孫磊， 劉奉琴， 趙鵬鵬

1禹城市人民醫(yī)院兒科(山東禹城 251200)； 2山東省立醫(yī)院兒科(山東濟(jì)南 250021)

肺炎是兒童臨床常見(jiàn)疾病之一，是指由細(xì)菌感染累及的肺泡炎癥、終末氣道炎癥、肺泡水腫及肺間質(zhì)等炎癥[1-2]。兒童細(xì)菌性肺炎往往是由于兒童的免疫功能低下及呼吸系統(tǒng)發(fā)育不完全，導(dǎo)致細(xì)菌等病原體易感染而引起[3-5]。相關(guān)研究表明，腫瘤壞死因子相關(guān)激活蛋白(CD40 ligand, CD40L)和血管細(xì)胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule 1, VCAM-1)是近年來(lái)提出的與細(xì)菌性肺炎相關(guān)的炎性反應(yīng)標(biāo)記物，在細(xì)菌性肺炎及其他炎癥疾病中均有高表達(dá)[6-7]。CD40L是在活化的T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞及其他細(xì)胞上表達(dá)的Ⅱ型跨膜糖蛋白，主要調(diào)節(jié)機(jī)體體液免疫、細(xì)胞免疫應(yīng)答過(guò)程中的炎癥反應(yīng)。CD40L和CD40結(jié)合后激活體內(nèi)APC細(xì)胞，進(jìn)而激活T細(xì)胞參與炎癥反應(yīng)[8-9]。此外，細(xì)胞表面CD40L與 CD40結(jié)合后，還能刺激VCAM-1 的表達(dá)增加，引起白細(xì)胞與 IgE的結(jié)合，繼而引發(fā)變態(tài)反應(yīng)[10-11]。本研究比較了細(xì)菌性肺炎患兒與健康兒童，以及細(xì)菌性肺炎患兒中重癥患兒與非重癥患兒血清中CD40L、VCAM-1水平；同時(shí)還分析了兒童細(xì)菌性重癥患兒與非重癥患兒外周血T 淋巴細(xì)胞亞群和炎癥因子表達(dá)水平，旨在分析血清CD40L和VCAM-1表達(dá)變化與兒童細(xì)菌性肺炎嚴(yán)重程度之間的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年4月至2018年6月于本院住院的兒童細(xì)菌性肺炎患兒56例作為觀察組，其中包括非重癥肺炎組(30例)和重癥肺炎組(26例)，參考兒童重癥肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診[12-13]。觀察組患兒中男32例，女24例；年齡1～11歲，平均(6.82±2.23)歲。排除有以下情況的患兒[14]：(1)查明為肺外細(xì)菌感染；(2)并發(fā)心腦血管疾??；(3)既往患有免疫缺陷疾病；(4)多器官功能障礙；(5)呼吸道畸形。

在同一時(shí)間范圍內(nèi)選擇在院體檢健康的兒童36例為對(duì)照組，其中女童16例，男童20例；年齡1～11歲，平均(6.75±2.19)歲。兩組間基線資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本項(xiàng)目經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)后開(kāi)展，所有研究對(duì)象家長(zhǎng)均知情同意。

1.2 方法 清晨空腹抽取觀察組及對(duì)照組外周靜脈血4 mL，置于試管內(nèi)，2 500 r/min離心20 min后，分離上清液，置于-80℃超低溫冰箱中保存，以待檢測(cè)用。應(yīng)用ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定血清中CD40L和VCAM-水平，以及血清中炎性因子白細(xì)胞介素-6(interleukin 6, IL-6)、白細(xì)胞介素-8(interleukin 8, IL-8)和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor α, TNF-α)水平，檢測(cè)方法詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)；應(yīng)用流式細(xì)胞法對(duì)血清T細(xì)胞亞群表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) (1)檢測(cè)比較觀察組和對(duì)照組兒童血清CD40L和VCAM-1水平的差異；(2)檢測(cè)比較重癥肺炎組和非重癥肺炎組患兒血清CD40L和VCAM-1水平的差異；(3)檢測(cè)比較重癥肺炎組和非重癥肺炎組患兒T淋巴細(xì)胞亞群水平；(4)檢測(cè)比較重癥肺炎組和非重癥肺炎組患血清中炎性因子IL-6、IL-8 和TNF-α水平。

2 結(jié)果

2.1 血清 CD40L、VCAM-1 表達(dá)水平比較 觀察組患者血清CD40L、VCAM-1表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)，見(jiàn)表1。重癥肺炎組上述各指標(biāo)的表達(dá)水平也明顯比非重癥肺炎組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)，見(jiàn)表2。

表1 兩組間血清CD40L、VCAM-1表達(dá)水平比較

表2 觀察組兩亞組間CD40L、VCAM-1表達(dá)水平比較

2.2 重癥肺炎組與非重癥肺炎組T細(xì)胞亞群水平比較 見(jiàn)表3，重癥肺炎組患兒外周血淋巴細(xì)胞中的CD4+、CD8+、CD4+/CD8+細(xì)胞比值與非重癥肺炎組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 重癥肺炎組與非重癥肺炎組炎性因子表達(dá)水平比較 重癥肺炎組患兒血清中炎性因子IL-6、IL-8 和TNF-α表達(dá)水平均顯著高于非重癥肺炎組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表3 非重癥組與重癥組T細(xì)胞亞群水平表達(dá)情況比較

表4 觀察組兩亞組炎癥因子表達(dá)情況比較

3 討論

兒童細(xì)菌性肺炎在臨床上比較常見(jiàn)，是受到多種細(xì)菌感染所導(dǎo)致，如肺炎克雷伯桿菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等，均有可能引起細(xì)菌性肺炎的發(fā)生。兒童細(xì)菌性肺炎發(fā)病后，對(duì)患兒健康帶來(lái)的威脅極大，其也是導(dǎo)致兒童死亡的主要原因之一[15-16]。兒童細(xì)菌性肺炎的常見(jiàn)臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、乏力、肌肉酸痛，少數(shù)出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹脹、腹瀉等胃腸道癥狀，部分患兒有胸痛、驚厥、意識(shí)障礙等癥狀[17-18]。根據(jù)肺炎的嚴(yán)重程度，可將其分為重癥細(xì)菌性肺炎及非重癥細(xì)菌性肺炎。目前，對(duì)于兒童細(xì)菌性肺炎的發(fā)病機(jī)制尚不明確，主要認(rèn)為與機(jī)體免疫功能有密切關(guān)系[19]。近年來(lái)，有研究表明細(xì)菌性肺炎的感染與機(jī)體炎性標(biāo)志物、免疫細(xì)胞、炎性因子的表達(dá)變化有一定關(guān)系[20]。

免疫功能的低下和紊亂是兒童細(xì)菌性肺炎的主要致病機(jī)制之一，細(xì)菌性肺炎與機(jī)體的免疫應(yīng)答有著重要的聯(lián)系[21]。CD40是一種表面抗原，主要起著誘導(dǎo)抗原呈遞細(xì)胞、T細(xì)胞活化的作用，與其相應(yīng)受體CD40L共同參與機(jī)體免疫應(yīng)答，通過(guò)與配體CD40L結(jié)合激活A(yù)PC，進(jìn)而激活T細(xì)胞參與炎癥反應(yīng)，在免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用[22]。相關(guān)研究報(bào)道，CD40與 CD40L作為一對(duì)協(xié)同刺激因子，在細(xì)菌性肺炎患兒體內(nèi)能引起T細(xì)胞活化及機(jī)體炎性反應(yīng)的發(fā)生[23-24]。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常兒童相比，細(xì)菌性肺炎兒童血液中CD40L水平顯著升高，同時(shí)細(xì)菌性肺炎兒童中重癥患兒的CD40L水平較非重癥肺炎患兒也顯著升高。由此可知，兒童細(xì)菌性肺炎的發(fā)生與機(jī)體CD40L表達(dá)水平有一定的相關(guān)性，且隨著病情加重，CD40L表達(dá)水平會(huì)越高。推測(cè)當(dāng)細(xì)菌感染時(shí)，激活肺炎兒童機(jī)體CD40-CD40L系統(tǒng)信號(hào)分子，使CD40-CD40L參與和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫分子的過(guò)程[25]，會(huì)導(dǎo)致炎癥等反應(yīng)的發(fā)生。

目前主要認(rèn)為細(xì)菌性肺炎發(fā)病機(jī)制與呼吸道上皮細(xì)胞侵入和免疫作用有關(guān)，其病理過(guò)程涉及到微生物侵入和黏附作用等[26]。VCAM-1是一種重要的細(xì)胞黏附分子，由血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌產(chǎn)生，常作為一種判斷機(jī)體內(nèi)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的指標(biāo)[27]。機(jī)體內(nèi)VCAM-1表達(dá)升高提示機(jī)體血管內(nèi)皮細(xì)胞被激活，且VCAM-1表達(dá)水平的升高參與了白細(xì)胞與受損之間的相互作用，會(huì)促進(jìn)炎性因子的釋放及T細(xì)胞亞群的變化，進(jìn)一步影響疾病的發(fā)展。

本研究結(jié)果顯示，與正常兒童相比，細(xì)菌性肺炎兒童血液中VCAM-1水平顯著升高，并且在患有細(xì)菌性肺炎的兒童中重癥者血清中VCAM-1水平顯著高于非重癥者。研究提示血清VCAM-1含量對(duì)兒童細(xì)菌性肺炎嚴(yán)重程度有著直接的影響。同時(shí)細(xì)菌性肺炎兒童中重癥者外周血淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+以及CD4+/CD8+表達(dá)水平和血清中IL-6 、IL-8及TNF-α等炎性因子的表達(dá)水平也顯著高于非重癥肺者，提示兒童細(xì)菌性肺炎的免疫功能的紊亂及下降和機(jī)體內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷有關(guān)。由于兒童的呼吸系統(tǒng)脆弱及免疫功能低下，當(dāng)機(jī)體遭遇細(xì)菌感染時(shí)，會(huì)進(jìn)一步引起免疫功能抑制[28]，導(dǎo)致T細(xì)胞亞群變化及炎癥因子大量釋放，使體內(nèi)CD40L和VCAM-1表達(dá)水平升高，進(jìn)而導(dǎo)致病情加重。

綜上所述，兒童細(xì)菌性肺炎患兒的血清CD40L、VCAM-1水平會(huì)顯著上升，其表達(dá)水平與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，重癥細(xì)菌性肺炎患兒的CD40L、VCAM-1等指標(biāo)表達(dá)水更高，因此CD40L、VCAM-1等指標(biāo)的檢測(cè)對(duì)判斷治療效果及預(yù)后有重要意義。