張志慶

摘要：依照山東省菏澤市牡丹區(qū)某養(yǎng)殖場(chǎng)生豬養(yǎng)殖現(xiàn)狀，整合養(yǎng)殖場(chǎng)豬群發(fā)病死亡的主要原因，通過(guò)無(wú)菌采集方式獲取發(fā)病豬血液作為檢驗(yàn)病料，應(yīng)用血涂片、細(xì)菌分離培養(yǎng)、病毒核酸檢驗(yàn)等方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用診斷。從結(jié)果中獲取結(jié)論，其中細(xì)菌分離培養(yǎng)以及病毒核酸檢驗(yàn)結(jié)果大多都表現(xiàn)為陰性，通過(guò)血涂片操作顯示出大多數(shù)紅細(xì)胞邊緣整齊度較差，存有不同不規(guī)則形狀，能適應(yīng)紅細(xì)胞體基本感染特征，其養(yǎng)殖場(chǎng)此例豬群發(fā)病重要原因是附紅細(xì)胞體感染。

關(guān)鍵詞：豬;附紅細(xì)胞體病;實(shí)驗(yàn)室診斷

中圖分類(lèi)號(hào)：S858.28? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B???? doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.14.052

0引言

附紅細(xì)胞體病主要是由附紅細(xì)胞體誘發(fā)疾病，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、溶血性貧血、黃疸等人畜共患傳染病，該病病原體屬于支原體科，此病大多發(fā)生在夏秋時(shí)節(jié)，容易產(chǎn)生流行性，加上病害寄主范圍較廣，在目前多種動(dòng)物養(yǎng)殖中都會(huì)產(chǎn)生。

1實(shí)驗(yàn)室診斷材料與方法

在檢測(cè)病科中主要通過(guò)無(wú)菌采集方式獲取5頭病豬血液，在試劑選用中主要是應(yīng)用革蘭氏染色液、RNA快速抽提試劑盒、基因組DNA提取試劑盒。豬圓環(huán)病毒2型、繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、乙型腦炎病毒等。在細(xì)菌分離培養(yǎng)中，在潔凈度較高的工作臺(tái)中，通過(guò)滅菌接種環(huán)提取相應(yīng)的抽檢血液樣本，將其在鮮血以及常見(jiàn)的瓊脂培養(yǎng)基中均勻性涂抹，成功接種后在培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)箱環(huán)境中倒置培養(yǎng)16?24 h，實(shí)驗(yàn)人員要對(duì)菌落具體變化現(xiàn)狀進(jìn)行分析。在病毒核酸提取中，通過(guò)RNA抽提試劑盒對(duì)總RNA快速提取。之后做好cDNA以及PCR擴(kuò)增操作，對(duì)PCR產(chǎn)物凝膠電泳現(xiàn)狀進(jìn)行分析，在1.2%瓊脂糖凝膠上將獲取的PCR進(jìn)行電泳，再將凝膠塊能放人到凝膠成像儀器中，對(duì)其結(jié)果進(jìn)行分析。在血涂片檢查中，要應(yīng)用革蘭氏染色鏡進(jìn)行檢驗(yàn)，對(duì)血涂片革蘭氏進(jìn)行染色操作，實(shí)驗(yàn)人員要通過(guò)顯微鏡進(jìn)行觀察檢查。在姬姆薩染色鏡檢操作中，選取常用方法對(duì)血涂片進(jìn)行合理制備，等到血膜全部干后，應(yīng)用甲醇進(jìn)行固定。在染色架中放置血涂片，及時(shí)滴加稀釋成功的姬姆薩染色液，使其能在完整的血膜中進(jìn)行覆蓋，在正常室溫狀態(tài)下將其染色15?30 min。實(shí)驗(yàn)人員選取適量蒸餾水從玻片端進(jìn)行沖洗，玻片風(fēng)干后及時(shí)進(jìn)行鏡檢^[1]。

2結(jié)果與分析

對(duì)患有紅細(xì)胞體病的病死豬進(jìn)行剖檢能得出，生豬脂肪層、內(nèi)臟器官等處都受到不同程度感染，泛發(fā)性黃疸表現(xiàn)突出。生豬全身肌肉群開(kāi)始變色黯淡，血液大多都是表現(xiàn)為水樣狀態(tài)，凝固性較差。全身淋巴結(jié)腫大問(wèn)題較為嚴(yán)重，切面呈現(xiàn)出外翻現(xiàn)象，潮紅突出，有諸多液體滲出。肝臟腫大問(wèn)題嚴(yán)重，質(zhì)地脆弱，細(xì)胞大多是表現(xiàn)為脂肪變性問(wèn)題，主要是為黃棕色以及土黃色。膽囊腫大突出，并且膽汁濃稠度較高，脾臟位置腫大明顯，質(zhì)地脆弱。在膀胱粘膜中布有不同程度血點(diǎn)，心肌松軟蒼白，腦部位置存有嚴(yán)重積液?jiǎn)栴}。

將鮮血營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基與普通瓊脂培養(yǎng)基通過(guò)接種血液后，37℃環(huán)境中通過(guò)16 h培養(yǎng)，并未能發(fā)現(xiàn)菌落存在生長(zhǎng)現(xiàn)狀。在病毒核算檢驗(yàn)中，選取各類(lèi)特異引物對(duì)核酸樣本采取PCR擴(kuò)增措施，將獲取的產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，未能出現(xiàn)預(yù)期擴(kuò)增條帶，各個(gè)病毒在檢測(cè)過(guò)程中主要表現(xiàn)為陰性。在血涂片檢查結(jié)果分析中能得出，技術(shù)人員對(duì)血涂片革蘭氏染色鏡檢并未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌存在。從姬姆薩染色鏡檢現(xiàn)狀中能得出，在可見(jiàn)范圍內(nèi)諸多紅細(xì)胞開(kāi)始發(fā)生明顯變形問(wèn)題，其原有的光滑形態(tài)開(kāi)始逐步喪失，邊緣處平整度較差，開(kāi)始展示出層次不齊的不規(guī)則形狀。在紅細(xì)胞表層中大量附著的病原體會(huì)被染成不規(guī)則性顆粒，技術(shù)人員基于油鏡進(jìn)行觀察，其外部不規(guī)則現(xiàn)象突出，中間位置明亮度較高，將其判定為附紅細(xì)胞體。

在試驗(yàn)開(kāi)展中主要對(duì)5個(gè)發(fā)病豬血液樣本進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)操作，對(duì)血涂片進(jìn)行全面檢查，做好病毒核酸規(guī)范化檢測(cè)，對(duì)附紅細(xì)胞體感染問(wèn)題進(jìn)行確診。附紅細(xì)胞體屬于嗜血支原體科，該病一年四季在生豬養(yǎng)殖中均會(huì)發(fā)生，其中夏秋季節(jié)高發(fā)，可以基于垂直以及水平方式進(jìn)行傳播，大量昆蟲(chóng)等會(huì)對(duì)此類(lèi)病害進(jìn)行傳播。在生豬長(zhǎng)期養(yǎng)殖中養(yǎng)殖環(huán)境較差，管理措施不合理，養(yǎng)殖環(huán)境溫度變化較快等都會(huì)導(dǎo)致病情全面擴(kuò)大，帶來(lái)較為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前針對(duì)附紅細(xì)胞體病在診斷中可選取的診斷應(yīng)用措施較多，如應(yīng)用較多的血涂片檢查診斷方式，但是此類(lèi)方式僅是作為實(shí)驗(yàn)輔助性方式，因?yàn)槠鋾?huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果，誘發(fā)誤判問(wèn)題。在實(shí)驗(yàn)診斷中應(yīng)用速率較快的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，但是此類(lèi)方法在具體應(yīng)用中受到檢測(cè)抗原純度影響會(huì)產(chǎn)生諸多假陰性結(jié)果，目前都是在各類(lèi)流行病學(xué)檢查中應(yīng)用。在診斷方法應(yīng)用中分子生物學(xué)診斷技術(shù)應(yīng)用重要性較強(qiáng)，在臨床中應(yīng)用較多的是PCR技術(shù)，其敏感性與特異性突出。雖然針對(duì)此類(lèi)疾病可以選取多種診斷方式，但是由于生豬患病后各項(xiàng)表現(xiàn)不明顯，對(duì)疾病診斷工作開(kāi)展具有較大限制作用^[2]。

3預(yù)防與治療措施

在生豬現(xiàn)代化規(guī)模養(yǎng)殖中要對(duì)養(yǎng)殖飼養(yǎng)各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行規(guī)范化管理，在養(yǎng)殖活動(dòng)中投入充足高營(yíng)養(yǎng)含量的全價(jià)飼料，確保豬群能健康生長(zhǎng)。要對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境溫度情況進(jìn)行控制，做好養(yǎng)殖區(qū)域通風(fēng)以及溫度控制工作。對(duì)飼養(yǎng)中存有的各類(lèi)應(yīng)激因素進(jìn)行控制。在豬附紅細(xì)胞體病高發(fā)階段，要及時(shí)采取針對(duì)性措施對(duì)吸血昆蟲(chóng)進(jìn)行殺滅。技術(shù)人員要定期對(duì)針頭、注射器等進(jìn)行全面消毒處理，在疫苗接種及治療注射中，1頭生豬使用1個(gè)針頭^[3]。在母豬接產(chǎn)中要及時(shí)選取針對(duì)性消毒控制措施。養(yǎng)殖中技術(shù)人員要強(qiáng)化養(yǎng)殖環(huán)境消毒處理，定期對(duì)豬舍環(huán)境進(jìn)行清理，對(duì)生豬排泄物進(jìn)行清除，做好衛(wèi)生消毒工作與驅(qū)動(dòng)管理操作。最大程度降低生豬養(yǎng)殖中病害發(fā)生幾率。在日常投喂飼料中補(bǔ)充適量金霉素、四環(huán)素、土霉素、阿散酸等，對(duì)豬附紅細(xì)胞體病具有良好預(yù)防應(yīng)用成效。

如在每噸飼料中要補(bǔ)充48 g金霉素或是在每升飲水中添加50 mg金霉素，連續(xù)應(yīng)用1周時(shí)間，能對(duì)豬附紅細(xì)胞體病發(fā)生情況進(jìn)行控制。在母豬分娩前要依照其體重大小，以11 mg/kg體重為標(biāo)準(zhǔn)注射土霉素，能有效防控母豬發(fā)病，針對(duì)1日齡仔豬每頭注射50 mg土霉素，能對(duì)仔豬發(fā)病情況進(jìn)行控制。在藥物防治過(guò)程中，針對(duì)每千克體重通過(guò)靜脈注射10?15 mg新胂凡納明，再應(yīng)用相同方式注射葡萄糖注射液與維生素C，連續(xù)注射3d。在每噸飼料中投入600?800 g土霉素，設(shè)定2?3個(gè)療程，相關(guān)技術(shù)人員依照3 mg/kg體重注射相應(yīng)的四環(huán)素。對(duì)于患病仔豬，在治療中應(yīng)用磺胺-5-甲氧嘧啶注射液進(jìn)行肌肉注射，連續(xù)施加1次，連續(xù)應(yīng)用3d。在豬附紅細(xì)胞體病患病初期，可應(yīng)用三氮脒進(jìn)行防治，但是針對(duì)于病重豬效果不佳。生豬每千克體重注入5?7 g三氮脒，通過(guò)深度肌肉注射，間隔48 h注射1次。在阿散酸施加中，每噸飼料投入180 g，連續(xù)施加1周。

4結(jié)束語(yǔ)

通過(guò)一例豬附紅細(xì)胞體病的實(shí)驗(yàn)室診斷得出，該類(lèi)疾病在診斷中可應(yīng)用的方法較多。要結(jié)合一例豬附紅細(xì)胞體病發(fā)病具體現(xiàn)狀采取針對(duì)性預(yù)防控制措施，降低豬附紅細(xì)胞體病發(fā)病幾率，提升豬養(yǎng)殖成效。

參考文獻(xiàn)

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