田世馨，尚立娜，馬應全，張 城

(西北民族大學 醫(yī)學院，甘肅 蘭州 730030)

乳腺癌被認為是全世界女性患者的異質性癌癥[1].乳腺癌依賴腫瘤微環(huán)境生長，腫瘤微環(huán)境中的腫瘤相關巨噬細胞 (Tumor-associated macrophage，TAMs)是一種重要的炎癥細胞，其表面標志物CD163的浸潤與癌細胞的侵襲和轉移相關.真核細胞翻譯起始因子 4E ( eukaryotic translation initiationfactor 4E，eIF4E)是蛋白質翻譯起始復合物形成的關鍵因子，細胞中eIF4E在正常情況下呈低表達，而在多種癌癥中發(fā)生變化，包括肺癌、食管鱗狀細胞癌、鼻咽癌、胃癌、子宮肌瘤、乳腺癌等.eIF4E的過度表達參與細胞生長、細胞增殖、侵襲和細胞凋亡，并且與較差的存活率相關[2].目前，eIF4E的表達和腫瘤相關巨噬細胞的浸潤在乳腺癌中的關系很少報道.本研究采用免疫組化檢測CD163和eIF4E在乳腺癌中的表達，分析兩者在乳腺癌的表達與臨床病理特征，并探討兩者在乳腺癌中的關系.

1 資料和方法

1.1 一般資料

收集甘肅省腫瘤醫(yī)院病理科2016年至2018年的乳腺癌組織標本92例，經病理確診均為乳腺浸潤性導管癌.取癌旁正常乳腺組織標本74例，入組的患者均為女性，其中年齡在22～76歲.有淋巴結轉移28例，無淋巴結轉移64例；有神經侵犯10例，無神經侵犯82例；有脈管內癌栓13例，無脈管內癌栓79例；ki67低表達20例，ki67高表達72例.

1.2 主要試劑

eIF4E抗體(P-2)：sc-9976購自santacruz公司，按1∶100稀釋，CD163為鼠抗人單克隆抗體，按1∶100稀釋，快捷免疫組化試劑盒HRP(KIT-5920/5930)、PBS緩沖液、免疫組化筆、免疫組化抗原修復液、抗體稀釋液均購自邁新公司.

1.3 方法

采用Maxvision法進行免疫組化染色檢測eIF4E及CD163表達.所有標本均經中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，石蠟組織切片.具體操作步驟按試劑說明書進行.抗原修復采用高壓鍋高溫修復，DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封固，鏡下觀察.用已知的陽性片作陽性對照.

1.4 結果判定

CD163以巨噬細胞胞漿中染色呈棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色，eIF4E陽性表達定位于細胞漿，以細胞漿出現棕黃色顆粒為陽性細胞.隨機在高倍顯微鏡(×400)下取3個視野，根據顯色細胞的比例計分：0分(顯色癌細胞為0%)，1分(顯色細胞<10%)，2分(顯色細胞10%～49%)，3分(顯色細胞50%～79%)，4分(顯色細胞>80%).根據細胞染色強度計分：0分(癌細胞無顯色)，1分(淺黃色)，2分(棕黃色)，3分(黃褐色).兩種計分方法相加，所得結果為染色強度：0～1分為(-)，2～3分為弱陽(+)，4～5分為中陽(++)，6～7分為強陽(+++).

1.5 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 CD163和eIF4E在乳腺癌組織及癌旁正常乳腺組織中的表達情況

CD163與eIF4E在乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中表達的免疫組化結果見圖1.乳腺癌組織中CD163的表達量明顯高于癌旁正常乳腺組織，兩組間差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.001，圖2A).eIF4E在乳腺癌組織中的表達高于癌旁正常乳腺組織，兩組間差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.001，表1).

圖1 A.CD163在乳腺癌組織中高表達(×100);B.CD163在癌旁正常乳腺組織中低表達(×100);C．eIF4E在乳腺癌組織中高表達(×100);D.eIF4E在癌旁正常乳腺組織中陰性表達(×100)

注：**為P<0.001；BC為乳腺癌，paraneoplastic為癌旁乳腺組織

表1 eIF4E在乳腺癌和癌旁組織中的表達

2.2 eIF4E和CD163與TNBC臨床病理特征關系

CD163的表達情況與ki67的表達高低相關(P<0.05)(表2).

表2 eIF4E和CD163表達與臨床病理特征關系

2.3 乳腺癌組織中eIF4E和CD163表達的相關性

乳腺癌組織中eIF4E與CD163的表達呈正相關(r=0.273，P<0.05)，見圖2B.

3 討論

乳腺癌是來自乳腺終末導管小葉單元上皮的惡性腫瘤，是目前全世界女性最常見的惡性腫瘤之一.有研究顯示，乳腺癌患者腫瘤組織中巨噬細胞約占80%，同時伴有廣泛TAMs.腫瘤相關巨噬細胞與腫瘤細胞相互作用，改變細胞外基質，促進腫瘤細胞浸潤轉移.CD163被認為是一種高特異性的M2型腫瘤相關巨噬細胞標志物[3]，在非小細胞肺癌、卵巢癌、膀胱癌這些腫瘤中，CD163的表達越高，腫瘤的增殖和轉移能力就越強.Król等[4]研究顯示，犬乳腺癌組織中TAMs數量的增加與腫瘤轉移能力有關.在腫瘤模型中清除TAMs可以觀察到腫瘤的生長受到抑制[5].Klingen等[6]研究表明，CD163+TAMs 的存在與乳腺癌侵襲性征密切相關.本實驗采用免疫組化法檢測了乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中的CD163的表達.結果顯示，乳腺癌組織的CD163表達高于癌旁正常乳腺組織.結合臨床病理特征分析，CD163的表達與ki67的表達相關.ki67與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與細胞異常增殖密切相關，可有效評估腫瘤細胞增殖活性[7].而Tiainen等[8]研究發(fā)現，乳腺癌患者中M2樣巨噬細胞浸潤增加，高表達CD163分子，導致透明質酸的累積，促進人乳腺癌進展期間的炎癥反應.由此提示，CD163陽性腫瘤相關巨噬細胞的浸潤與乳腺癌的增殖、侵襲具有相關性.

在癌癥背景下，翻譯失調是核心，真核翻譯起始因子eIF4E是翻譯控制的關鍵，其致癌潛力嚴格依賴于上游MAPK相互作用激酶(Mnks)的絲氨酸209磷酸化[2].eIF4E的高表達與不良腫瘤相關并預測乳腺癌特異性存活率差[9].Norton等[10]檢測eIF4E在乳腺癌組織和正常乳腺組織中的表達情況，發(fā)現eIF4E在乳腺癌組織中呈高表達.而本實驗應用免疫組化法檢測了乳腺癌組織及癌旁正常乳腺組織中eIF4E的表達.結果顯示，乳腺癌組織中eIF4E的表達高于癌旁正常乳腺組織，表明eIF4E的表達升高引起蛋白水平升高.Graff[11]等通過分析轉染后72小時收獲的細胞，Western印跡評估eIF4E反義核苷酸介導培養(yǎng)的乳腺癌細胞中eIF4E蛋白的減少，使受eIF4E 調節(jié)的腫瘤相關蛋白表達下降，抑制腫瘤的生長等作用.有研究發(fā)現，eIF4E的高低抑制了細胞生長和遷移，增強了化學敏感性[12].我們的結果進一步發(fā)現，乳腺癌組織中eIF4E的表達與患者年齡、淋巴結轉移無顯著相關性.在呂紅瓊等[13]對75例乳腺癌和12例乳腺良性病變中eIF4E基因檢測發(fā)現，eIF4E的表達與有無腋淋巴結轉移、患者年齡、臨床分期均無關.ShengZhou[14]等檢測，原發(fā)性乳腺癌組織中eIF4E的表達與患者的年齡、淋巴結轉移、TNM分期之間無顯著相關性.這些研究與我們的結果相符，推測eIF4E在乳腺癌組織中與轉移暫無相關關系，是一個獨立的檢測因子.因此eIF4E可以作為乳腺癌治療的潛在靶點，而與乳腺癌的臨床病理特征的關系還需進一步研究.

eIF4E作為真核生物蛋白質合成翻譯中的關鍵因子，是多條信號通路中心的聚集點.它的激活，是AKT/mTOR信號通路磷酸化激活的一個關鍵下游事件[15]，而Jhaveri K[16]等發(fā)現，在炎性乳腺癌(IBC)患者腫瘤組織中，PI3K/mTOR通路被強烈激活，同時有強的浸潤性TAMS.由此可以推測，eIF4E與腫瘤相關巨噬細胞的浸潤在AKT/mTOR信號通路中起作用.我們的研究結果顯示，乳腺癌組織中eIF4E和CD163的表達呈正相關，可以推測兩者可能通過互相作用來促進乳腺癌的發(fā)生發(fā)展.

綜上所述，本研究發(fā)現CD163與eIF4E在乳腺癌組織中表達高于癌旁組織，兩者在乳腺癌組織中具有正相關性，提示CD163與eIF4E在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，但具體機制還有待進一步發(fā)現.