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        miR-21與子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)性研究

        2019-10-16 23:28:04河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院471003韓振坤王曉宏
        首都食品與醫(yī)藥 2019年7期
        關(guān)鍵詞:耐藥水平

        河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院(471003)韓振坤 王曉宏

        探尋子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制,明確其治療靶標(biāo),是提高子宮內(nèi)膜癌治療效果的根本途徑。miRNAs的表達(dá)或功能異??赡苁菒盒阅[瘤發(fā)生的主要誘因。miR-21是一種新發(fā)現(xiàn)的miRNA。既往研究表明,miR-21在胃癌、腎癌、肺癌等多種惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)態(tài)勢(shì),并發(fā)揮類(lèi)似促癌基因的作用。但miR-21在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及其臨床意義尚未完全明確。本研究旨在探討子宮內(nèi)膜癌組織中miR-21表達(dá)水平變化,并分析其與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系,以期為子宮內(nèi)膜癌的臨床診療提供依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 組織樣本 50例子宮內(nèi)膜癌組織樣本由河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供(2014年10月~2017年10月所收治子宮內(nèi)膜癌病例)?;颊吣挲g25~68歲,平均年齡(53.8±10.4)歲;所有樣本均經(jīng)病理證實(shí)為原發(fā)性子宮內(nèi)膜癌,術(shù)前均未接受放化療,且病理資料完整。同時(shí)取對(duì)應(yīng)癌旁組織(距癌組織邊緣≥1cm),并經(jīng)病理證實(shí)為正常子宮內(nèi)膜組織。

        1.2 試劑與設(shè)備 RT-PCR儀(美國(guó)Bio-Rad);逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、RT-PCR試劑盒(美國(guó)Promega公司);TRIzol試劑(美國(guó)Invitrogen公司);miR-21、U6引物由上海生工生物工程有限公合成。

        1.3 總RNA提取 取2mm3組織樣本制備組織勻漿,按TRIzol試劑盒說(shuō)明書(shū)提取組織中總RNA,DEPC水溶解,取1μLRNA經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA完整性,采用Bio-Rad檢測(cè)RNA純度及濃度。

        1.4 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。

        1.5 PCR擴(kuò)增 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。

        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 SPSS20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示,組間比較用t檢驗(yàn),P<0.05為差異顯著。

        2 結(jié)果

        2.1 子宮內(nèi)膜癌組織與正常子宮內(nèi)膜組織miR-21表達(dá)水平比較 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,子宮內(nèi)膜癌組織中miR-21表達(dá)水平顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織(2.38±0.31 vs 0.65±0.11)(t=5.823,P<0.05),見(jiàn)附圖。

        2.2 子宮內(nèi)膜癌組織miR-21表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系 miR-21表達(dá)水平與FIGO分期及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05),miR-21表達(dá)水平與年齡、絕經(jīng)、病理類(lèi)型及分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)(見(jiàn)附表)。

        3 討論

        既往認(rèn)為,子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與長(zhǎng)期雌激素刺激有關(guān)。但之后人們發(fā)現(xiàn),并非所有類(lèi)型的子宮內(nèi)膜癌都是激素依賴型的。進(jìn)一步明確子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制,對(duì)于子宮內(nèi)膜臨床診療具有積極的指導(dǎo)意義[1]。miRNA屬于高度保守的非編碼小分子單鏈RNA,并廣泛存在于真核生物中,調(diào)控著約30%的人類(lèi)基因。正常生理狀態(tài)下,機(jī)體內(nèi)miRNA表達(dá)遵守嚴(yán)格的組織、時(shí)序特異性;但在腫瘤環(huán)境下,甲基化、基因組丟失或擴(kuò)增等均可導(dǎo)致miRNA表達(dá)異常[2]。Zhai等[3]研究顯示,子宮內(nèi)膜癌組織中miR-205表達(dá)顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織(P<0.05);且miR-205表達(dá)與臨床預(yù)后密切相關(guān),miR-205表達(dá)越高者生存期越短。周飛梅等[4]研究發(fā)現(xiàn),相較于正常子宮內(nèi)膜組織,子宮內(nèi)膜癌組織中miR-101表達(dá)顯著降低,且miR-101表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌臨床分期、分化程度及肌層浸潤(rùn)深度有關(guān)(P<0.05)。上述研究提示,miRNAs參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與發(fā)展。因此,深入研究miRNAs與子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)性有利于進(jìn)一步明確子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制。

        附圖 子宮內(nèi)膜癌組織及正常子宮內(nèi)膜組織中miR-21表達(dá)水平比較。注:與正常子宮內(nèi)膜組織比較,**P<0.05。

        附表 子宮內(nèi)膜癌組織miR-21表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系分析(±s)

        附表 子宮內(nèi)膜癌組織miR-21表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系分析(±s)

        病理特征 例數(shù) miR-21相對(duì)表達(dá)量 t P絕經(jīng) 是 18 2.41±0.35 0.042 0.985否 32 2.36±0.47年齡 ≥40 26 2.48±0.58 0.194 0.846<40 24 2.34±0.29病理類(lèi)型子宮內(nèi)膜樣腺癌 35 2.55±0.63 1.782 0.092非子宮內(nèi)膜樣腺癌 15 2.32±0.76 FIGO分期中分化 20 2.36±0.33低分化 13 2.39±0.54淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移I~I(xiàn)I 21 2.08±0.55 3.251 0.034 III~I(xiàn)V 29 2.89±0.43分化程度高分化 17 2.47±0.27 0.391 0.071是 12 2.78±0.25 3.178 0.041否 38 2.21±0.30

        miR-21是公認(rèn)的促癌基因,其定位于人類(lèi)17q23.2染色體FRA17B脆性區(qū)域上,而17q染色體區(qū)域的擴(kuò)增可誘發(fā)多種惡性腫瘤。故認(rèn)為,以17q染色體區(qū)域擴(kuò)增為主的表觀遺傳調(diào)控是導(dǎo)致miR-21表達(dá)上調(diào)的主要因素。轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒simiR-21至結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29,可沉默細(xì)胞中miR-21表達(dá),同時(shí)抑制細(xì)胞增殖、遷移及浸潤(rùn)能力,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能與靶向程序性細(xì)胞死亡因子4(programmed cell death factor 4,PDCD4)有關(guān)。

        食管癌組織中miR-21表達(dá)顯著高于癌旁上皮組織(P<0.05),利用siRNA技術(shù)抑制食管癌EC109細(xì)胞中miR-21表達(dá)可顯著降低細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力,同時(shí)顯著提高細(xì)胞肌球家族蛋白1(tropomyosin 1,TPM1)表達(dá),提示miR-21可能通過(guò)靶向TPM1表達(dá)介導(dǎo)食管癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。沉默卵巢上皮性癌順鉑耐藥細(xì)胞中miR-21表達(dá),可抑制PTEN/PI3K/Akt信號(hào)通路激活,減輕卵巢上皮性癌順鉑耐藥細(xì)胞的抗凋亡能力,并提高卵巢上皮性癌順鉑耐藥細(xì)胞對(duì)順鉑化療的敏感性,提示miR-21過(guò)表達(dá)可能是導(dǎo)致卵巢癌順鉑耐藥的主要分子機(jī)制。上述研究提示,miR-21在多種惡性腫瘤的進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮著與促癌基因相似的作用。但其在子宮內(nèi)膜癌進(jìn)展中的作用尚不明確。

        本研究結(jié)果顯示,子宮內(nèi)膜癌組織中miR-21表達(dá)水平顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織(P<0.05),該結(jié)果與相關(guān)報(bào)道一致,提示miR-21過(guò)表達(dá)可能在某種程度上促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與發(fā)展。進(jìn)一步分析子宮內(nèi)膜癌組織中miR-21過(guò)表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特性相關(guān)性發(fā)現(xiàn),F(xiàn)IGO分期越高則miR-21表達(dá)越高(P<0.05),提示miR-21過(guò)表達(dá)可能是促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌進(jìn)展的主要因素;盆腔淋巴轉(zhuǎn)移者miR-21表達(dá)與高于無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者(P<0.05),提示miR-21過(guò)表達(dá)可能參與了子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲及遷移。此外,miR-21表達(dá)水平與年齡、絕經(jīng)、病理類(lèi)型及分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05),提示miR-21表達(dá)不易受個(gè)體因素或其他因素影響,其可能是子宮內(nèi)膜癌早期診斷、療效判定和預(yù)后評(píng)估的潛在指標(biāo)。

        綜上所述,miR-21在子宮內(nèi)膜癌組織中過(guò)表達(dá),且其過(guò)表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌FIGO分期及盆腔淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。miR-21可能是子宮內(nèi)膜癌的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。

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