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        豬附紅細(xì)胞體病實驗室診斷

        2019-10-21 06:42:21張志慶
        畜牧獸醫(yī)科學(xué) 2019年14期
        關(guān)鍵詞:體病涂片紅細(xì)胞

        張志慶

        摘要:依照山東省菏澤市牡丹區(qū)某養(yǎng)殖場生豬養(yǎng)殖現(xiàn)狀,整合養(yǎng)殖場豬群發(fā)病死亡的主要原因,通過無菌采集方式獲取發(fā)病豬血液作為檢驗病料,應(yīng)用血涂片、細(xì)菌分離培養(yǎng)、病毒核酸檢驗等方式進(jìn)行實驗室應(yīng)用診斷。從結(jié)果中獲取結(jié)論,其中細(xì)菌分離培養(yǎng)以及病毒核酸檢驗結(jié)果大多都表現(xiàn)為陰性,通過血涂片操作顯示出大多數(shù)紅細(xì)胞邊緣整齊度較差,存有不同不規(guī)則形狀,能適應(yīng)紅細(xì)胞體基本感染特征,其養(yǎng)殖場此例豬群發(fā)病重要原因是附紅細(xì)胞體感染。

        關(guān)鍵詞:豬;附紅細(xì)胞體病;實驗室診斷

        中圖分類號:S858.28? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B???? doi:10.3969/j.issn.2096-3637.2019.14.052

        0引言

        附紅細(xì)胞體病主要是由附紅細(xì)胞體誘發(fā)疾病,主要表現(xiàn)為發(fā)熱、溶血性貧血、黃疸等人畜共患傳染病,該病病原體屬于支原體科,此病大多發(fā)生在夏秋時節(jié),容易產(chǎn)生流行性,加上病害寄主范圍較廣,在目前多種動物養(yǎng)殖中都會產(chǎn)生。

        1實驗室診斷材料與方法

        在檢測病科中主要通過無菌采集方式獲取5頭病豬血液,在試劑選用中主要是應(yīng)用革蘭氏染色液、RNA快速抽提試劑盒、基因組DNA提取試劑盒。豬圓環(huán)病毒2型、繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、乙型腦炎病毒等。在細(xì)菌分離培養(yǎng)中,在潔凈度較高的工作臺中,通過滅菌接種環(huán)提取相應(yīng)的抽檢血液樣本,將其在鮮血以及常見的瓊脂培養(yǎng)基中均勻性涂抹,成功接種后在培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)箱環(huán)境中倒置培養(yǎng)16?24 h,實驗人員要對菌落具體變化現(xiàn)狀進(jìn)行分析。在病毒核酸提取中,通過RNA抽提試劑盒對總RNA快速提取。之后做好cDNA以及PCR擴(kuò)增操作,對PCR產(chǎn)物凝膠電泳現(xiàn)狀進(jìn)行分析,在1.2%瓊脂糖凝膠上將獲取的PCR進(jìn)行電泳,再將凝膠塊能放人到凝膠成像儀器中,對其結(jié)果進(jìn)行分析。在血涂片檢查中,要應(yīng)用革蘭氏染色鏡進(jìn)行檢驗,對血涂片革蘭氏進(jìn)行染色操作,實驗人員要通過顯微鏡進(jìn)行觀察檢查。在姬姆薩染色鏡檢操作中,選取常用方法對血涂片進(jìn)行合理制備,等到血膜全部干后,應(yīng)用甲醇進(jìn)行固定。在染色架中放置血涂片,及時滴加稀釋成功的姬姆薩染色液,使其能在完整的血膜中進(jìn)行覆蓋,在正常室溫狀態(tài)下將其染色15?30 min。實驗人員選取適量蒸餾水從玻片端進(jìn)行沖洗,玻片風(fēng)干后及時進(jìn)行鏡檢[1]。

        2結(jié)果與分析

        對患有紅細(xì)胞體病的病死豬進(jìn)行剖檢能得出,生豬脂肪層、內(nèi)臟器官等處都受到不同程度感染,泛發(fā)性黃疸表現(xiàn)突出。生豬全身肌肉群開始變色黯淡,血液大多都是表現(xiàn)為水樣狀態(tài),凝固性較差。全身淋巴結(jié)腫大問題較為嚴(yán)重,切面呈現(xiàn)出外翻現(xiàn)象,潮紅突出,有諸多液體滲出。肝臟腫大問題嚴(yán)重,質(zhì)地脆弱,細(xì)胞大多是表現(xiàn)為脂肪變性問題,主要是為黃棕色以及土黃色。膽囊腫大突出,并且膽汁濃稠度較高,脾臟位置腫大明顯,質(zhì)地脆弱。在膀胱粘膜中布有不同程度血點,心肌松軟蒼白,腦部位置存有嚴(yán)重積液問題。

        將鮮血營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基與普通瓊脂培養(yǎng)基通過接種血液后,37℃環(huán)境中通過16 h培養(yǎng),并未能發(fā)現(xiàn)菌落存在生長現(xiàn)狀。在病毒核算檢驗中,選取各類特異引物對核酸樣本采取PCR擴(kuò)增措施,將獲取的產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳,未能出現(xiàn)預(yù)期擴(kuò)增條帶,各個病毒在檢測過程中主要表現(xiàn)為陰性。在血涂片檢查結(jié)果分析中能得出,技術(shù)人員對血涂片革蘭氏染色鏡檢并未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌存在。從姬姆薩染色鏡檢現(xiàn)狀中能得出,在可見范圍內(nèi)諸多紅細(xì)胞開始發(fā)生明顯變形問題,其原有的光滑形態(tài)開始逐步喪失,邊緣處平整度較差,開始展示出層次不齊的不規(guī)則形狀。在紅細(xì)胞表層中大量附著的病原體會被染成不規(guī)則性顆粒,技術(shù)人員基于油鏡進(jìn)行觀察,其外部不規(guī)則現(xiàn)象突出,中間位置明亮度較高,將其判定為附紅細(xì)胞體。

        在試驗開展中主要對5個發(fā)病豬血液樣本進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)操作,對血涂片進(jìn)行全面檢查,做好病毒核酸規(guī)范化檢測,對附紅細(xì)胞體感染問題進(jìn)行確診。附紅細(xì)胞體屬于嗜血支原體科,該病一年四季在生豬養(yǎng)殖中均會發(fā)生,其中夏秋季節(jié)高發(fā),可以基于垂直以及水平方式進(jìn)行傳播,大量昆蟲等會對此類病害進(jìn)行傳播。在生豬長期養(yǎng)殖中養(yǎng)殖環(huán)境較差,管理措施不合理,養(yǎng)殖環(huán)境溫度變化較快等都會導(dǎo)致病情全面擴(kuò)大,帶來較為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前針對附紅細(xì)胞體病在診斷中可選取的診斷應(yīng)用措施較多,如應(yīng)用較多的血涂片檢查診斷方式,但是此類方式僅是作為實驗輔助性方式,因為其會產(chǎn)生假陽性結(jié)果,誘發(fā)誤判問題。在實驗診斷中應(yīng)用速率較快的是酶聯(lián)免疫吸附試驗,但是此類方法在具體應(yīng)用中受到檢測抗原純度影響會產(chǎn)生諸多假陰性結(jié)果,目前都是在各類流行病學(xué)檢查中應(yīng)用。在診斷方法應(yīng)用中分子生物學(xué)診斷技術(shù)應(yīng)用重要性較強(qiáng),在臨床中應(yīng)用較多的是PCR技術(shù),其敏感性與特異性突出。雖然針對此類疾病可以選取多種診斷方式,但是由于生豬患病后各項表現(xiàn)不明顯,對疾病診斷工作開展具有較大限制作用[2]。

        3預(yù)防與治療措施

        在生豬現(xiàn)代化規(guī)模養(yǎng)殖中要對養(yǎng)殖飼養(yǎng)各個環(huán)節(jié)進(jìn)行規(guī)范化管理,在養(yǎng)殖活動中投入充足高營養(yǎng)含量的全價飼料,確保豬群能健康生長。要對養(yǎng)殖環(huán)境溫度情況進(jìn)行控制,做好養(yǎng)殖區(qū)域通風(fēng)以及溫度控制工作。對飼養(yǎng)中存有的各類應(yīng)激因素進(jìn)行控制。在豬附紅細(xì)胞體病高發(fā)階段,要及時采取針對性措施對吸血昆蟲進(jìn)行殺滅。技術(shù)人員要定期對針頭、注射器等進(jìn)行全面消毒處理,在疫苗接種及治療注射中,1頭生豬使用1個針頭[3]。在母豬接產(chǎn)中要及時選取針對性消毒控制措施。養(yǎng)殖中技術(shù)人員要強(qiáng)化養(yǎng)殖環(huán)境消毒處理,定期對豬舍環(huán)境進(jìn)行清理,對生豬排泄物進(jìn)行清除,做好衛(wèi)生消毒工作與驅(qū)動管理操作。最大程度降低生豬養(yǎng)殖中病害發(fā)生幾率。在日常投喂飼料中補(bǔ)充適量金霉素、四環(huán)素、土霉素、阿散酸等,對豬附紅細(xì)胞體病具有良好預(yù)防應(yīng)用成效。

        如在每噸飼料中要補(bǔ)充48 g金霉素或是在每升飲水中添加50 mg金霉素,連續(xù)應(yīng)用1周時間,能對豬附紅細(xì)胞體病發(fā)生情況進(jìn)行控制。在母豬分娩前要依照其體重大小,以11 mg/kg體重為標(biāo)準(zhǔn)注射土霉素,能有效防控母豬發(fā)病,針對1日齡仔豬每頭注射50 mg土霉素,能對仔豬發(fā)病情況進(jìn)行控制。在藥物防治過程中,針對每千克體重通過靜脈注射10?15 mg新胂凡納明,再應(yīng)用相同方式注射葡萄糖注射液與維生素C,連續(xù)注射3d。在每噸飼料中投入600?800 g土霉素,設(shè)定2?3個療程,相關(guān)技術(shù)人員依照3 mg/kg體重注射相應(yīng)的四環(huán)素。對于患病仔豬,在治療中應(yīng)用磺胺-5-甲氧嘧啶注射液進(jìn)行肌肉注射,連續(xù)施加1次,連續(xù)應(yīng)用3d。在豬附紅細(xì)胞體病患病初期,可應(yīng)用三氮脒進(jìn)行防治,但是針對于病重豬效果不佳。生豬每千克體重注入5?7 g三氮脒,通過深度肌肉注射,間隔48 h注射1次。在阿散酸施加中,每噸飼料投入180 g,連續(xù)施加1周。

        4結(jié)束語

        通過一例豬附紅細(xì)胞體病的實驗室診斷得出,該類疾病在診斷中可應(yīng)用的方法較多。要結(jié)合一例豬附紅細(xì)胞體病發(fā)病具體現(xiàn)狀采取針對性預(yù)防控制措施,降低豬附紅細(xì)胞體病發(fā)病幾率,提升豬養(yǎng)殖成效。

        參考文獻(xiàn)

        [1]張喜懿,溫貴蘭,張升波,等.一例豬附紅細(xì)胞體病的實驗室診斷[J].貴州畜牧獸醫(yī),2019,43(2):27-30.

        [2]鄢長慶,楊明.一例豬附紅細(xì)胞體病的診斷與治療[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2018(7):96-97.

        [3]張垂調(diào).一例豬附紅細(xì)胞體病的診治[J].福建畜牧獸醫(yī),2016(1):43.

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