宋曉華　張江國　呂紅

【摘要】 目的：探討葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1（Glut-1）及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在結(jié)腸癌中的表達(dá)及與臨床指標(biāo)的關(guān)系。方法：選取2015年1月-2019年1月深圳市蛇口人民醫(yī)院腫瘤科收治的42例結(jié)腸癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢驗(yàn)Glut-1、VEGF在結(jié)腸癌中的表達(dá)及與臨床指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果：VEGF表達(dá)與腫瘤大小和臨床分期均無關(guān)（P>0.05），而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度均有關(guān)（P<0.05）。Glut-1表達(dá)與腫瘤大小和分化程度均無關(guān)（P>0.05），與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：結(jié)腸癌患者的VEGF表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度明顯相關(guān)，Glut-1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1; 血管內(nèi)皮生長因子; 結(jié)腸癌; 表達(dá)

Expression of Glut-1 and Vascular Endothelial Growth Factor in Colon Cancer and Their Relationship with Clinical Markers/SONG Xiaohua，ZHANG Jiangguo，LYU Hong.//Medical Innovation of China，2019，16（22）：0-048

【Abstract】 Objective：To investigate the expression of Glut-1 and vascular endothelial growth factor（VEGF）in colon cancer and their relationship with clinical parameters.Method：42 cases of colon cancer were selected from January 2015 to January 2019 in Department of Oncology，Shenzhen Shekou Peoples Hospital.The expression of Glut-1 and VEGF in colon cancer and their relationship with clinical indicators were examined by immunohistochemical staining.Result：VEGF expression was not correlated with tumor size and clinical stage（P>0.05），but correlated with the differentiation degree of lymph node metastasis（P<0.05）.The expressions of glut-1 were not correlated with tumor size and differentiation degree（P>0.05），but with clinical staging and lymph node metastasis（P<0.05）.Conclusion：The expression of vascular endothelial growth factor in patients with colon cancer is significantly correlated with lymph node metastasis and differentiation，and the expression of Glut-1 is correlated with lymph node metastasis and clinical stage.

【Key words】 Glucose transporter-1; Vascular endothelial growth factor; Colon cancer; Expression

First-authors address：Shenzhen Shekou Peoples Hospital，Shenzhen 518000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.22.012

結(jié)腸癌（colon cancer）在腫瘤科中屬常見、多發(fā)疾病，是主要發(fā)生于結(jié)腸部位的消化道惡性腫瘤。據(jù)全國腫瘤登記中心最新數(shù)據(jù)顯示，目前結(jié)腸癌的發(fā)病率依舊居全國惡性腫瘤前列，較高的發(fā)病率與死亡率嚴(yán)重威脅人們的生命健康。據(jù)統(tǒng)計(jì)，結(jié)腸癌的好發(fā)部位主要在直腸、乙狀結(jié)腸結(jié)合部，另外橫結(jié)腸、盲腸末端以及升結(jié)腸下部等也是結(jié)腸癌的好發(fā)部位。近年來，大量臨床研究證實(shí)，腫瘤的過快增長常導(dǎo)致葡萄糖利用和攝取量遞增，使葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1（glucosetransporter 1，Glut-1）表達(dá)上調(diào)，而為獲得相應(yīng)的營養(yǎng)供應(yīng)，更多的葡萄糖又會被轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)[1]。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是常見的多肽聚合物，其功能極為強(qiáng)大，文獻(xiàn)[2]報(bào)道在特定體液環(huán)境下，內(nèi)皮細(xì)胞特定會受VEGF的誘導(dǎo)作用而分裂增殖和轉(zhuǎn)移正常的內(nèi)皮細(xì)胞或使內(nèi)皮細(xì)胞不正常分裂增殖和轉(zhuǎn)移。借此，本文將采用免疫組化方法對結(jié)腸癌的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測，分析Glut-1、VEGF與臨床病例參數(shù)的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015年1月-2019年1月廣東省深圳市南山區(qū)蛇口人民醫(yī)院腫瘤科收治的42例結(jié)腸癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本，所有標(biāo)本均經(jīng)雙盲法復(fù)診確定。在42例結(jié)腸癌標(biāo)本中，男21例，女21例，年齡32～80歲，平均（55.0±2.5）歲。

1.2 儀器與方法

1.2.1 主要儀器及試劑 （1）儀器：Galanz醫(yī)用微波爐（英國）、Thermo自動(dòng)脫水機(jī)（英國）、Autostainer 480免疫組化染色儀（美國）、Olympus照相顯微鏡（日本）等;（2）試劑：CST兔抗人VEGF單克隆抗體（美國）、Glut-1抗體（Santa Cruz公司）、氚標(biāo)-葡萄糖（中國原子能研究所）、MTT溶液（Sigma公司）。

1.2.2 染色方法 （1）將石蠟切片保持在36 ℃環(huán)境下烘烤2 h，然后用二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水，在37℃的過氧化氫（H2O2）溶液中孵10 min，接著用磷酸緩沖鹽溶液（PBS）沖洗3次，5 min/次。（2）將其置入1 000 mL枸櫞酸（Citric Acid）緩沖液中煮沸（95 ℃）15～20 min，自然冷卻（>20 min）后用冷水沖洗缸子，然后降溫冷卻至常溫后再用磷酸緩沖鹽溶液沖洗3次，5 min/次。（3）使用正常羊血清工作液將其封閉在37 ℃環(huán)境下10 min，滴加一抗后放置在冰箱（4 ℃）孵育過夜，使用磷酸緩沖鹽溶液沖洗3次，5 min/次（PBS緩沖液代替一抗作陰性對照）;接著滴加生物素標(biāo)記二抗，并在37 ℃環(huán)境下孵育0.5 h，磷酸緩沖鹽溶液沖洗3次，5 min/次;滴加辣根過氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，在37 ℃環(huán)境下孵育0.5 h，用磷酸緩沖鹽溶液沖洗3次，5 min/次。（4）DAB/過氧化氫（H2O2）反應(yīng)染色，接著用自來水沖洗后使用蘇木素復(fù)染，最后常規(guī)脫水、透明干燥、封片和攝片。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察VEGF表達(dá)與各項(xiàng)臨床指標(biāo)的關(guān)系，Glut-1表達(dá)與各項(xiàng)臨床指標(biāo)的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 21.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VEGF表達(dá)與各項(xiàng)臨床指標(biāo)的關(guān)系 VEGF表達(dá)與腫瘤大小和臨床分期均無關(guān)（P>0.05），而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度均有關(guān)（P<0.05），見表1。

2.2 Glut-1表達(dá)與各項(xiàng)臨床指標(biāo)的關(guān)系 Glut-1表達(dá)與腫瘤大小和分化程度均無關(guān)（P>0.05），Glut-1表達(dá)與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)（P<0.05），見表2。

3 討論

近年來，某腫瘤微環(huán)境的相關(guān)研究指出，大部分腫瘤患者的病理組織學(xué)特征常出現(xiàn)在低氧組織區(qū)域，且隨著腫瘤的不斷生長，腫瘤的惡性程度也會隨之遞增[3-5]。而造成這種惡性表型生長的重要因素則與低氧微環(huán)境中存活的HIF-1調(diào)控腫瘤細(xì)胞相關(guān)，其中HIF-1下游基因中所包含的Glut-1及VEGF兩種糖酵解代謝相關(guān)基因又與腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移和腫瘤新生血管形成息息相關(guān)[6-10]。

通常情況下，Glut-1是廣泛分布于血腦屏障的內(nèi)皮細(xì)胞和紅細(xì)胞等正常組織中，它作為葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族中的重要組成成員之一，在許多惡性腫瘤中均有過表達(dá)，文獻(xiàn)[11-15]報(bào)道其與腫瘤的轉(zhuǎn)移、臨床分期和預(yù)后密切相關(guān)，這在結(jié)腸癌中同樣有體現(xiàn)。本研究中，VEGF表達(dá)與腫瘤大小和臨床分期均無關(guān)（P>0.05），而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度有關(guān)（P<0.05）;Glut-1表達(dá)與腫瘤大小和分化程度均無關(guān)（P>0.05），Glut-1表達(dá)與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)（P<0.05）。結(jié)合實(shí)際情況來看，這可能是不同的抗體濃度、實(shí)驗(yàn)方法、結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)等誤差造成的，但Glut-1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常組織[16-20]。大量臨床研究數(shù)據(jù)表明，新生血管的形成是實(shí)體腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的重要步驟，當(dāng)最初的實(shí)體腫瘤細(xì)胞生長到小集落時(shí)（通暢情況下，體積<1 mm3），它的生長與存貨則與其促進(jìn)血管生成和適應(yīng)缺氧環(huán)境的能力相關(guān)。VEGF可通過酪氨酸激酶受體調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和增殖及改變新生血管通透性而為腫瘤提供營養(yǎng)，促進(jìn)新生癌組織的血流灌注，增強(qiáng)癌細(xì)胞的增殖活性。本研究中，VEGF表達(dá)與腫瘤大小與臨床分期均無關(guān)（P>0.05），而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度均有關(guān)（P<0.05），提示VEGF在結(jié)腸癌發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用。

結(jié)腸癌患者的VEGF表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度明顯相關(guān)，Glut-1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)。

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（收稿日期：2019-03-20） （本文編輯：張爽）