陳靜 段小勇 王晟

443002三峽大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院 葛洲壩集團中心醫(yī)院檢驗科1，湖北宜昌

443002三峽大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院 葛洲壩集團中心醫(yī)院急診醫(yī)學(xué)科2，湖北宜昌

臨床檢驗的質(zhì)量對患者的診斷、治療和預(yù)后有直接影響。檢驗程序?qū)τ跈z驗結(jié)果的質(zhì)量保障有重要意義[1]。根據(jù)CNAS-CL02準則進行判定，其通過了中國合格評定國家認可委員會的評定。2012年《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準則》明確指出：實驗室應(yīng)在設(shè)備安裝和使用前驗證其性能可達到標(biāo)準，并符合相關(guān)檢驗的要求[2-3]。CNAS-CL43：2012同時指出：血液分析儀的性能驗證內(nèi)容至少應(yīng)包括精密度、可報告范圍(線性范圍)、正確度等，宜參考WS/T 406-2012《臨床血液學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》[4]。關(guān)于檢測線性范圍第4版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》這樣解釋，線性是指所用分析方法在給定范圍內(nèi)獲取與樣品中分析物濃度/活性成正比的試驗結(jié)果的能力。檢驗方法的準確度是隨著所測定的含量范圍而發(fā)生變化的。超過一定的范圍，準確度就會受到影響[5]。本研究所進行的檢測線性范圍的驗證就是確認廠家聲明檢測線性范圍內(nèi)結(jié)果的準確度能達到行業(yè)標(biāo)準的要求。

資料與方法

材料：①全自動五分類血液分析儀。②篩選合適的新鮮日常血液分析樣品4份。③離心機、可調(diào)式微量移液器及一次性耗材。

圖1 WBC線性結(jié)果

表1 WBC線性結(jié)果(109/L)

圖2 RBC線性結(jié)果

表2 RBC線性結(jié)果(1012/L)

方法：①選取當(dāng)日檢測結(jié)果分別為WBC＞20× 109/L、 RBC≈4.00× 1012/L、HGB≈125 g/L、PLT＞500×109/L且HCT≤0.4的EDTA-K2抗凝靜脈全血樣品各1例。②將上述4例樣品置于離心機內(nèi)，進行3 500 r/min，離心10 min，而后盡量將其血漿吸盡，將這些樣品分離成血漿和少漿血。③參照EP6-A2文件用血漿(血小板使用稀釋液)作為低濃度樣品(L)，少漿血作為高濃度樣品(H)[6]，將低濃度和高濃度樣品按比例混合，即按4∶0、3∶1、2∶2、0∶4的比例混合可得到5份線性試驗樣品[7]。各樣品的預(yù)期濃度按以下式計算：樣品預(yù)期濃度=(C1V1+C5V5)/(V1+V5)，V1代表所取1號低濃度樣品體積，C1代表1號低濃度樣品濃度，C5代表5號高濃度樣品濃度，V5代表所取5號高濃度樣品體積。根據(jù)實驗樣品配制的稀釋關(guān)系，對各實驗樣品內(nèi)含分析物的濃度進行計算，得出的即為樣品的預(yù)期值。再經(jīng)測定方法檢測，獲得5個檢測值。按以上實驗要求，重復(fù)測定每個樣品3次，取平均值，它們和預(yù)期值形成5對預(yù)期值及實測平均值。采用直線回歸方程統(tǒng)計數(shù)據(jù)，實測值為縱坐標(biāo)，橫坐標(biāo)定位預(yù)期值，得直線回歸y=ax+b(b設(shè)定為零)。若線性回歸方程的斜率在(1±0.03)范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r≥0.975，或r2≥0.95[8]，則認為該項目在此儀器線性范圍通過驗證。

結(jié) 果

WBC、RBC、HGB、PLT項目的線性驗證的結(jié)果均符合《WS/T 406-2012臨床血液學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》的要求，其線性范圍驗證通過。由于WBC、PLT符合廠家提供的儀器線性范圍的高濃度樣品非常難以獲得，而經(jīng)過對以往數(shù)據(jù)的統(tǒng)計確認此次實際驗證范圍已覆蓋日常工作中99.9%以上的樣品濃度范圍，故以此次驗證檢測線性范圍可滿足日常工作需要。WBC、RBC、HGB、PLT線性結(jié)果，見圖1～圖4和表1～表4。

討 論

作為檢驗科最常用的一種分析儀器，其檢測結(jié)果的準確性直接影響了臨床醫(yī)師對疾病的診斷和治療[9]。因此在使用分析儀前首先要保證該儀器的系統(tǒng)誤差在臨床可接受范圍內(nèi)，因此在儀器新安裝和投入臨床使用前，除了要求滿足與檢測相關(guān)的規(guī)格外，還需要達到所需的性能[10]，即進行性能驗證。由于在性能的線性范圍驗證過程中需用到高濃度樣本，而該樣本較難獲得，實驗室的質(zhì)量管理工作會因為等待臨床高濃度樣本而處于被動地位，影響了行業(yè)標(biāo)準在實際工作的具體實施[11]，如果用離心濃縮的方式自制少漿全血作為高濃度樣品，將較易獲得適合濃度的高濃度樣品，再將其血漿(稀釋液)作為低濃度樣本，即符合衛(wèi)健委標(biāo)準的要求，又避免了各種不相容的情況，使檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果有非常好的相關(guān)性，從而能夠快速地完成血液分析儀的線性范圍驗證，縮短了驗證周期，提高了工作效率，同時也使檢驗結(jié)果的準確性有了數(shù)據(jù)的支撐。

圖3 HGB線性結(jié)果

表3 HGB線性結(jié)果(g/L)

圖4 PLT線性結(jié)果

表4 PLT線性結(jié)果(109/L)

自制血液分析的少漿全血高濃度樣品順利地通過了線性范圍驗證，同時滿足了高效與質(zhì)量保證的兩大要素，對血液分析儀的線性范圍驗證具有一定的參考意義。故在此將血液分析儀的線性范圍驗證方法進行總結(jié)，若有不足敬請批評指正。