.05)。

表4 各組羔羊血清生長激素水平檢測

3 討論

3.1 發(fā)酵菜籽粕對貴州黑山羊羔羊生長性能的影響菜籽粕中硫代葡萄糖甙、單寧和植酸等抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)對畜禽有毒副作用，從而在很大程度上制約了其在飼料中的應(yīng)用[9]。本試驗(yàn)發(fā)酵菜籽粕經(jīng)前期試驗(yàn)檢測，真蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為45.69%，氨基酸含量為331.48 mg/g，多肽得率為18.31%，硫苷含量為10.32 μmol/g，單寧含量為5.61 μg/g；氨基酸含量比發(fā)酵前提高了18.19%，硫苷含量、單寧含量分別比發(fā)酵前降低了54.15%、50.62%，極大改善了菜籽粕的營養(yǎng)價(jià)值和適口性，在一定程度上增加了粗蛋白質(zhì)和氨基酸含量，同時(shí)降低了抗?fàn)I養(yǎng)因子含量，與陳昭琪等[10]的研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)用發(fā)酵菜籽粕等氮替代50%豆粕時(shí)，試驗(yàn)羊平均日增重和日采食量分別為80.21 g和288.88 g，高于對照組的78.13 g和288.80 g；料重比為3.71，低于對照組的3.81，各指標(biāo)均未達(dá)到差異顯著水平。說明發(fā)酵菜籽粕等氮替代50%豆粕能提高貴州黑山羊羔羊日增重，降低料重比，促進(jìn)生長，但是日增重與樊力[11]等用發(fā)酵菜粕飼喂波雜羊(波爾山羊與本地羊雜交)的研究結(jié)果差異較大，原因可能是貴州本地黑山羊羔羊生長性能比不上雜交羊。本試驗(yàn)用發(fā)酵菜籽粕等氮替代100%豆粕時(shí)，日增重和日采食量分別為75.00 g和288.30 g，低于對照組；料重比為4.14，高于對照組。分析原因可能是發(fā)酵菜籽粕中單寧、硫苷等抗?fàn)I養(yǎng)因子未完全脫除，當(dāng)替代比例過大時(shí)對試驗(yàn)羊的生長性能產(chǎn)生一定的副作用，抑制其生長。

3.2 發(fā)酵菜籽粕對貴州黑山羊羔羊腹瀉的影響動物機(jī)體免疫能力和外部環(huán)境共同決定動物的健康狀況。吳明文等[4]添加發(fā)酵菜籽粕飼料與全部添加普通豆粕飼料相比能降低仔豬腹瀉發(fā)生率。有報(bào)道在斷奶仔豬日糧中添加發(fā)酵豆粕，隨著添加比例的增加，斷奶仔豬腸道后段的大腸桿菌數(shù)量明顯減少，乳酸桿菌在仔豬腸道前段顯著增加[12]。本試驗(yàn)所用發(fā)酵菜籽粕經(jīng)前期試驗(yàn)檢測有益活性菌總數(shù)為4.35×107cfu/g，試驗(yàn)組無羊發(fā)生腹瀉，而對照組有1只羊發(fā)生腹瀉，說明發(fā)酵菜籽粕能減少山羊腹瀉發(fā)生。

3.3 發(fā)酵菜籽粕對貴州黑山羊羔羊免疫功能的影響免疫球蛋白水平的高低與動物機(jī)體抵抗力的強(qiáng)弱相關(guān)[13]，而IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，約占血清中免疫球蛋白總含量的75%，是初級免疫應(yīng)答中最持久、最重要的抗體，大多數(shù)抗菌、抗毒和抗病毒體屬于IgG，其在機(jī)體抗感染中起到主力軍的作用[14]。本試驗(yàn)用發(fā)酵菜籽粕等氮替代50%豆粕時(shí)，IgG的含量(2.72 g/L)高于對照組(2.71 g/L)，用發(fā)酵菜籽粕等氮替代100%豆粕時(shí)，IgG的含量(2.64 g/L)低于對照組，但均未達(dá)到差異顯著水平，這與鄧卉等[15]用發(fā)酵菜籽粕等氮替代7.5%豆粕可顯著提高生長豬血清IgG含量報(bào)道不一致，可能是試驗(yàn)動物種類不同或未去除的抗?fàn)I養(yǎng)因子在一定程度上抑制了免疫球蛋白的合成所致。干擾素是維持動物機(jī)體免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的1個(gè)重要組成部分，其中INF-γ主要由活化的T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，在動物先天性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用，能直接反映動物正常狀態(tài)下的免疫狀態(tài)。本試驗(yàn)用發(fā)酵菜籽粕等氮替代50%豆粕時(shí)，INF-γ含量(996.11 pg/mL)高于對照組(989.39 pg/mL)，差異不顯著，而用發(fā)酵菜籽粕等氮替代100%豆粕時(shí)，INF-γ含量(777.52 pg/mL)顯著低于對照組，可能與發(fā)酵菜籽粕中未去除抗?fàn)I養(yǎng)因子有關(guān)。本試驗(yàn)全期貴州黑山羊IgG、INF-γ含量先降低后升高，可能是試驗(yàn)羊介于3～7月齡，且在試驗(yàn)過程中因?yàn)榧竟?jié)、氣候等因素影響了免疫分子的分泌，這與楊華等[16]報(bào)道薩?？搜蛎庖叻肿拥姆置诰哂心曛芷诤蜁円构?jié)律變化的特征相似。

3.4 發(fā)酵菜籽粕對貴州黑山羊羔羊血清激素水平的影響GH有促進(jìn)生長和調(diào)節(jié)代謝的功能，是動物出生后調(diào)節(jié)生長最重要的激素之一，其水平的變化能反映出機(jī)體代謝調(diào)節(jié)狀況。除此之外，動物機(jī)體的生長受到肝臟分泌的胰島素樣生長因子(IGF-1)、甲狀腺分泌的甲狀腺激素(T3、T4)等多種激素的調(diào)控，它們是動物生長軸激素的重要組成激素，能夠參與調(diào)節(jié)糖、脂和蛋白質(zhì)的代謝，對動物的生長發(fā)育發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用。同時(shí)，已有報(bào)道甲狀腺激素在動物生長方面與 GH共同表現(xiàn)出協(xié)同作用[17]。本試驗(yàn)用發(fā)酵菜籽粕等氮替代50%豆粕時(shí)，試驗(yàn)羊的GH、IGF-1、T3、T4含量均較高，其中GH和T4差異不顯著，IGF-1和T3含量達(dá)到顯著水平。分析原因可能是發(fā)酵菜籽粕中產(chǎn)生的多肽促進(jìn)了 GH 的合成，調(diào)節(jié) T3、T4 及IGF-1 的合成與分解，從而增強(qiáng)了動物機(jī)體的消化吸收功能，并促進(jìn)肌肉蛋白質(zhì)沉積，加速了生長發(fā)育。本試驗(yàn)中血清激素水平隨著試驗(yàn)時(shí)間延長先降低后升高，說明發(fā)酵菜籽粕等氮替代日糧中豆粕可調(diào)節(jié)血清水平在一定范圍內(nèi)波動，可能是發(fā)酵菜籽粕中未去除的抗?fàn)I養(yǎng)因子含量影響了甲狀腺活動，但未達(dá)到亢進(jìn)或減弱狀態(tài)，可能是試驗(yàn)羊瘤胃內(nèi)微生物對發(fā)酵菜籽粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子有一定的降解作用，使體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)代謝趨于相對穩(wěn)定。

4 結(jié)論

在“放牧+補(bǔ)飼”的飼養(yǎng)模式下，發(fā)酵菜籽粕以50%的比例等氮替代精料日糧中豆粕飼喂貴州黑山羊羔羊能在一定程度上提高羔羊的平均日增重，降低料重比；增加IgG、INF-γ的含量，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能；提高GH、IGF-1、T3、T4質(zhì)量濃度，促進(jìn)羔羊生長發(fā)育。