王淑芳，何金桂*

（甘肅省天?？h動物疫病預(yù)防控制中心，733299）

甘肅省是包蟲病重發(fā)區(qū)，天?？h是甘肅省包蟲病流行一類區(qū)，從2018年全縣實行羔羊包蟲病強制免疫，為了準(zhǔn)確掌握免疫效果，我們用羊棘球蚴(包蟲)病基因工程亞單位疫苗對試驗羊進(jìn)行了一免、二免疫兩種不同程序的免疫，然后用間接ELISA法檢測不同時期的血清抗體水平，分析抗體峰值高峰期，持續(xù)期和消失期，以找出合理有效的免疫程序。

1 材料與方法

1.1 疫苗和檢測試劑羊棘球蚴(包蟲)病基因工程亞單位疫苗，生產(chǎn)廠家：重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)，疫苗批號：20180304；羊棘球蚴(包蟲)ELISA抗體檢測試劑盒，生產(chǎn)廠家：重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：20180915。

1.2 試驗動物天?？h華藏寺鎮(zhèn)韭菜溝村屬于半農(nóng)半牧區(qū)，羊包蟲感染率低于純牧區(qū)，我們選擇2月齡以上臨床檢查健康，經(jīng)包蟲病感染抗體（羊棘球蚴（包蟲）病間接ELISA檢測試劑盒）檢測呈陰性的綿羊40只。

1.3 試驗分組4月份選擇華藏寺鎮(zhèn)韭菜溝村兩家養(yǎng)殖戶各取20只健康羔羊，分別為實驗1組和實驗2組。

1.4 試驗方法實驗1、2組羊只均在頸部皮下注射1mL(1頭份)羊包蟲疫苗，疫苗用無菌生理鹽水稀釋，并觀察動物反應(yīng)。實驗2組在1免后30天再次免疫，分別在末次免疫后第30、60、90、180天采集血樣，制備血清樣品160份。

1.5 抗體檢測方法用間接ELISA法檢測血清中抗羊棘球蚴（包蟲）主要保護(hù)性抗原EG95蛋白的抗體。操作方法參見ELISA試劑盒說明書。

1.5.1 試驗結(jié)果同時滿足下列條件，方為有效：標(biāo)準(zhǔn)陽性對照孔平均OD450≥0.6；標(biāo)準(zhǔn)陰性對照孔平均OD450≤0.3.

1.5.2 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品OD450≤0.3，判為細(xì)粒棘球蚴抗體陰性，樣品對細(xì)粒棘球蚴感染無保護(hù)力；樣品OD450＞0.3，判為抗體陽性。樣品OD450介于0.3與0.6之間，判為保護(hù)力低下，對細(xì)粒棘球蚴感染有一定保護(hù)力；樣品OD450≥0.6，判為有保護(hù)力，抗體水平較高，在攻毒實驗中可提供高于90%的抵抗力。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測結(jié)果時間跨度7個月，實驗1、2組抗體檢測結(jié)果份陰性、陽性。陽性樣品又分保護(hù)力低下和有保護(hù)力。結(jié)果見表1、表2、圖1、圖2：

表1 實驗1（一免）組抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計單位：頭份、%

表2 實驗2（二免）組抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計單位：頭份、%

3 分析與討論

3.1 兩組抗體水平消長分析：從表1、2、圖1可看出，一免后30天采樣檢測陽性率為90%，二免后為100%，此后2個月二免組陽性率一直保持在100%，一免組的陽性率逐漸下降，分別是75%、65%，第90天已經(jīng)低于農(nóng)業(yè)部要求的70%標(biāo)準(zhǔn)，第180天時兩組的抗體分別為53%、90%?？煽闯?免后免疫抗體半年內(nèi)始終保持高水平，高于標(biāo)準(zhǔn)，而一免在第60天以后就達(dá)不到要求標(biāo)準(zhǔn)，所以說一免后有效免疫期為2-3個月，二免有效期在半年以上。

3.2 有保護(hù)力陽性率對比：1組的有保護(hù)力樣品從第30天開始就低于第2組，雖然2組的抗體消長都成下降狀態(tài)，但第2組始終高于第一組；第1組在第90天時高水平陽性樣品已經(jīng)成0，第2組在第180天時維持在45%，對包蟲病感染有較強的抵抗力?？梢姸庑Ч黠@高于第1組一免效果。

3.3 從實驗結(jié)果看，羊棘球蚴(包蟲)病基因工程亞單位疫苗對綿羊的棘球蚴感染具有較好的保護(hù)作用，尤其是二免后抗體水平較高，持續(xù)時間較長，有效保護(hù)力在6個月以上，并且有保護(hù)力的抗體在45%以上，能有效抵抗棘球蚴的攻擊。

3.4 該疫苗是基因工程亞單位疫苗，具有質(zhì)量穩(wěn)定、生物安全性好，免疫效果好的特點。生產(chǎn)過程中又加入了免疫佐劑，對疫苗有免疫增強作用。此次檢測結(jié)果也說明疫苗使機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答水平較高，免疫效果較好。

3.5 研發(fā)同類型疫苗者建議的免疫程序是：出生羔羊初次免疫2次，中間間隔1個月（或4周）時間，其后每年加強免疫一次，就能取得十分理想的免疫保護(hù)效果。張壯志[1]等做了科學(xué)研究和調(diào)查，證明按照此程序免疫抗體一年來抗體下降幅度慢，年末扔可保持在86%以上。

3.6 據(jù)統(tǒng)計2018年天祝縣屠宰羊臟器包蟲病感染率為6.86%，比2017年的8.73%下降1.87個百分點，每年感染率呈下降趨勢，但綿羊包蟲病仍然危害著人類健康和牲畜生長，做好犬類驅(qū)蟲、檢疫、無害化處理以及羔羊的免疫等多項工作并舉是防控的關(guān)鍵，尤其是羔羊的免疫工作很重要，建議在生產(chǎn)實際中采取一免后一月再作二次免疫作為基礎(chǔ)免疫，以后每年免疫一次的免疫程序，使抗體水平始終維持在較高水平，有效抵抗棘球蚴的攻擊、感染。