楊 帆 赫 雪 楊 遠 姜南茜 王瑾書 郭鵬輝

西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅 蘭州 730124

肥胖是由一種脂肪組織過度堆積和脂質(zhì)代謝失調(diào)所引起的疾病，能夠引發(fā)多種代謝疾病，如2型糖尿病、高脂血癥、高血壓、心血管疾病等[1]。研究數(shù)據(jù)表明，39% 的子宮內(nèi)膜癌、37%的食道癌、25%的腎癌、11%的結(jié)腸癌、9%的乳腺癌均與肥胖有關(guān)[2]。預(yù)計到2030年超重和肥胖人群將達全世界總?cè)丝诘?58%[3]，肥胖將成為全球流行性疾病。

傳統(tǒng)的減肥方法分為兩類，一類是通過節(jié)食、食欲抑制劑、緩瀉劑、手術(shù)等方式減少能量的攝入，或者通過運動利用食物的特殊動力學(xué)作用增加能量的消耗，最終形成能量的負(fù)平衡從而達到消耗脂肪的目的[4]。而另一類，是通過服用化學(xué)類降脂藥物達到降脂目的。國內(nèi)常用的降脂藥物主要成分集中在他汀類、膽汁酸鰲合劑及甲亞油酰胺類等，這些西藥類雖具有不同程度的降脂效果，但都存在一定的毒副作用，如損害肝功能、肌痛等[5]。因此，研發(fā)一種能夠達到健康減肥效果的天然降脂藥物是非常重要的。有效的健康減肥方法不僅有利于提高國民體質(zhì)，還有利于管控慢性病，進而能夠減輕相關(guān)醫(yī)療機構(gòu)的財政壓力[6]。

藏藥柳茶(Sibiraeaangustata)又稱為窄葉鮮卑花,隸屬于薔薇科鮮卑花屬 (Sibiraea)，其作為茶飲在藏族民間廣為流行，又因其形狀與柳葉相似，故俗稱“柳茶”，主要分布在我國的青海、西藏、云南及甘肅等地[7]。柳茶幼時紫紅色，老時黑褐色，冬芽卵形，外披紫褐色鱗片。當(dāng)年生的柳茶枝條為葉多互生，老枝上則為叢生，葉片呈或為線狀披針形、長圓倒披針形或?qū)捙樞?，上下兩面均為無毛，但有明顯中脈及側(cè)脈，葉柄不顯，無托葉，屬于雜性異株，花期1月，果期1月[8]。藏藥柳茶作為我國藏族傳統(tǒng)的珍貴藥材，當(dāng)?shù)夭孛褚话阋云淙~和嫩枝入藥做茶飲，能夠治療食后腹脹或消化不良等癥狀[9]。據(jù)牧民觀察，食用柳茶的牛羊等牲畜體重明顯減輕，而且精神飽滿、皮毛光潔，因此可推斷柳茶可能具有降脂效果。

本研究以藏藥柳茶為供試材料，以SD小鼠為試驗對象，通過比較灌胃同劑量不同濃度的柳茶水提物對單純性肥胖小鼠體重、體脂、腎周邊脂肪質(zhì)量、皮下脂肪質(zhì)量和脂肪細胞形態(tài)的影響，探究柳茶的降脂效果，旨在為藏藥柳茶的進一步開發(fā)利用奠定理論基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 實驗動物 SD小鼠25只，體質(zhì)量20～25 g，購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，合格證號:0049435。

1.2 實驗材料 藏藥柳茶于 2018年6月采自甘肅省甘南藏族自治州，由西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院郭鵬輝副教授鑒定為薔薇科鮮卑花屬 (Sibiraea)植物柳茶的葉片。

1.3 儀器 KQ-500B超聲波提取儀(昆山市超聲儀器有限公司)、KD1508A切片機、KD-P攤片機、KD-H烘片機(金華科迪儀器設(shè)備有限公司)、BX43生物顯微鏡、BGG-9070A恒溫干燥箱、BSC- 1000A2生物安全柜(江西立康科技有限公司)。

2 方法

2.1 小鼠單純性肥胖模型的建立 小鼠25只，取5只按照隨機數(shù)字表法以基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)1周，其余喂飼高脂飼料(基礎(chǔ)飼料75%、蔗糖10%、羊油15%)。每籠5只,自由攝食和飲水，明暗周期為12h，室溫20～25℃，相對濕度40%～50%，保持良好通風(fēng)條件。每日稱量體重，并記錄數(shù)據(jù)。4周后高脂飼料組小鼠體重高于基礎(chǔ)飼料組小鼠體重的20%，則證明建模成功。

2.2 藏藥柳茶水提物的制備 取干燥藏藥柳茶，經(jīng)組織粉碎機粉碎，準(zhǔn)確稱取粉末20g，放入樣品瓶，按照料液比 1∶10 加入蒸餾水，搖勻，置于超聲提取儀中，40 ℃，300 W 超聲40 min，處理 2 次，加壓抽濾分離水溶液，合并提取液，減壓濃縮至20 mL，將上清液置于4 ℃冰箱中冷藏備用。

2.3 實驗動物分組與給藥方法 實驗設(shè)5組，上述基礎(chǔ)飼料組為對照組；采用隨機數(shù)字表將建模成功的小鼠分為4組，即模型組、高、中、低劑量組，每組5只。高、中、低劑量組采用灌胃給藥法，分別按相當(dāng)于生藥量 15、10、5 g/kg 劑量給藥，對照組和模型組灌服0.9%氯化鈉溶液，每天1次，灌胃量為0.2 mL/10g·bw。給藥6周后禁食(不禁水)12 h。打開腹腔取腎及脂肪組織，均用10% 福爾馬林溶液固定，-80℃保存。

2.4 脂肪細胞形態(tài)檢測 取10%福爾馬林溶液固定的脂肪組織進行常規(guī)石蠟包埋，切片，10×40倍全視野下觀察脂肪細胞形態(tài)和數(shù)量。

2.5 體重及體脂含量 測量體重、體長，計算 Lee’s指數(shù)；解剖小鼠取其皮下脂肪及腎周全部脂肪稱重。

3 結(jié)果

3.1 藏藥柳茶水提物對試驗小鼠體重的影響 建模4周后，高脂飼料組小鼠體重高于基礎(chǔ)飼料組小鼠體重的60%，表明建模成功。對各組小鼠體重進行比較，高、中、低劑量組的小鼠造模期間體重有顯著的增加，經(jīng)過灌胃治療后，高、中、低劑量組的小鼠體重有顯著減少(P<0.05)，其中中劑量組最為明顯。見表1。試驗期間小鼠體重的變化如圖1所示。

組別造模前/g造模2周/g造模4周/g灌胃2周/g灌胃4周/g灌胃6周/g對照組24.53±0.6823.33±0.88△24.43±1.05△25.33±1.03△26.72±1.23△26.03±1.43△模型組22.01±1.1034.44±0.78?39.58±1.44?41.53±1.30?42.69±1.05?45.23±1.14?高劑量組23.43±0.5534.41±0.75?41.37±0.97?40.54±1.16?38.10±1.15?37.44±0.97?中劑量組21.64±1.0637.23±1.07?40.66±1.13?39.23±1.12?35.24±1.14?△30.44±1.17?△低劑量組22.36±0.8337.31±0.94?41.24±1.07?39.71±1.05?36.24±1.10?33.43±1.14?△

注：與對照組比較，*P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

3.1 藏藥柳茶水提物對試驗小鼠體脂、脂肪量的影響 灌胃治療6周后，高、中、低劑量組的單純性肥胖小鼠體脂、腎周邊脂肪質(zhì)量和皮下脂肪質(zhì)量有明顯減少(P<0.05)，其中柳茶中劑量組的降脂作用最為明顯。見表2。

表2 藏藥柳茶對試驗小鼠體脂和脂肪量的影響

注：與對照組比較，*P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

3.3 藏藥柳茶水提物對單純性肥胖小鼠脂肪細胞形態(tài)的影響 灌胃6周后，高、中、低劑量組小鼠脂肪細胞的截面細胞數(shù)顯著高于模型組(P<0.05)，高、中劑量組小鼠脂肪細胞的截面細胞數(shù)和半徑都顯著高于對照組(P<0.05)。見表3和圖2。

組別截面細胞數(shù)/個細胞半徑/μm對照組21±1.022.20±0.06模型組15±2.152.05±0.13低劑量組32±3.01△1.87±0.11中劑量組56±2.29?△1.58±0.02?△高劑量組38±2.01?△1.72±0.07?△

注：與對照組比較，*P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

4 討論

肥胖作為一種現(xiàn)今常見的營養(yǎng)障礙性病，對人體存在諸多危害。不僅會降低患者的生活質(zhì)量，還會引發(fā)糖尿病、高血脂及心血管病等多種嚴(yán)重危害人體健康的疾病，進而在一定程度上縮短患者的壽命[10-11]。目前柳茶的降脂研究多集中在細胞層面[12]，本實驗從藥效學(xué)角度研究表明，藏藥柳茶具有降脂功效。從宏觀角度進行研究，實驗結(jié)果清晰直觀。柳茶的降脂功效的發(fā)現(xiàn)能夠幫助天然減肥藥的研發(fā)，幫助患者從傳統(tǒng)的減肥方法過渡到健康減肥。

在實驗過程中，通過參考相關(guān)文獻[13]與進行預(yù)實驗逐漸摸索出高脂飼料最為適宜的配方。飼養(yǎng)4周后，喂養(yǎng)高脂飼料的小鼠體重高于喂養(yǎng)普通飼料的小鼠，的60%，說明高脂飼料配方合理且成功建立小鼠單純性肥胖模型。本實驗采用高脂飲食誘導(dǎo)小鼠肥胖，與人群肥胖機制極為類似。本實驗采用單純性肥胖小鼠模型，以喂養(yǎng)基礎(chǔ)飼料的小鼠為水平對照，探討藏藥柳茶水提物對單純性肥胖小鼠體重、體脂和脂肪量的影響。結(jié)果表明，高、中、低劑量組與模型組比較，均可明顯降低單純性肥胖小鼠體重、體脂和脂肪量，其中中劑量組治療效果最好。

本實驗初步探究了柳茶水提物對單純性肥胖小鼠各種指標(biāo)的影響，證明了柳茶的降脂作用，為西部民族地區(qū)特色植物藏藥柳茶的開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。