曾艷，郎紅，楊巧慧,2，李霞雪，史朝婷

固相萃取-GC/LC-MS/MS測定茶葉中79種農藥殘留

曾艷1，郎紅1，楊巧慧1,2，李霞雪1，史朝婷1

1. 雅安市農產品質量監(jiān)測檢驗中心，四川 雅安 625000；2. 四川農業(yè)大學食品學院，四川 雅安 625000

建立了一套以一次固相萃取前處理方法，運用氣相色譜-串聯質譜（GC-MS/MS）和液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）兩種檢測技術，測定茶葉中79種農藥殘留的可靠、快速、高通量檢測方法。該方法用20?mL乙腈一次均質提取，分取提取液10?mL，用乙腈+甲苯（3∶1）20?mL洗脫過Carbon/NH2小柱凈化，用5?mL乙腈定容混勻，于GC-MS/MS和LC-MS/MS同時檢測。結果表明，79種農藥在0.01~0.40?mg·L-1范圍內線性良好，相關系數（R）在0.995以上；高、低、中3種水平加標回收率在67.3%~130.8%內；相對標準偏差（RSD）在15%內；98.7%的農藥定量限（LOQ）≤0.01?mg·kg-1；使用多種類茶葉實際檢測，結果均合格。因此，該方法能同時檢測含有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯類、氨基甲酸酯類和有機雜環(huán)類5大類農藥，更有利于大批量茶葉樣品的多農殘檢測。

茶葉；GC-MS/MS；LC-MS/MS；農藥殘留

中國是世界茶文化的發(fā)源地，茶葉也是中國重要的經濟作物和出口農產品，歐洲國家和日本是我國茶葉的重要進口國。在茶產業(yè)快速發(fā)展的同時，其衛(wèi)生質量和安全也引起了各國的廣泛關注，其中尤以農藥殘留限量關注度最高[1]。國際食品法典委員會（CAC）、歐盟和日本等組織和國家制定的茶葉中最高農藥殘留限量（MRL）標準極為嚴苛，并在不斷發(fā)布新的茶葉進口標準，增加茶葉農殘檢測項目，提高茶葉農殘限量標準[2]。2014年，歐盟共對EC396/2005法規(guī)進行了22次修訂，附錄Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中涉及茶葉農殘限量標準分別為242、193和40個，共計475個[3-4]。農藥殘留檢測已成為茶葉貿易中最大的技術壁壘。

目前，茶葉農殘檢測方法中多為液相色譜-串聯質譜法[5-6]和氣相色譜-質譜法[7]，這些方法只能單一檢測某類農藥，如有機磷類、氨基甲酸酯類或有機氯類、擬除蟲類，且前處理多為QuEChERS法；檢測茶葉農殘的國標方法多為液相色譜-質譜法[8]和氣相色譜-質譜法[9]，前處理太過冗長繁鎖、試劑用量大，較難滿足大批量樣品快速分析，其所用檢測器為單級質譜，對于基質復雜的茶葉而言，定性較為困難。為了把農藥殘留控制在MRLs內，迫切需要制定一套可靠、快速、高通量的檢測方法。本試驗以不同品種茶葉為研究對象，參考了中國[10]、歐盟[11]和日本[12]的殘留限量標準（沒有限量的農藥按日本“一律限量0.01?mg·kg-1”執(zhí)行），共選擇了79種農藥（表1），以固相萃取法為前處理手段，采用氣相色譜-串聯質譜（GC-MS/MS）和液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）兩種檢測技術聯用，建立了茶葉中5大農藥類型、79種農藥同時檢測的高通量方法，實現了短時間內批量樣品的多種類農殘準確定性定量檢測。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

7890B-7000C型氣相色譜-串聯質譜儀、1290-6470型超高液相色譜-串聯質譜儀，美國安捷倫科技有限公司；T25型高速勻漿機，廣州儀科實驗室技術有限公司；KL-512型氮吹儀，北京康寧科技有限責任公司；TP-215D型電子天平，北京賽多得期儀器系統(tǒng)有限公司；XH-B型旋渦混合器，江蘇姜堰市康健醫(yī)療器械有限公司；K600型食品粉碎機，德國博朗公司；TDL-40B型離心機，上海線安亭科學儀器廠。

79種標準溶液（表1）購自國家標準物質中心，質量濃度為100?mg·L-1。固相萃取小柱Mega BE Carbon/NH2購自安捷倫科技有限公司。TPT小柱購自月旭科技（上海）股份有限公司。乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯（色譜級）購自美國天地有限公司。其他試劑為分析純，所用水均為超純水。

標準溶液的配制：將79種農藥標準溶液用1∶1（∶）的乙腈+丙酮稀釋成2?mg·L-1的混合標準溶液。

標準曲線的配制：取混合空白茶葉樣經前處理后的溶液作為空白基質，分別加入2?mg·L-1的混合標準溶液0.05、0.25、0.5、1、2?mL至10?mL容量瓶后，用空白基質定容混勻，即得到含量為0.01、0.05、0.1、0.2、0.4?mg·L-1的混合農藥標準系列溶液。

實際樣品測試為實驗室隨機取樣樣品，含紅茶、綠茶、藏茶、黑茶、黃茶和花茶。

2.2 樣品前處理

取試樣于食品粉碎機里粉碎，過60目篩（0.25?mm），混勻。稱取粉碎混勻試樣5.00?g于50?mL離心管中，每個處理1個混合空白樣，3個平行樣（加入混合標準溶液0.2?mg·kg-1作為試樣），加20?mL乙腈，高速勻漿1.5?min，6?000?r·min-1離心6?min。用移液槍取10?mL濾液于150?mL雞心瓶中，40℃旋轉蒸發(fā)盡干。加5?mL乙腈+甲苯（3∶1）溶液溶解樣品，混勻并洗3次，收集全部洗滌液40℃蒸干，用5?mL乙腈溶解試樣，漩渦混勻過微孔膜，裝瓶檢測。

表1 79種農藥在茶葉中限量值

2.3 色譜質譜條件

2.3.1 GC-MS/MS條件

采用Agilent 7890B-7000C氣相色譜串聯質譜儀，使用Agilent HP-5MS 30?m×250?μm×0.25?μm毛細管柱；進樣口溫度：270℃；進樣量1?μL，不分流進樣；柱溫箱梯度升溫程序：80℃保持2?min后，15℃·min-1升至310℃，保持5?min，共計22.33?min；載氣N2≥99.999%，1?mL·min-1恒流模式；離子源溫度，230℃；四極桿溫度，150℃；電子轟擊源電壓，70?eV；傳輸線：280℃；淬滅氣，He≥99.999%，2.25?mL·min-1；碰撞氣，N2≥99.999%，1.5?mL·min-1；掃描方式，動態(tài)多反應監(jiān)測（DMRM）。

2.3.2 LC-MS/MS條件

采用Agilent 1290-6470超高液相色譜串聯質譜儀，使用Agilent C1850?mm×0.30?mm×1.8?μm柱子；進樣量1.0?μL；流動相A為甲醇，B為水（含0.1%甲酸）；梯度洗脫程序：0~1?min，10% A；1~6.6?min，10%~80% A；6.6~7.0?min，80%~90% A；7.0~7.10?min，90%~98% A；7.10~11.60?min，98% A；11.60~15.00?min，98%~10% A；流速：0.3?mL·min-1；柱溫30℃；電噴霧電離（ESI）源，正離子模式；干燥氣溫度，350℃；干燥氣流速10?mL·min-1；霧化器壓力，15?psi；鞘氣溫度，300℃；鞘氣流速，11?mL·min-1；毛細管電壓，4?000?V；掃描方式，DMRM。

3 結果與分析

3.1 儀器條件優(yōu)化

3.1.1 GC-MS/MS儀器條件優(yōu)化

GC-MS/MS通過反復調整色譜柱升溫程序和載氣流量等關鍵性氣相參數；在保證所有農藥有較好分離度的同時，盡量縮短分析時間（44個農藥組分19?min內全部檢出，圖1），在優(yōu)化好的氣相色譜條件下，使用高濃度的混合標準溶液（2?mg·L-1），用全掃描（MS2Scan）方式，NIST譜庫搜索比對，得到各待測農藥的質譜圖。選擇1~2個相對豐度較高、質荷比較大、無背景干擾的離子作為母離子進行產物離子掃描（Product ion scan），同時給予不同的碰撞能量電壓（Collision energy，CE），找到豐度高的子離子和最佳CE。最后，用選擇好的離子對和優(yōu)化好的CE進行DMRM。最佳色譜質譜條件見2.3.1章節(jié)，44種農藥組分的保留時間、MRM離子對及最佳CE見表3，MRM總離子圖見圖1。

3.1.2 LC-MS/MS儀器條件優(yōu)化

LC-MS/MS反復調整流動相及梯度洗脫程序等關鍵性液相參數；在優(yōu)化好的色譜條件下，采用單一標準溶液（2?mg·L-1）對母離子進行全掃描（MS2Scan），同時設置幾組不同的裂解電壓（Frangment），對照每種標樣的相對分子量，找到與相對分子量一致的質荷比作為其母離子，選擇母離子響應最大值下的裂解電壓，作為后續(xù)最優(yōu)裂解電壓；然后進行產物離子掃描，并同時優(yōu)化CE，找到特征子離子及其最佳CE。最后采用優(yōu)化好的條件，進行DMRM分析。優(yōu)化好的最佳色譜質譜條件見2.3.2章節(jié)，35種農藥組分的保留時間、MRM離子對及最佳CE見表3，MRM總離子圖見圖2。

注：圖中色譜峰編號對應農藥詳見表1

3.2 提取方式及提取劑比較

茶葉中的農殘?zhí)崛》绞街饕谐昜13]、振蕩[14]和均質提取[15]等，但超聲和振蕩提取都不能完全破壞茶葉的細胞壁，對于內吸性農藥，難以提取完全。均質提取則可以完全破壞茶葉細胞壁使內吸性農藥完全釋放，但國標中均質提取兩次，使用大量的有機溶劑，操作復雜。因此，本試驗采用有機溶劑一次均質提取后，分取適量溶液后續(xù)凈化。目前，植物性樣品中農殘檢測主要提取溶劑有丙酮、乙酸乙酯、乙腈、甲醇和正己烷[13-14]等。甲醇和正己烷對茶葉組織滲透力不足，難以將極性農藥從植物組織中完全萃取，提取效率低，因此本文比較了乙腈、丙酮和乙酸乙酯3種有機試劑均質提取效果。

如表2所示，經乙腈1次均質提取后的農藥，在兩種儀器上的平均回收率分別為80.9%和103.9%，經丙酮提取的分別為82.4%、174.7%，經乙酸乙酯提取后的分別為82.1%、164.9%。分別經丙酮和乙酸乙酯提取后的農藥于LC-MS/MS上檢測（35個），分別有6個和3個回收率小于70%，說明提取不完全；于GC-MS/MS上檢測（44個）回收率普遍偏大，分別有35個和36個的農藥回收率超過130%，另有極小部分農藥（百菌清、p.p′-DDD、三氯殺螨醇）在兩種提取劑中回收率均低于70%。由此可見，丙酮和乙酸乙酯對大多數農藥的提取效果不錯，但提取的雜質也較多，后續(xù)凈化難度大，由此導致大量農藥回收率超過130%。以上結果同時表明，用乙腈一次均質提取，效果也很佳，不需要再次加入乙腈進行提取。因此，本試驗最終選擇乙腈作為提取試劑，一次均質提取。

注：圖中色譜峰編號對應農藥詳見表1

表2 不同提取劑對79種農藥回收率的影響

注：農藥的添加水平為0.2?mg·kg-1

Note: Pesticide addition level is 0.2?mg·kg-1

3.3 凈化洗脫液及凈化小柱比較

國標中，對于蔬菜、水果、食用菌的凈化為Florisil和Envi-Carbon小柱[15-16]，使用正己烷和正己烷加丙酮進行洗脫，洗脫液用量為10?mL；茶葉凈化通常使用Cleanert TPT柱[8]，采用乙腈加甲苯進行洗脫，用量為25?mL；文獻報道固相萃取中常用Cleanert TPT和Envi-Carbon小柱[13,17-18]，洗脫液也為正己烷、乙腈、乙腈加甲苯。Florisil柱的色素去除能力較差，不適用于茶葉基質；Carbon/NH2柱除了有較強的色素去除能力外，還有-NH2結構，具有較高的離子交換容量，能有效去除有機酸等極性雜質，使得基質干擾降低許多。因此，本試驗以Cleanert TPT和Carbon/NH2小柱進行凈化效果比較。洗脫液選擇，一是盡量去除非目標物，保留目標物；二是盡量較少溶劑置換，減少溶劑對部分農藥的影響。由于Carbon對平面型農藥（如百菌清等）有一定的吸附能力，而甲苯是較強極性的洗脫液，能夠將吸附在小柱上的農藥強有力的洗脫下來。因此，本試驗以純乙腈和乙腈+甲苯（3∶1）作為洗脫液，進行了凈化效果比較。

由表3可知，用乙腈作洗脫液時，在LC-MS/MS上檢測的農藥全部表現為回收率偏低，在GC-MS/MS上檢測的農藥，有部分偏低（6個），有部分偏高（11個）；用TPT小柱進行凈化時，在LC-MS/MS上檢測的農藥，總體回收率表現為偏低（平均回收率為51.99%和70.59%）；在GC-MS/MS上檢測的農藥總體偏高（平均回收率為104.6%和126.7%），總體效果最差，且TPT小柱成本遠高于Carbon/NH2，不適合于批量樣品檢測；使用乙腈+甲苯（3∶1）洗脫，用Carbon/NH2作凈化小柱時，效果達到最佳，回收率在70%~130%之間的農藥有76個，平均回收率為81.6%和109.0%。綜合考慮，本試驗選用乙腈+甲苯（3∶1）作洗脫液，用Carbon/NH2作為凈化小柱。

3.4 凈化洗脫液體積比較

試驗中用乙腈+甲苯（3∶1）作洗脫液、Carbon/NH2小柱進行凈化，分別使用10、15、20、25、30?mL的乙腈+甲苯（3∶1）進行洗脫。圖3為隨機選擇在GC-MS/MS和LC-MS/MS上檢測農藥的洗脫體積梯度回收率。5個洗脫梯度下，79種農藥的平均回收率分別為：81.3%、83.0%、82.3%、87.4%和86.6%，均在80%~90%，隨著洗脫液體積的增加，其平均回收率總體呈上升趨勢；但20?mL之后，在GC-MS/MS上檢測農藥的回收率仍在增大，洗脫體積為30?mL時，回收率在105.4%~151.8%，超過130%的農藥有4個；而LC-MS/MS上檢測農藥的回收率則整體表現為下降，到30?mL洗脫體積時，其平均回收率在34.1%~80.8%，有33個農藥回收率低于70%。這主要的原因是茶葉中的復雜基質干擾直接影響了待測物定量的準確性，目標農藥在較低洗脫液的使用下，已經完全洗脫下來，隨著洗脫體積的增大，一部分干擾物被洗脫下來（如色素），影響了目標農藥的準確定量。因此，本試驗選擇20?mL的乙腈+甲苯（3∶1）洗脫液凈化，以適應所有試驗農藥的檢測。

表3 不同洗脫液和凈化小柱對79種農藥回收率的影響

注：農藥的添加水平為0.2?mg·kg-1

Note: Pesticide addition level is 0.2?mg·kg-1

注：（A）GC-MS/MS檢測農藥，（B）LC-MS/MS檢測農藥 Note: (A) detected by GC-MS/MS, (B) detected by LC-MS/MS

3.5 標準曲線、加標回收率及定量限

按以上方法配制了標準曲線，以目標組分的響應面積（）對相應的質量濃度（，mg·L-1）繪制了標準曲線。結果發(fā)現，在0.01~0.40?mg·L-1范圍內線性良好，相關系數均大于0.995。用本方法進行了0.02、0.20、0.40?mg·kg-1的加標回收試驗，3種加標水平下，其回收率達到67.3%~130.8%，相對標準偏差（RSD）<15%；以信噪比（S/N）>10確定79種農藥的定量限（LOQ），除甲胺磷定量限為0.02?mg·kg-1外，其他均可達到0.01?mg·kg-1，特別是LC-MS/MS檢出農藥，其定量限在0.000?2~0.009?0?mg·kg-1，比GC-MS/MS定量限更低（表4）。

3.6 實際樣品檢測

對于茶葉的檢測，茶葉中的基質干擾較為嚴重，不同種類的茶葉，其內容物質差異也較大，對農殘檢測的干擾也不同，為了排除這些干擾，本研究將上一年度檢測無該79種農藥殘留的紅茶、綠茶、藏茶、黑茶、黃茶和花茶樣品作為空白試驗樣本，減少了不同茶葉基質對試驗方法的干擾。

應用本研究所建立的方法對2018年實驗室隨機抽取茶葉樣品：綠茶52份，紅茶19份，藏茶17份，黑茶5份，黃茶5份，花茶2份共100份進行了檢測。結果表明，100份樣品中GC-MS/MS共檢出農藥166次：聯苯菊酯60次，氯氟氰菊酯49次，甲氰菊酯22次，三氯殺螨醇22次，硫丹1次，氯菊酯1次；LC-MS/MS上共檢出農藥207次：毒死蜱59次，噻嗪酮45次，吡蟲啉39次，噠螨靈32次，多菌靈19次，啶蟲脒13次，其他農藥均未檢出，所有檢出農藥均未超出國家限量值，合格率100%。由檢出的農藥種類可見，高毒、高殘留的有機磷類農藥均未檢出，檢出率最高的是低毒、低殘留的擬除蟲菊酯類農藥（檢出132次），表明這是茶葉常用農藥類。

表4 茶葉中79種農藥的儀器采集條件、相關系數、添加回收率和定量限（n=3）

注：*標注為定量離子對

Note: Marked*are the quantitative ion pairs

續(xù)表4

農藥名稱Pesticide name保留時間/minRetention time離子對/m·z-1Tranisition裂解電壓Fragment/V碰撞能量電壓CE/VR2添加水平Add level/mg·kg-1定量限LOQ/mg·kg-1 0.020.20.4 回收率/%RSD/%回收率/%RSD/%回收率/%RSD/% p.p′-DDD14.72235.0-199.1/235.0-165.2*/20/150.999?189.112.4117.88.099.84.10.041?7 p.p′-DDE15.16235.0-199.1/235.0-165.2*/20/150.999?172.310.7121.18.2103.32.00.011?6 炔螨特Propargite15.31149.9-135.1/135.0-77.1*/30/50.999?4105.113.5105.15.8113.52.10.015?2 聯苯菊酯Bifenthrin15.69181.2-166.2/181.2-165.2*/25/100.999?4108.010.4124.87.896.11.40.011?4 亞胺硫磷Phosmet15.74160.0-133.1/160.0-77.1*/20/100.999?2118.18.2124.18.7110.72.00.011?4 甲氰菊酯Fenpropathrin15.83181.0-127.0/207.9-181.0*/5/350.998?299.411.6129.010.997.30.60.010?2 伏殺硫磷Phosalone16.19182.0-102.1/182.0-111.0*/15/150.999?2109.211.1126.910.0107.61.80.010?9 氯氟氰菊酯Cyhalothrin16.32197.0-141.0/208.0-181.1*/5/100.999?0106.711.873.610.2103.30.90.010?9 氯菊酯Prermethrin16.96183.1-165.1/183.1-168.1*/10/100.999?397.514.174.14.2102.21.30.006?2 氟氯氰菊酯Cyfluthrin17.32162.9-90.9/162.9-127.0*/5/150.999?0110.89.4114.38.7100.30.10.006?6 氯氰菊酯Cypermethrin17.56164.9-91.01/63.0-127.0*/5/100.999?1115.08.1111.47.6102.11.90.008?1 氟氰戊菊酯Flucythrinate17.67198.9-157.9/156.9-107.1*/15/100.999?2113.17.8109.55.4101.90.50.010?9 醚菊酯Ethofenprox17.73163.0-135.1/163.0-107.1*/20/100.999?0112.312.0117.36.2100.80.00.011?4 氰戊菊酯Fenvalerate18.26167.0-89.0/167.0-125.1*/15/400.999?2130.35.1117.95.4105.20.70.007?0 氟胺氰菊酯Tau-fluvalinate18.26250.0-200.0/250.0-55.0*/15/200.999?3110.19.5128.810.2107.10.80.008?9 溴氰菊酯Deltamethrin18.81250.7-172.0/252.9-93.0*/10/50.999?5115.24.4127.710.4112.11.40.012?2 涕滅威亞砜Aldicarb-sulfoxide3.77207.0-89.0/207.0-132.0*805/50.999?891.74.883.52.288.82.90.000?5 涕滅威砜Aldicarb-sulfone4.16223.0-148.0/223.0-86.0*1105/150.999?881.53.588.76.291.60.30.005?3 多菌靈Carbendazim4.38192.0-132.0/192.0-160.0*10025/150.999?484.48.274.81.498.94.40.000?5 滅多威Methomyl4.61163.1-106.2/163.1-88.2*705/50.999?380.84.982.76.189.61.10.000?6 噻蟲嗪Thiamethoxam4.82292.1-181.1/292.1-211.1*8025/100.999?582.56.585.10.992.10.90.000?3 久效磷Monocrotophos5.07224.1-127.1/224.1-192.9*8010/50.999?3127.51.5115.25.1116.63.20.000?6 吡蟲啉Imidacloprid5.53256.0-175.0/256.0-209.0*8010/100.999?879.414.481.53.593.80.50.001?0 樂果Dimethoate5.93230.0-125.1/230.0-199.0*8020/50.999?578.39.991.42.391.50.00.007?7 3-克百威3-Hydroxycarbofuran5.93238.0-181.0/238.0-163.0*805/100.999?478.54.287.49.178.53.90.000?4 啶蟲脒Acetamiprid5.96223.1-90.1/223.1-126.0*11040/250.999?378.013.685.61.791.01.30.000?5 涕滅威Aldicarb6.77116.0-70.0/116.0-89.0*805/50.999?181.12.182.32.387.52.00.000?4 磷胺Phosphamidon6.96300.1-227.0/300.1-174.1*11010/150.999?276.310.388.51.392.51.70.001?6 克百威Carbofuran7.42222.0-123.1/222.0-165.1*10020/100.999?583.46.182.94.288.10.10.000?3 甲萘威Carbaryl7.64202.0-117.9/202.0-145.0*805/50.999?682.85.779.54.677.48.60.000?2 嘧霉胺Pyrimethanil8.16200.2-82.1/200.2-107.1*12030/250.999?288.37.783.91.491.52.00.001?1 甲霜靈Metalaxyl8.20280.2-248.1/280.2-220.1*9010/100.999?587.08.385.72.992.60.20.000?2

續(xù)表4

農藥名稱Pesticide name保留時間/minRetention time離子對/m·z-1Tranisition裂解電壓Fragment /V碰撞能量電壓CE/VR2添加水平Add level/mg·kg-1定量限LOQ/mg·kg-1 0.020.20.4 回收率/%RSD/%回收率/%RSD/%回收率/%RSD/% 氯蟲苯甲酰胺Chlorantraniliprole8.41483.8-453.1/483.8-285.9*11015/150.999?483.21.986.55.596.91.00.002?0 嘧菌酯Azoxystrobin8.53404.0-344.1/404.0-372.1*11030/100.999?177.98.787.21.894.70.40.000?4 烯酰嗎啉Dimethomorph8.81389.0-165.2/389.0-302.1*13035/250.999?5119.012.497.02.399.40.30.003?6 三唑磷Triazophos8.93314.0-119.2/314.0-162.1*10040/200.999?380.511.590.61.397.63.30.003?3 氟蟲腈Fipronil9.11437.0-290.0/437.0-368.0*12020/150.999?572.56.979.311.281.61.00.000?4 阿維菌素苯甲酸鹽Emamectin-benzoate9.13886.5-126.0/886.5-158.0*15045/400.999?2103.512.087.510.2124.15.30.000?6 咪酰胺Prochloraz9.28376.0-70.2/376.0-308.1*8030/100.999?081.45.178.81.085.54.60.001?3 丙環(huán)唑Propiconazole9.34342.0-159.0/342.0-69.0*12020/200.999?183.02.884.50.794.70.40.005?7 吡唑醚菌酯Pyraclostrobin9.36388.0-163.0/388.0-194.2*9030/100.999?088.66.690.43.198.03.60.000?5 二嗪磷Diazinon9.35305.1-153.2/305.1-169.2*12025/200.999?182.65.886.33.493.02.20.000?4 辛硫磷Phoxim9.35299.0-129.0/299.0-77.0*8020/200.999?277.14.685.47.290.72.70.000?5 苯醚甲環(huán)唑Difenoconazoie9.47406.1-337.1/406.1-251.1*11020/200.999?389.04.180.54.190.210.80.000?3 噻嗪酮Buprofezin9.72306.2-116.2/306.2-202.1*8015/100.999?578.14.986.94.293.89.50.000?3 毒死蜱Chlorpyrifos9.96349.9-321.9/349.9-197.9*9010/200.999?176.711.780.04.897.06.10.000?6 噻螨酮Hexythiazox9.95353.0-168.0/353.0-228.0*12020/100.999?269.04.968.71.992.51.40.000?3 二甲戊靈Pendimethalin10.00282.2-194.0/282.2-212.0*7020/100.999?494.47.474.46.793.33.80.000?7 噠螨靈Pyridaben10.35365.0-308.6/365.0-147.2*8010/250.999?274.37.474.54.390.811.60.000?2 阿維菌素Abamectin10.48895.5-449.2/895.5-751.3*19050/450.999?578.83.375.80.373.76.10.008?8 滅幼脲Chlorbenzuron11.51310.0-275.5/310.0-293.1*13010/100.999?4119.37.582.62.6102.311.10.000?5

4 討論與結論

本研究采用1次均質提取，固相萃取凈化技術進行前處理，利用GC-MS/MS和LC-MS/MS同時測定茶葉中79種農藥殘留。試驗用20?mL乙腈1次均質提取，分取提取液10?mL，用乙腈+甲苯（3∶1）20?mL洗脫過Carbon/NH2小柱凈化，用乙腈定容混勻，于GC-MS/MS和LC-MS/MS同時檢測。結果表明，79種農藥在0.01~0.40?mg·L-1范圍內線性良好，相關系數（R）在0.995以上；高、低、中3種水平加標回收率在67.3%~130.8%內；相對標準偏差（RSD）在15%內；滿足多農殘檢測的準確度和精密度，98.7%的農藥定量限（LOQ）≤0.01?mg·kg-1，定量準確；使用多種類茶葉實際檢測，結果合格，應用可靠。

該方法只測試了79種農藥，局限于筆者實驗室現有農藥標準品，但種類齊全，涵蓋了歐盟、日本和中國標準中茶葉限量的5種主要農藥類型（有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯和有機雜環(huán)類），避免了只單一檢測其中某類農藥的弊端。在以后試驗中，可增加更多的農藥標準品，以期更有利于大批量茶葉樣品的多農殘檢測。

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Determination of 79 Pesticide Residues in Tea by Solid Phase Extraction with GC-MS/MS and LC-MS/MS

ZENG Yan1, LANG Hong1, YANG Qiaohui1,2, LI Xiaxue1, SHI Chaoting1

1. Ya'an Quality Inspection of Agricultural Products Monitoring Center, Ya'an 625000, China;2. College of Food Science, Sichuan Agricultural University, Ya'an 625000, China

In order to detect various pesticide residues in tea, a reliable, rapid and high throughput detection method was established: a solid phase extraction was developed for the determination of 79 pesticide residues in tea by gas chromatography-tandem mass spectrometry (GC-MS/MS) and liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). These samples were extracted by 20?mL acetonitrile. 10?mL extracts were cleaned by Carbon/NH2column with 20?mL acetonitrile + toluene (3∶1) and then mixed with 5?mL acetonitrile, then these procdssed samples were detected by GC-MS/MS and LC-MS/MS, respectively. The results show that the concentrations of 79 pesticide residues had good linearity relationships in the range of 0.01-0.40?mg·L-1, with the correlation coefficients (R) above 0.995, the recoveries of high, low and medium levels were ranged from 67.3%-130.8%, the relative standard deviations (RSDs) were less than 15%, the limits of quantification (LOQs) of 98.7 % pesticides were less than or equal to 0.01?mg·kg-1, multiple types of tea were detected, and the results were proved to be qualified. Consequently, the method can simultaneously detect 5 kinds of pesticides, including organophosphorus, organochlorine, pyrethroids, carbamates and organic heterocyclic pesticides, which would be useful to determine multi-pesticide residues in high numbers of tea samples.

tea, GC-MS/MS, LC-MS/MS, pesticide residues

S571.1；O657.63

A

1000-369X(2019)05-576-11

2019-03-01

2019-04-24

雅安市重點科技項目（2017yyjskf05）

曾艷，女，碩士研究生，高級農藝師，主要從事農產品及產地環(huán)境質量安全研究，Email: 276874503@qq.com