趙燕,楊文秀， 馮江龍

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 臨床醫(yī)學(xué)院 病理學(xué)教研室， 貴州 貴陽(yáng) 550004； 2.貴州省人民醫(yī)院 眼科， 貴州 貴陽(yáng) 550002)

黑色素瘤(malignant melanoma，MM)是起源于神經(jīng)嵴黑色素細(xì)胞、惡性程度較高的腫瘤，常見于皮膚、眼部及黏膜組織[1-2]，近年來發(fā)病率有不斷上升的趨勢(shì)[3]。MM起病隱匿、惡性程度高，易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移，目前尚無有效的系統(tǒng)治療方法，病死率較高[4-6]。因此，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療可以明顯提高M(jìn)M患者的生存率。由于MM的病理形態(tài)多樣、臨床特征往往缺乏特異性，極易造成誤診或漏診，因此探討MM免疫組織化學(xué)染色的診斷方法，是有望提高M(jìn)M患者早期診斷率和生存率的關(guān)鍵。多發(fā)性骨髓瘤癌基因(multiple myeloma，MUM1)是一種多發(fā)性骨髓瘤的相關(guān)基因，又稱干擾素調(diào)節(jié)因子4(interferon regulator 4,IRF4)，近年來發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)嵴和黑色素細(xì)胞中有表達(dá)[7]。已有研究顯示，IRF4的基因多態(tài)性與黑色素細(xì)胞的分化發(fā)育和色素形成有關(guān)[8-9]；研究認(rèn)為MM的發(fā)生發(fā)展涉及到多條信號(hào)通路的異常，IRF4基因多態(tài)性與這些信號(hào)通路的異常有關(guān)[10]。IRF4基因編碼的MUM1蛋白在MM細(xì)胞中表達(dá)，其表達(dá)與MM的其他免疫表型有不同程度的關(guān)聯(lián)，在原發(fā)和轉(zhuǎn)移性MM中表達(dá)也不同[11]。目前，IRF4基因多態(tài)性對(duì)黑色素細(xì)胞分化發(fā)育及MM的影響報(bào)道較多見，然而IRF4編碼的MUM1蛋白的表達(dá)與MM臨床病理特征的關(guān)系尚未見報(bào)道。因此，本研究通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)60例MM患者中MUM1蛋白表達(dá)，探討MUM1蛋白表達(dá)與MM臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年3月-2018年3月MM手術(shù)切除病例，按照MM2005年WHO的MM分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[12-13]，篩選出臨床病理資料相對(duì)完整的60例MM患者，男32例，女28例；年齡23～65歲，平均(43.2±2.39)歲；病程1～5年，平均(2.78±0.89)年；病變部位發(fā)生在皮膚31例，鼻腔黏膜15例，直腸4例，結(jié)腸5例，眼脈絡(luò)膜5例；既往史有黑痣史39例，外傷史10例和其他11例；臨床分期為Ⅰ、Ⅱ期40例，Ⅲ、Ⅳ期20例。以同期的腫瘤切緣正常組織60例作為對(duì)照組。

1.2 方法

1.2.1蘇木精—伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining，HE) 取手術(shù)切除的MM組織及腫瘤邊緣正常組織，石蠟包埋、切片厚3 μm，60 ℃烤片0.5 h，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?；Harris蘇木精染色，鹽酸酒精分化，氨水返藍(lán)，脫水，透明，封片。

1.2.2免疫組織化學(xué)兩步法(power vision “two-step histostaining” reagent，PV) 石蠟包埋組織切片厚3 μm，脫蠟、水化、消除內(nèi)源性過氧化物酶；采用乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)pH 9.0高壓熱修復(fù)，鏈霉菌親和素-過氧化物酶(streptavidin-perosidase ，SP)3步法，3,3′-二氨基聯(lián)苯胺(3,3-Diaminobenzidine，DAB)顯色，Harris蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片；MUM1(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，1∶50)為抗體，陽(yáng)性對(duì)照MUM1蛋白為活化B細(xì)胞型彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(activated B-cell type diffuse large B cell lymphoma，ABC-DLBCL)，用pH 7.0的0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline，PBS)代替一抗作為空白對(duì)照；每張切片隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野(400×)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比，MUM1蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞百分比<20%定為陰性，≥20%定為陽(yáng)性[14]。

1.2.3臨床病理特征信息收集 采用自制調(diào)查表收集患者的臨床病理特征，包括性別、年齡、吸煙與否、腫瘤位置、TNM分期、腫瘤分化、腫瘤轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)情況等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)(n)、率(%)表示，采用R×C列聯(lián)表的χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析。P<0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MM中MUM1蛋白表達(dá)

免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，MUM1陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞核，表現(xiàn)為細(xì)胞核的棕褐色顆粒狀信號(hào)，見圖1。MM組患者的MUM1蛋白陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，見表1。

圖1 MM患者皮膚、脈絡(luò)膜和直腸組織中MUM1蛋白的表達(dá)(400×)Fig.1 Expression of MUM1 in skin，choroidal and choroidal malignant melanoma

表1 兩種組織標(biāo)本中MUM1表達(dá)(n，%)Tab.1 Expression rate of MUM1 in different tissues

2.2 MUM1蛋白的表達(dá)與MM臨床病理特征的關(guān)系

MUM1蛋白陽(yáng)性組和陰性組之間的腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，或P<0.01)，但性別、年齡、吸煙、腫瘤直徑、TNM分期、腫瘤分化的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

3 討論

MM的發(fā)生系各種因素導(dǎo)致黑色素細(xì)胞增殖、失控，并不同程度地失去分化所致[15]。皮膚是MM的常見部位，主要表現(xiàn)有出血、瘙癢、壓痛、腫塊形成和潰瘍等，與遺傳、環(huán)境因素密切相關(guān)，如MM家族史、非典型痣、紅色頭發(fā)人種、日光暴曬等[16]。由于MM病理形態(tài)多樣且臨床特征也缺乏特異性，因此發(fā)現(xiàn)新的特異性和敏感性較高的MM鑒別診斷的免疫組化標(biāo)記指標(biāo)和預(yù)后評(píng)估相關(guān)因素具有重要的意義。本研究結(jié)果顯示MUM1蛋白在MM患者中高表達(dá)，且與對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，提示MUM1蛋白可以作為MM臨床病理診斷中免疫組化染色時(shí)的一種表型，聯(lián)合其他常用蛋白，能夠提高臨床診斷的特異性及敏感性。此外，本次研究結(jié)果還顯示，MM患者中MUM1蛋白陽(yáng)性組與陰性組之間腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，即MUM1陽(yáng)性表達(dá)的MM患者較陰性表達(dá)的患者發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的例數(shù)明顯增多，由此可以推測(cè)MUM1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與MM的不良預(yù)后有關(guān)，可能是MM預(yù)后評(píng)估的相關(guān)因素。

表2 MM患者M(jìn)UM1蛋白表達(dá)與其臨床病理特征之間的關(guān)系Tab.2 Relation between protein expression of MUM1 and clinicopathological characteristics

綜上所述，MUM1蛋白在MM中呈高表達(dá)，MUM1蛋白可以作為MM的診斷指標(biāo)之一。MM病例中，疾病的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移與MUM1蛋白的表達(dá)相關(guān)，據(jù)此有理由預(yù)測(cè)MUM1蛋白可以作為MM預(yù)后的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，可以更好地指導(dǎo)臨床預(yù)后評(píng)估。