潘志宏，程鎏，聞立偉，曲韜，杜志娜

200041 上海，上海市靜安區(qū)江寧路街道社區(qū)衛(wèi)生服務中心 外科(潘志宏、程鎏、聞立偉)；200126 上海，上海市浦東新區(qū)楊思醫(yī)院 消化科(曲韜、杜志娜)

作為全球第5大常見癌癥及第3大癌性相關死亡原因，胃癌嚴重影響著人們的健康[1]。2015年統(tǒng)計結果顯示，新發(fā)浸潤型惡性腫瘤中胃癌僅次于肺癌，約67.9萬例[2]。早期胃癌的10年生存率可高達90%，而晚期胃癌的5年生存率低于30%，這意味著早期診斷有助于提升胃癌患者的總體預后[3]。目前，胃癌的早期診斷和預防主要依賴于胃鏡下組織活檢[4]，過程復雜且病人感受痛苦，在臨床應用上受到很大局限[5]。目前較為常用的胃癌早期診斷的腫瘤指標包括CEA、CA199及CA125,但其對胃癌的診斷靈敏度和特異度均較低，在胃癌早期診斷方面應用價值有限，因而，進一步深入研究新型胃癌特異性生物標記物具有重要的意義[6]。

近幾年隨著測序技術的進步，環(huán)狀RNA(circular RNAs,circRNAs)在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用逐漸受到越來越廣泛的關注。circRNAs是一種首先在RNA病毒中鑒定的非編碼RNA，是通過將3′和5′末端共價鍵連接而產生[7-8]。近幾年測序技術發(fā)展，使得circRNAs成為研究熱點[9]。circRNAs發(fā)揮生物學作用方式多樣：(1)吸附miRNA；(2)吸附蛋白；(3)調節(jié)轉錄；(4)選擇性剪接；(5)調節(jié)細胞周期；(6)調節(jié)親本基因翻譯等[10-11]。有研究提示，在腫瘤組織中存在circRNAs的異常表達，并在腫瘤細胞生長、凋亡、侵襲、轉移、耐藥方面發(fā)揮著重要作用。circRNAs具有獨特的分子結構和多樣的生物學性能，circRNAs表達穩(wěn)定，不易被降解，其較長的半衰期有利于circRNAs在人體內的富集，檢測結果更加真實準確，這也為利用circRNAs作為診斷標記物帶來優(yōu)勢。Wang等[12]對circRNAs在肝癌中診斷敏感性和特異性進行meta分析，結果提示circRNAs在肝癌診斷方面具有潛在應用價值。許多研究表明，circRNAs在胃癌組織及癌旁組織中存在表達差異，與腫瘤的TNM分期具有相關性，在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著一定的作用。但是，目前尚沒有circRNAs作為胃癌診斷標記物的meta分析。本文旨在對circRNAs表達差異與胃癌診斷準確性的關系進行meta分析，評估circRNAs作為胃癌診斷標記物的臨床價值，為胃癌的診斷提供有力參考。

1 材料與方法

1.1 文獻檢索

1.1.1 外文數(shù)據(jù)庫 包括PubMed，Web of Science等數(shù)據(jù)庫，中文數(shù)據(jù)庫包括萬方、中國知網等數(shù)據(jù)庫。

1.1.2 檢索關鍵詞 中文檢索詞為“環(huán)狀RNAs”、“胃癌”，英文檢索詞為“circular RNAs”、“gastric cancer”。

1.1.3 檢索年限 2015年1月至2018年11月的中英文文獻。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準 ①研究分析circRNAs表達與胃癌的關系；②從原始數(shù)據(jù)中提取到circRNAs表達差異對胃癌診斷準確性的靈敏度、特異度和曲線下面積值(area under the curve,AUC)；③檢測對象為胃癌組織和癌旁或正常組織中提取的circRNAs；④文獻已在專業(yè)期刊發(fā)表。

1.2.2 排除標準 ①研究對象不是患者；②沒有對照研究；③文獻類型為綜述、meta分析；④檢索對象為體液中的circRNAs；⑤重復的文獻。

1.3 文獻篩選、資料提取及質量評價

由兩名工作人員根據(jù)既定檢索策略以及納入和排除標準，篩選相關文獻，提取相關數(shù)據(jù)，主要包括第一作者、發(fā)表年份、樣本數(shù)量、靈敏度、特異度、AUC，計算tp、fp、fn、tn，如遇分歧討論解決。應用QUADAS-2系統(tǒng)對最終納入meta分析的文獻進行質量評價。

1.4 統(tǒng)計學處理

1.5 應用Stata 15.0軟件分析circRNAs差異性表達與胃癌診斷的關系，計算合并靈敏度、特異度、陽性似然比、陰性似然比、診斷優(yōu)勢比，根據(jù)接受者操作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲線計算AUC，應用Deek’s漏斗圖評價發(fā)表偏倚。

2 結 果

2.1 文獻檢索結果

檢索流程如圖1所示，最終共納入13篇文獻[11,13-24]，包括1 394名患者。

2.2 納入文獻基本特征

總結13篇被納入文獻基本特征，包括第一作者、發(fā)表年份、國家、樣本量、診斷指標(敏感度、特異度、AUC)、樣本類型、檢測方法、circRNAs表達，詳細見表1。應用QUADAS-2評分系統(tǒng)評價文獻質量。結果提示所納入的研究具有較好的方法學質量，發(fā)生偏倚的可能性較低, 見圖2。

圖1 Meta分析文獻檢索流程圖

Figure1.FlowChartofDocumentRetrievalforMeta-Analysis

表1 13篇被納入文獻基本特征

Table 1. Characteristics of 13 Included Articles

CircRNAFirst authorYearSample sizeCancer tissueControl tissueSensitivitySpecificityAUCCutoff valueHsa_circ_0000745Mei Huang201760600.8550.450.683-Hsa_circ_0000190Shijun Chen20171041040.7210.6830.756.83Hsa circ 0074362Yi Xie20171271270.8430.3620.6312.17Hsa_circ_0003159Mengqian Tian20171081080.8520.5250.7512.31Hsa_circ_0001895 Yongfu Shao201796650.6780.8570.7929.53Hsa_circ_0000520 Handong Sun201856560.5360.8570.613-CircPVRL3Handong Sun201862620.9030.5640.763-Hsa_circ_0006633 Guoliang Ye201796960.6010.8130.7418.17Hsa_circ_00001649Wenhan Li201776760.7110.8160.8340.22Hsa_circ_0000096Peifei Li20171011010.880.560.8212.9Hsa_circ_0000705Yongfu Shao20173113110.6460.6980.7199.125Hsa_circ_002059Peifei Li20151011010.810.620.7312.9Hsa_circ_0014717Yongfu Shao201796960.5940.8130.69612.14

AUC: area under the curve.

2.3 Meta分析結果

2.3.1 合并效應量 circRNAs作為胃癌診斷標記物的合并敏感度、合并特異度、合并陽性似然比、合并陰性似然比、合并診斷優(yōu)勢比及各自的95%可信區(qū)間分別為0.70(95%CI 0.66～0.75)、0.72(95%CI 0.68～0.75)(圖3)、2.52(95%CI 2.16～2.94)、0.39(95%CI 0.31～0.49)(圖4)、6.46(95%CI 5.22～7.89)(圖5)，合并診斷性能AUC及95%可信區(qū)間為0.77(95%CI 0.73～0.80)(圖6)。

2.3.2 納入文獻的異質性檢驗 如圖7，13篇文獻11篇位于中心區(qū)域，2篇位于區(qū)域外，提示研究間異質性較小。

2.4 發(fā)表偏倚分析

Deek’s漏斗圖(圖8)斜率系數(shù)P值為0.028(P<0.10)，提示發(fā)表偏倚存在的可能性極小。

圖2 文獻質量評價(QUADAS-2評分系統(tǒng))

Figure2.LiteratureEvaluation(QUADAS-2ScoringSystem)

圖3 環(huán)狀RNAs作為胃癌診斷標記物的合并靈敏度及特異度的分析

Figure3.PooledSensitivityandSpecificityofCircularRNAsasDiagnosticMarkersforGastricCancer

圖4 環(huán)狀RNAs作為胃癌診斷標記物的合并似然比的分析

Figure4.PooledLikelihoodRatioofCircularRNAsasDiagnosticMarkersforGastricCancer

圖5 環(huán)狀RNAs作為胃癌診斷標記物的診斷比值比分析

Figure5.DiagnosticOddsRatioofCircularRNAsasDiagnosticMarkersforGastricCancer

圖6 環(huán)狀RNAs作為胃癌診斷標記物的ROC曲線

Figure6.ReceiverOperatingCharacteristicCurveofCircularRNAsasDiagnosticMarkersforGastricCancer

圖7 納入13篇文獻的異質性檢驗

Figure7.HeterogeneityTestof13Articles

圖8 納入13篇文獻的Deek’s漏斗圖分析

Figure8.Deek’sFunnelPlotAsymmetryTestof13Articles

3 討 論

近年來，胃癌的診療手段有了一定程度的豐富，但進展期胃癌患者的總體預后仍然較差。而胃癌早期發(fā)現(xiàn)是提高患者預后的重要舉措。因而研究用于胃癌診斷的特異性marker，具有重要的臨床應用價值[25]。

近年來的科學研究發(fā)現(xiàn)，circRNAs在腫瘤發(fā)生發(fā)展中也扮演著一定的角色，并且因其特有的環(huán)狀結構而擁有較好的穩(wěn)定性，可在人體內蓄積，具有作為腫瘤診斷標記物的價值。目前，已有幾項研究探索了外周血找特定circRNAs用于胃癌診斷效能的研究，初步提示了circRNAs在胃癌診斷方面的潛在應用價值[26]。進一步的，關于circRNAs在胃癌診斷效能方面的meta分析尚未見報道。

本研究通過檢索文獻，并經過入、排標準篩選后，共納入13篇研究circRNAs在胃癌診斷價值的文章。文獻檢索、納入、排除和數(shù)據(jù)的提取分別由兩名研究者進行，避免選擇偏倚。所納入的文獻依據(jù)QUADAS-2評分系統(tǒng)進行質量評價，結果提示所納入的研究具有較好的方法學質量，發(fā)生偏倚的可能性較低。納入文獻異質性分析結果提示所納入的研究間異質性較小。發(fā)表偏倚分析結果也提示各研究間存在發(fā)表偏倚的可能性較低。

我們對這13篇文獻中circRNAs作為生物標記物對胃癌診斷效率進行了分析，其合并敏感度、合并特異度、合并陽性似然比、合并陰性似然比、合并診斷優(yōu)勢比及各自的95%可信區(qū)間分別為0.70(95%CI: 0.66～0.75)、0.72(95%CI: 0.68～0.75)、2.52(95%CI: 2.16～2.94)、0.39(95%CI: 0.31～0.49)、6.46(95%CI: 5.22～7.89)，合并診斷效能AUC及95%可信區(qū)間為0.77(95%CI: 0.73～0.80)，結果提示circRNAs適合作為胃癌診斷性生物標記物。在入選的文獻中，circRNAs Hsa_circ_00001649(AUC：0.83；敏感度：0.71；特異度：0.82)和hsa_circ_0000096(AUC：0.82；敏感度：0.88；特異度：0.56)表現(xiàn)出了較高的診斷效率。circRNAs可作為胃癌診斷性生物標記物，circRNAs差異表達的檢測具有早期診斷胃癌的發(fā)展?jié)摿?，且無創(chuàng)、無放射風險，circRNAs作為胃癌預后診斷標記物的價值值得進一步研究。

然而，本研究尚有一些不足之處：(1)缺乏無病者對比數(shù)據(jù)；(2)樣本量有限，需要進一步擴大樣本量以增加準確性；(3)由于檢測方法不同或為提高準確性，我們排除了一些實驗研究。隨著RNA檢測技術不斷成熟，不久的將來，快速、準確、廉價的circRNAs檢測技術即有可能應用于胃癌的臨床早期診斷。

作者聲明：本文全部作者對于研究和撰寫的論文出現(xiàn)的不端行為承擔相應責任；并承諾論文中涉及的原始圖片、數(shù)據(jù)資料等已按照有關規(guī)定保存，可接受核查。

學術不端：本文在初審、返修及出版前均通過中國知網(CNKI)科技期刊學術不端文獻檢測系統(tǒng)的學術不端檢測。

同行評議：經同行專家雙盲外審，達到刊發(fā)要求。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

文章版權：本文出版前已與全體作者簽署了論文授權書等協(xié)議。