金菊 丁小文 喬恩奇 張喜平*

目前，我國已成為乳腺癌發(fā)病率增長最快的國家之一［1］。美國癌癥統(tǒng)計(jì)研究報(bào)告，乳腺癌的發(fā)病率在女性惡性腫瘤中位居榜首［2］。乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)由多因素調(diào)控的復(fù)雜、動態(tài)過程，但其作用機(jī)制尚不清楚?；|(zhì)相互作用分子1（stim1）是一種鈣離子感受器，其可以刺激并激活Orai1分子，引起細(xì)胞外鈣離子流入，并且進(jìn)一步誘發(fā)相應(yīng)的細(xì)胞活動。stim1作為鈣離子調(diào)節(jié)感受器，對癌細(xì)胞的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移具有一定程度的促進(jìn)作用，其與腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移具有直接關(guān)系。由于不同的乳腺癌亞型的分子調(diào)節(jié)機(jī)制有所不同，作者推測stim1在不同亞型乳腺癌中的表達(dá)量也會有所區(qū)別。本文通過分析不同分子亞型無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中stim1表達(dá)水平，探討其在乳腺癌中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑 stim1抗體購置于Thermo Fisher公司（美國，貨號CDN3H4），Western blot檢測試劑盒（貨號KGP1201）、全蛋白抽提試劑盒（KGA902）、SDSPAGE凝膠配制試劑盒（KGP113）購自江蘇凱基生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.2 樣本來源 選擇2012年8月至2013年8本院腫瘤生物樣本庫中保存的經(jīng)手術(shù)當(dāng)天取材的無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的三陰性、Her-2陽性、Luminal A型、Luminal B型乳腺癌組織各5例。其中Luminal B型中ER（陽性）、PR（陽性）、Ki 67高表達(dá) 2例、ER（陽性）、PR（陽性）、Her-2（陽性）3例。所有患者年齡33～68歲，平均50.3歲；上述患者均通過病理學(xué)檢測診斷為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌，術(shù)前未進(jìn)行放化療及內(nèi)分泌治療。所有患者均實(shí)施相應(yīng)的乳腺癌改良或保乳根治術(shù)，收集了上述患者的乳腺癌腫瘤組織樣本，并放置于樣本庫中低溫保存，術(shù)后隨訪時(shí)間截止到2018年12月底。總生存（OS）指隨訪截止日期的時(shí)間或隨訪中出現(xiàn)死亡的時(shí)間；無復(fù)發(fā)生存（RFS）指隨訪中出現(xiàn)首次復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的時(shí)間。

1.3 方法 采用Western blot檢測stim1在不同分子亞型乳腺癌組織中的表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)方法如下：配制細(xì)胞裂解液、將制備的蛋白樣品與上樣緩沖液混合，并在100℃處理5min，每孔加載100μg細(xì)胞總蛋白，進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉，接著進(jìn)行一抗雜交、洗膜和二抗雜交和顯影。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 各組樣本stim1蛋白表達(dá)灰度分析采用單因素方差分析（one-way ANOVA），使用COX回歸分析，納入腫瘤的最大直徑、不同分子亞型、病理分期和stim1蛋白表達(dá)量為變量，分析這4個(gè)變量對患者OS和RFS的影響。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Stim1蛋白表達(dá)水平在三陰性乳腺癌組織中最高，Her-2陽性乳腺癌組織其次，Luminal A型乳腺癌組織最弱。與三陰性乳腺癌患者樣本相比，Her-2陽性乳腺癌組織中stim1蛋白表達(dá)有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；Luminal A型患者乳腺癌組織與Luminal B型患者乳腺癌組織中stim1蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.01）。與Her-2陽性乳腺癌組織相比，Luminal A型與Luminal B型乳腺癌組織stim1蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.01）。與Luminal A型乳腺癌組織相比，Luminal B型乳腺癌組織stim1蛋白表達(dá)雖然略有增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同分子亞型乳腺癌組織中腫瘤的最大直徑、病理分期和stim1蛋白表達(dá)量與OS和RFS無關(guān)，各指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表 1，圖 1、2。

表1 不同分子亞型乳腺癌組織stim1表達(dá)水平

圖1 各組樣本stim1蛋白表達(dá)條帶圖

圖2 各組樣本stim1蛋白表達(dá)灰度分析

3 討論

鈣離子（Ca2+）調(diào)節(jié)不平衡可誘發(fā)乳腺癌，促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展。stim1/Orai1在雌激素受體陰性（ERα-）的人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231中，對于SOCs和細(xì)胞遷移很重要。Orai3在雌激素受體陽性（ERα+）的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7中，表達(dá)顯著增加，stim1和Orai3對SOCs的調(diào)控起主導(dǎo)作用。因此，stim1與Orai相互作用與乳腺癌細(xì)胞分型直接相關(guān)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中Ca2+的減少導(dǎo)致stim1易位到質(zhì)膜下點(diǎn)狀突起，并激活Orai 1通道。ERα+乳腺癌細(xì)胞系中的SOCE由stim1/2和Orai3介導(dǎo)，而ERα-乳腺癌細(xì)胞則是經(jīng)典的stim1/Orai1途徑［3］。已發(fā)現(xiàn)stim1和Orai1在乳腺腫瘤細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移起重要作用，Stims和Orais有望成為癌癥治療的新靶點(diǎn)。

已發(fā)現(xiàn)stim和orai蛋白在較多惡性腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起著至關(guān)重要的作用，例如乳腺癌、前列腺癌等［4］。在多形性腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，stim1和Orai1的下調(diào)導(dǎo)致入侵的腫瘤細(xì)胞顯著減少。相比之下，敲除stim1和Orai1基因?qū)δX多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖幾乎無影響。這些結(jié)果表明，stim1和Orai1編碼SOCE和CRAC電流，并控制腦多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的侵襲［5］。一些研究人員發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌細(xì)胞系stim1表達(dá)升高，其在肝癌組織中的表達(dá)水平高于癌旁組織。有研究者提出stim1可作為檢測肝癌高轉(zhuǎn)移潛能的預(yù)后指標(biāo)，stim1具有作為轉(zhuǎn)移性肝癌新的分子靶點(diǎn)的治療潛力［6］。

本資料顯示，stim1蛋白表達(dá)水平在三陰性乳腺癌組織中最高，Her-2陽性乳腺癌次之，Luminal A型則最弱。Luminal A型與Luminal B型乳腺癌組織stim1蛋白表達(dá)水平明顯低于三陰性乳腺癌和Her-2陽性乳腺癌，而三陰性和Her-2陽性型乳腺癌又是預(yù)后最差的腫瘤。因此，作者認(rèn)為stim1的表達(dá)水平與乳腺癌惡性程度有關(guān)，其在乳腺癌發(fā)病機(jī)制中的作用有待進(jìn)一步闡明。