孫佳石 劉寶磊

肝纖維化是各種治病因子引起肝內(nèi)結(jié)締組織增生的一種病例生理過程，如不及時(shí)緩解，長期肝纖維化會形成肝硬化，導(dǎo)致肝臟代償功能降低，影響機(jī)體正常代謝[1-2]。臨床上，肝纖維化的治療主要采用抗肝纖維化藥物，其中黃芪及其復(fù)方制劑效果顯著，引起人們的廣泛關(guān)注[3]。黃芪是一種中藥材，應(yīng)用于氣虛乏力、自汗久瀉等癥的治療中，具有保肝利尿、托毒排膿、補(bǔ)氣固表、增強(qiáng)免疫功能等功效，為了改善肝纖維化預(yù)后，了解黃芪作用及其治療機(jī)制具有很大的必要性[4-5]。黃芪多糖是黃芪主要成分之一，據(jù)相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖與肝纖維化程度具有緊密的聯(lián)系[6]。為此，本研究對60只SPF級SD大鼠進(jìn)行動物模型組建，其中12只為正常大鼠，另外48只為四氯化碳（CCL4）誘導(dǎo)肝纖維化大鼠，探究黃芪多糖對肝纖維化的保護(hù)作用，實(shí)施過程如下。

1 材料與方法

1.1 材料

2019年2月我院選取SPF級SD大鼠（廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心）60只，雌雄各半，體質(zhì)量為1.9～2.1 kg不等；黃芪多糖（南京澤朗醫(yī)藥科技集團(tuán)有限公司）；CCL4（天津富宇精細(xì)化工有效公司），檢測儀器為包括全自動生化分析儀。

1.2 動物模型組建

將60只SD大鼠隨機(jī)分為正常組（A組）、模型組（B組）和黃芪多糖低、中、高劑量組（C組、D組、E組）5組各12只，A組正常喂養(yǎng)，B、C、D和E組在正常喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上，腹腔注射濃度為40%的CCL4橄欖油溶液，注射劑量為1 mL/kg，2次/周，連續(xù)注射4周，對其進(jìn)行肝纖四項(xiàng)和肝組織HE染色檢驗(yàn)，顯示建立CCL4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型成功。

1.3 治療方式

對C、D和E組大鼠分別給予劑量為0.2 g/kg、0.4 g/kg、0.8 g/kg黃芪多糖灌胃，1次/d；A組和B組則分別給予等體積的生理鹽水，連續(xù)給藥2周，末次給藥1 h后，對大鼠采用水合氯醛麻醉，收集其腹主動脈血5 mL。

1.4 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)五組大鼠用藥后肝纖維四項(xiàng)有關(guān)數(shù)據(jù)，并給予分析比較。

肝纖維四項(xiàng)：包含III型前膠原（PCIII）、IV型膠原（IVC）、層粘連蛋白（LN）和透明質(zhì)酸酶（HA）；將五組大鼠的血液樣本以3 000 r/min的速度離心，時(shí)間為15 min，取其血清，放置于-20℃下保存，采用全自動生化分析儀檢測肝纖維四項(xiàng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)輸入SPSS 18.0軟件中進(jìn)行分析，肝纖四項(xiàng)（PCIII、IV-C、LN和HA）分別以（s） 、F描述和檢驗(yàn)。P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

A組為正常大鼠的肝纖四項(xiàng)指標(biāo)，B組為CCL4誘導(dǎo)肝纖維化大鼠的肝纖四項(xiàng)指標(biāo)，C、D、E組為CCL4誘導(dǎo)肝纖維化大鼠經(jīng)不同濃度的黃芪多糖治療后肝纖四項(xiàng)指標(biāo)。在本研究結(jié)果中，A組肝纖四項(xiàng)數(shù)據(jù)低于B、C、D及E組，其中D、E組肝纖四項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù)小于B、C組，數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在不同劑量的黃芪多糖治療方面，D、E兩組治療后數(shù)據(jù)差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與其相比，C組肝纖四項(xiàng)指標(biāo)較高，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳細(xì)數(shù)據(jù)見表1所示。

3 討論

肝纖維化是一種生理或病理過程，肝臟損傷時(shí)，其修復(fù)愈合過程中會發(fā)生肝纖維化，如致病因子長期存在，肝內(nèi)結(jié)締組織會發(fā)生異常增生，逐漸發(fā)展為肝硬化，使肝臟功能嚴(yán)重降低[7-8]。據(jù)相關(guān)研究顯示[9]，肝纖維化的形成是由多種因素和通路的調(diào)節(jié)所致，在抗肝纖維化過程中，要在清除其誘因的同時(shí)，需要采用抗肝纖維化藥物進(jìn)行緩解。中醫(yī)上，肝纖維化屬于“痞積”“臌脹”等范疇，在其治療藥物中，黃芪應(yīng)用較多，且效果顯著，其主要作用成分為黃芪多糖[10-11]。黃芪多糖是由葡萄糖、果糖、半乳糖醛酸、糖醛酸、鼠李糖等組成的一種藥物，在臨床上可作為免疫調(diào)節(jié)劑，具有抗病毒、抗腫瘤、保肝、抗氧化等作用[12]，在抗肝纖維化中具有一定的臨床價(jià)值。

在本研究中，對SPF級SD大鼠皮下注射60%CCL4，8周大鼠表現(xiàn)為行動遲緩、精神萎靡、體質(zhì)量降低、毛色發(fā)黃干枯等癥狀，通過肝纖四項(xiàng)等檢查顯示，CCL4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型成功建立，除正常組和對照組，對C、D、E組大鼠給予不同劑量的黃芪多糖，其能夠避免肝糖原減少，對醋氨酚和D-半乳糖胺導(dǎo)致的肝損傷具有緩解作用，其中黃芪苷能夠抗生物氧化，調(diào)節(jié)代謝，能夠有效阻止肝纖維化發(fā)展，以達(dá)到抗肝纖維化作用，進(jìn)而降低肝纖四項(xiàng)水平。經(jīng)本文研究發(fā)現(xiàn)，給藥后D組肝纖四項(xiàng)水平比B、C組低，E組也低于B、C組，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)優(yōu)于（P＜0.05），說明黃芪多糖對CCL4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化具有積極作用，能夠緩解肝纖維化癥狀。在對肝纖維化干預(yù)中，黃芪多糖的劑量要保證充足，否則其作用輕微，不能充分發(fā)揮其護(hù)肝作用；本研究對不同劑量的黃芪多糖進(jìn)行探究，對其分別給予劑量為0.2 g/kg、0.4 g/kg和0.8 g/kg的黃芪多糖進(jìn)行治療，發(fā)現(xiàn)0.2 g/kg的大鼠肝纖四項(xiàng)有所降低，但效果不夠顯著；增加其用藥劑量，發(fā)現(xiàn)0.4 g/kg黃芪多糖對肝纖四項(xiàng)的改善作用較為顯著，增加至0.8 g/kg則對肝纖四項(xiàng)變化不顯著，故C組的肝纖四項(xiàng)指標(biāo)低于D組和E組，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），該結(jié)果在一定程度上對黃芪多糖的應(yīng)用劑量提供有效的參考依據(jù)。除此之外，本研究未對黃芪多糖的安全性進(jìn)行探討，藥物通常會具有一定的輔作用，因此，需要對其用藥劑量進(jìn)行控制，避免劑量過高對其無法充分代謝，產(chǎn)生嚴(yán)重不良反應(yīng)，故黃芪多糖的應(yīng)用劑量以0.4 g/kg為宜。

表1 觀察指標(biāo)數(shù)據(jù)的對比分析（ng/mL）

表1 觀察指標(biāo)數(shù)據(jù)的對比分析（ng/mL）

綜上所述，足量（0.4 g/kg）的黃芪多糖能夠降低大鼠肝纖維化，對其肝纖維化癥狀緩解具有積極作用，以達(dá)到護(hù)肝的效果，該藥物在抗肝纖維化治療中具有臨床價(jià)值。