何長生 楊慶琳 王維 王倩 王軍 周迎春 沈艷 劉華 占松鶴 朱良強(qiáng)

摘要 [目的]調(diào)查安徽省豬圓環(huán)病毒的感染情況。[方法]2018年，采用熒光定量PCR方法對來自安徽省3個地區(qū)12個豬場健康豬群的239份扁桃體樣品進(jìn)行了PCV2和PCV3檢測。[結(jié)果] PCV2個體陽性率為67.4%（161/239）、群體陽性率為91.7%（11/12），PCV3個體陽性率為14.6%（35/239）、群體陽性率為58.3%（7/12），PCV2/PCV3混合感染個體陽性率為5.0%（12/239）、群體率陽性為41.7%（5/12）。不同生長階段、不同地區(qū)和不同規(guī)模的生豬PCV2、PCV3及PCV2/PCV3混合感染存在差異。育肥豬PCV2感染率最高（84.3%），能繁母豬PCV3感染率（51.9%）及PC2/PCV3混合感染率（14.8%）最高;C地區(qū)PCV2感染率最高（89.9%），B地區(qū)PCV3感染率（36.2%）及PC2/PCV3混合感染率最高（8.8%）;中型豬場PCV2感染率最高（82.2%），大型豬場PCV3感染率（38.3%）及PC2/PCV3混合感染率最高（10.0%）。[結(jié)論] 安徽省豬群中存在PCV2和PCV3流行，需引起足夠重視。

關(guān)鍵詞 豬圓環(huán)病毒;感染率;調(diào)查

中圖分類號 S852.65 +1文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 0517-6611（2019）17-0100-03

Abstract [Objective] To investigate the infection status of porcine circovirus in Anhui Province. [Method]In 2018， 239 tonsils samples were collected from 12 healthy pig herds in A， B and C regions of Anhui Province to detect the infection situations of PCV2 and PCV3 by realtime PCR.[Result]? The individual detection rate （IDR） of PCV2 was 67.4%（161/239 in overall samples， and IDR of PCV3 was 14.6%（35/239）， and the mixed IDR of PCV2 / PCV3 was 5.0%（12/239）. The herd detection rate （HDR） of PCV2 was 91.7% （11/12） in overall pig farms， HDR of PCV3 was 58.3%（7/12）， and the mixed HDR of PCV2 / PCV3 was 41.7%（5/12）. PCV2，PCV3 and PCV2/PCV3 mixed infection had difference in different scales of pig farms in different regions at different stages. Fattening pigs had the highest IDR of PCV2 （84.3%）， and fertile sows had the highest IDR of PCV3 （51.9%） and mixed IDR of PC2 /PCV3 （14.8%）. Region C had the highest IDR of PCV2（89.9%） ，and region B had the highest IDR of PCV3 （36.2%） and IDR of PCV2/ PCV3 （8.8%）. Mediumscale pig farms had the highest IDR of PCV2 （82.2%），and largescale pig farms had the highest IDR of PCV3 （38.3%）and IDR of PCV2 / PCV3 （10.0%）.? [Conclusion] There were PCV2 and PCV3 prevalence in Anhui Province， and we should paid more attentions to it.

Key words Porcine circovirus;Infection rate;Investigation

豬圓環(huán)病毒（porcine circovirus，PCV）隸屬圓環(huán)病毒科（Circovirdae）圓環(huán)病毒屬（Circovirus），為單股負(fù)鏈DNA病毒，是迄今發(fā)現(xiàn)最小的動物病毒之一，可感染鳥類、魚類、昆蟲和哺乳動物。2016年前，豬圓環(huán)病毒有2個亞型，即PCV1和PCV2[1]。PCV1被認(rèn)為是豬腎細(xì)胞PK-15污染物，但不產(chǎn)生細(xì)胞病變效應(yīng)，對豬沒有致病性[1]。PCV2可導(dǎo)致豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾?。╬orcine circovirus associated disease，PCVAD），包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）、豬皮炎與腎病綜合征（porcine dermatitis and nephropathy syndrome ，PDNS）、豬呼吸道綜合征（porcine respiratory disease complex，PRDC）、繁殖障礙（reproductive failure）等[1]。自1998年我國首次發(fā)現(xiàn)以來，PCV2在豬群中迅速蔓延開來，呈現(xiàn)出覆蓋面廣、感染率高等特征，已經(jīng)成為危害我國養(yǎng)豬業(yè)的主要疫病之一[2-3]。2016年，美國學(xué)者Palinski等[4]和Phan等[5]利用高通量測序方法從暴發(fā)PDNS病癥的母豬及其流產(chǎn)胎兒樣品中發(fā)現(xiàn)了一種新的圓環(huán)病毒亞型，即PCV3。自2017年以來，多位學(xué)者均發(fā)現(xiàn)該病原在我國豬群中存在[6-8]。為了解安徽省豬群中PCV2和PCV3的感染情況，2018年對來自安徽省A、B、C 3個地區(qū)的 12個豬場開展了調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

利用扁桃體采集器，無菌采集來自A、B、C 3個地區(qū)12個豬場健康豬群的239份扁桃體樣品（表1）。

1.2 主要試劑

PVC2熒光定量PCR檢測試劑盒和PVC3熒光定量PCR檢測試劑盒均購自北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司，批號分別為PCV220180208P和PCV320180419P;病毒核酸提取試劑盒購自廣州和實(shí)生物技術(shù)有限公司，批號為CZA00901。

1.3 主要儀器

熒光PCR儀（美國ABI，型號Stepone Plus）;全自動核酸提取儀（美國Thermo，型號KingFisher 96）;全自動樣品快速研磨儀（上海凈信，型號JXFSTPRP32）。

1.4 試驗(yàn)方法 采用熒光定量PCR方法進(jìn)行PCV2、PCV3檢測，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品總體檢測結(jié)果

由表2可知，在12個豬場239份扁桃體樣品中，PCV2個體陽性率為67.4%（161/239）、群體陽性率為91.7%（11/12），PCV3個體陽性率為14.6%（35/239）、群體陽性率為58.3%（7/12），PCV2/PCV3個體混合感染率為5.0%（12/239）、群體混合感染率為41.7%（5/12）。由此可見，豬群中存在PCV2和PCV3感染情況。

2.2 不同生長階段樣品檢測結(jié)果

將樣品按照保育豬、育肥豬、后備母豬、能繁母豬、種公豬5個生長階段歸類并進(jìn)行PCV2和PCV3檢測，結(jié)果表明5個生長階段均檢出PCV2陽性樣品，個體陽性率為36.1%～84.3%，其中育肥豬最高，為84.3%（118/140）;除保育豬外，其他生長階段生豬均檢出PCV3陽性樣品，個體陽性率為2.9%～51.9%，其中能繁母豬最高，為51.9%（14/27）;育肥豬、后備母豬、能繁母豬3個階段均同時檢出PCV2/PCV3陽性樣品，混合感染個體陽性率分別為2.1%（3/140）、13.9%（5/36）、14.8%（4/27）（表3）。由此可見，不同生長階段豬群均存在PCV2或PCV3感染現(xiàn)象，其中育肥豬PCV2感染最為嚴(yán)重，能繁母豬PCV3感染及PCV2/PCV3混合感染最為嚴(yán)重。

2.3 不同地區(qū)樣品檢測結(jié)果

將樣品按照A、B、C 3個地區(qū)歸類并進(jìn)行PCV2和PCV3檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)A、B、C 3個地區(qū)PCV2的個體陽性率分別為74.4%（67/90）、40.0%（32/80）和89.9%（62/69），PCV3個體陽性率分別為1.1%（1/90）、36.2%（29/80）和7.2%（5/69），PCV2/PCV3混合感染個體陽性率分別為0（0/90）、8.8%（7/80）和7.2%（5/69）（表4）。由此可見，A、B、C地區(qū)均存在PCV2和PCV3感染情況，C地區(qū)PCV2感染最為嚴(yán)重，B地區(qū)PCV3感染及PCV2/PCV3混合感染最為嚴(yán)重。

2.4 不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場樣品檢測結(jié)果

按照存欄量大小，將12個豬場劃分為小型豬場（存欄量≤1 000頭）、中型豬場（1 000頭<存欄量<5 000頭）、大型豬場（存欄量≥5 000頭）3種類型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小型、中型、大型豬場PCV2的個體陽性率分別為64.0%（57/89）、82.2%（74/90）和50.0%（30/60），PCV3個體陽性率分別為4.5%（4/89）、8.9%（8/90）和38.3%（23/60），PCV2/PCV3混合感染個體陽性率分別為1.1%（1/89）、5.6%（5/90）和10.0%（6/60）（表5）。由此可見，不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場均存在PCV2和PCV3感染情況，而中型豬場PCV2感染最為嚴(yán)重，大型豬場PCV3感染及PCV2/PCV3混合感染最為嚴(yán)重。

3 結(jié)論與討論

（1）此次調(diào)查的12個豬場PCV2個體陽性率為67.4%、群體陽性率為91.7%，其中保育豬、育肥豬、后備母豬、能繁母豬個體陽性率分別為53.1%、84.3%、36.1%和37.0%。 2017年，筆者對這12個豬場同樣開展了PVC2感染情況調(diào)查[9]，PCV2個體陽性率為11.8%、群體陽性率為53%，其中保育豬、育肥豬、后備母豬、能繁母豬個體陽性率分別為0、17.0%、16.0%和12.0%。與2017年相比，2018年P(guān)CV2感染率上升明顯。究其原因，一是由于豬場環(huán)境中存在PCV2，而豬場消毒等生物安全措施未到位，導(dǎo)致感染率上升;二是除了以水平傳播方式為主外，PCV2亦能通過精液和胎盤進(jìn)行垂直傳播，由于母豬群中持續(xù)存在PCV2隱性感染，它可以通過胎盤傳播給仔豬，因而導(dǎo)致豬群感染率上升。

（2）此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，12個豬場PCV3的個體陽性率為14.6%、群體陽性率為58.3%，其中保育豬、育肥豬、后備母豬、能繁母豬、種公豬個體陽性率分別為0、2.9%、44.4%、51.9%和25.0%，表明安徽省豬群中存在PCV3感染情況。這與劉曉東等[10]調(diào)查結(jié)果相同，他們從來自安徽、江西、山東10省（區(qū)）66個不穩(wěn)定豬場106份病料中檢測出18.0%的PCV3陽性樣品，其中安徽省豬場群體陽性率為33.3%（1/3）、個體陽性率為25.0%（1/4）。

（3）此次調(diào)查樣品來源可靠，數(shù)據(jù)真實(shí)準(zhǔn)確，真實(shí)反映了安徽省部分地區(qū)PCV2和PCV3感染狀況，為安徽省豬圓環(huán)病毒病的防控提供了科學(xué)數(shù)據(jù)。但受時間和人力的限制，此次調(diào)查選擇的場點(diǎn)較少，可能與全省實(shí)際情況存在差異。今后，應(yīng)持續(xù)開展PCV2和PCV3感染情況調(diào)查，增加調(diào)查場點(diǎn)數(shù)量，覆蓋到全省各地，準(zhǔn)確掌握豬圓環(huán)病毒在安徽省的流行趨勢，為全省豬圓環(huán)病毒病的防控工作提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 張永寧，梅琳，張舟，等.豬圓環(huán)病毒3型研究進(jìn)展[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2017，48（9）：89-96.

[2] 張志，郝占武，楊旭兵，等.豬圓環(huán)病毒3型半巢式PCR方法的建立和應(yīng)用[J].中國動物檢疫，2018，35（1）：81-84.

[3] 王憲文，杭柏林，王麗榮，等.豬圓環(huán)病毒2型的流行及防控新進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（7）：141-142.

[4] PALINSKI R，PIEYRO P，SHANG P C，et al.A novel porcine circovirus distantly related to known circovirus is associated with porcine dermatitis and nephropathy syndrome and reproductive failure[J].J Virlo，2016，91（1）：1-38.

[5] PHAN T G，GIANNITTI F，ROSSOW S，et al.Detection of novel circovirus PCV3 in pigs with cardiac and multisystemic inflammation[J].Virol J，2016，13：1-8.

[6] SHEN H，LIU X，ZHANG P，et al.Genome characterization of a porcine circovirus Type3 in south China[J].Transboundary and emerging disease，2018，65（1）：264-266.

[7] 孫明，馬君，喬明明，等.北京地區(qū)豬圓環(huán)病毒3型感染的檢測及基因組遺傳變異分析[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2018，49（10）：2261-2267.

[8] 張志，郝占武，張美晶，等.我國部分豬場豬圓環(huán)病毒3型流行病學(xué)調(diào)查[J].中國動物檢疫，2018，35（7）：1-5.

[9] 何長生，朱良強(qiáng)、王倩，等.安徽省部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型感染情況調(diào)查[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（11）：69-71.

[10] 劉曉東，楊旭兵，鄭慶禮，等.我國部分?。▍^(qū)）豬圓環(huán)病毒3型的分子流行病學(xué)研究[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2017，38（11）：18-21.