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        Survivin和PCAF在食管癌組織中的表達(dá)以及臨床意義

        2019-09-27 11:56:48梁宗英侯繼申張樂張志民趙寶山孫光蕊辛國華
        中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新 2019年20期
        關(guān)鍵詞:臨床意義食管癌

        梁宗英 侯繼申 張樂 張志民 趙寶山 孫光蕊 辛國華

        【摘要】 目的:探討Survivin和PCAF在食管癌中的表達(dá)及與臨床病理特征之間的關(guān)系。方法:采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)90例食管癌組織和40例正常組織中Survivin和PCAF的蛋白表達(dá)水平,分析其與患者臨床病理特征的關(guān)系及Survivin和PCAF在食管癌中表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果:Survivin陽性表達(dá)在癌組織中為73.33%,明顯高于正常組織的5.00%(P<0.05)。PCAF陰性表達(dá)在癌組織中為65.56%,高于在正常組織中的7.50%(P<0.05)。Survivin蛋白高表達(dá)與患者性別、年齡和腫瘤大小均無關(guān)(P>0.05),與TNM分期、腫瘤浸潤深度、腫瘤分化程度和淋巴是否轉(zhuǎn)移均有關(guān)(P<0.05)。PCAF的陰性表達(dá)或低表達(dá)與患者性別、年齡、TNM分期、腫瘤浸潤深度、腫瘤大小以及淋巴是否轉(zhuǎn)移均無關(guān)(P>0.05),與腫瘤的分化程度有關(guān)(P<0.05)。Survivin和PCAF在食管癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=0.113,P<0.05)。

        結(jié)論:Survivin表達(dá)水平與腫瘤的分期、分化程度、浸潤深度及淋巴轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān),PCAF表達(dá)水平與腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)。Survivin和PCAF在食管癌中的表達(dá)具有明顯相關(guān)性,聯(lián)合兩者可能在食管癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后等方面發(fā)揮協(xié)同作用。

        【關(guān)鍵詞】 Survivin; PCAF; 食管癌; 臨床意義

        The Expression of Survivin and PCAF in Esophageal Carcinomaand Its Clinical Significance/LIANG Zongying,HOU Jishen,ZHANG Le,et al.//Medical Innovation of China,2019,16(20):122-126

        【Abstract】 Objective:To explore the relationship between Survivin and PCAF expression and clinicopathologic features in esophageal carcinoma.Method:Immunohistochemical staining was used to detect the expression of Survivin and PCAF in 90 cases of esophageal squamous cell carcinoma and 40 cases of normal esophageal carcinoma.The relationship between Survivin and PCAF expression in esophageal carcinoma and its clinicopathological features was analyzed.Result:The positive expression of Survivin was 73.33% in cancer tissues,which was significantly higher than 5.00% in normal tissues(P<0.05).The negative expression of PCAF was 65.56% in cancer tissues,which was higher than 7.50% in normal tissues(P<0.05).The expression of Survivin protein was not correlated with clinicopathological features,such as sex,age and tumor size(P>0.05),but it was related with clinicopathological features,such as TNM stage,depth of tumor infiltration,tumor differentiation and lymphatic metastasis(P<0.05).There were no significant differences in the negative expression or low expression of PCAF between the sex,age,TNM stage,depth of tumor invasion,tumor size and lymphatic metastasis(P>0.05),but there was significant difference between PCAF protein and tumor differentiation(P<0.05).The expression of survivin and PCAF in esophageal carcinoma was negatively correlated(r=0.113,P<0.05).Conclusion:Survivin expression level is positively correlated with tumor stage,differentiation degree,invasion depth and lymph node metastasis,PCAF expression level is negatively correlated with tumor differentiation degree,Survivin and PCAF expression level are significantly correlated in esophageal cancer,combined with them,they may play a synergistic role in the occurrence,development,metastasis and prognosis of esophageal cancer.

        【Key words】 Survivin; PCAF; Esophageal cancer; Clinical significance

        First-authors address:The Affiliated Hospital of Chengde Medical College,Chengde 067000,China

        doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2019.20.032

        食管癌是我國常見的消化系統(tǒng)腫瘤之一,發(fā)病率和死亡率均居世界第一位[1-3]。食管癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療是改善預(yù)后最有效的方法,因此尋找早期診斷、病情監(jiān)測(cè)和判斷預(yù)后敏感有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)成為近年來研究重點(diǎn)。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多途徑、多種癌基因激活和抑癌基因失活的漸進(jìn)過程,異常的基因以及蛋白的表達(dá)在其中起著關(guān)鍵作用。近年隨著分子生物學(xué)發(fā)展,對(duì)食管癌的癌基因和抑癌基因研究的不斷深入,使醫(yī)生能夠從蛋白水平、分子水平重新認(rèn)識(shí)食管癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后。越來越多的研究表明,在多種腫瘤組織中高表達(dá)的凋亡抑制蛋白存活素(Survivin)、低表達(dá)甚至不表達(dá)的PCAF參與了腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移和血管生成[4-8]。但迄今為止,Survivin和PCAF在食管癌發(fā)生發(fā)展過程中是否存在協(xié)同作用尚無文獻(xiàn)闡明。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)了Survivin和PCAF蛋白在90例食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá),分析其與食管癌人口學(xué)特征、分化程度、TNM分期、腫瘤侵襲性、淋巴轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系以及兩者在其中的協(xié)同作用,為食管癌的早期診斷和臨床上制定治療方案提供依據(jù)?,F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 收集2016年2月-2018年2月承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胸外科食管癌手術(shù)切除90例作為食管癌組,其病理類型全部為鱗狀細(xì)胞癌。入選標(biāo)準(zhǔn):所有患者的臨床資料完整;均為首發(fā)病例;所有患者術(shù)前均無化療、放療以及免疫治療史。其中男54例,女36例;年齡38~72歲,平均(59.23±3.69)歲;≥60歲59例,<60歲31例;TNM分期:Ⅰ期21例,Ⅱ期41例,Ⅲ期28例;細(xì)胞分化程度高、中、低分別為34、31、25例;有淋巴轉(zhuǎn)移54例,無淋巴轉(zhuǎn)移36例;腫瘤浸潤程度:淺層29例,深層61例;腫瘤大?。?5 cm 48例,≥5 cm 42例。另選取90例患者中的40例作為對(duì)照組,對(duì)照組組織兩殘端距癌組織6 cm以上病理證實(shí)為正常鱗狀上皮組織。

        1.2 方法 石蠟塊5 μm切片經(jīng)二甲苯脫蠟水化、枸櫞酸鹽抗與修復(fù)、H2O2浸潤、PBS沖洗、山羊血清封閉后,Ⅰ抗溫育,Ⅱ抗溫育,中間PBS洗滌,DAB顯色、蘇木素染色,酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。兔抗人BIRC5/Survivin單克隆抗體購自上海威奧生物科技有限公司,鼠抗人PCAF單克隆抗體購自上海煊翎生物科技有限公司,SP試劑盒購自北京諾博來德科技有限公司。

        1.3 結(jié)果判定 400倍光鏡隨機(jī)選10個(gè)高倍視野,每視野數(shù)100個(gè)細(xì)胞,Survivin陽性結(jié)果:胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或棕黃色染色為陽性細(xì)胞,陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的百分比>10%;PCAF陽性結(jié)果:胞質(zhì)和胞核出現(xiàn)棕黃色或棕褐色為顆粒陽性細(xì)胞,陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的百分比≥10%。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,Survivin和PCAF陽性表達(dá)、年齡、性別、腫瘤大小、TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移等計(jì)數(shù)資料,以率(%)表示,比較采用字2檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Kappa一致性檢驗(yàn)和Pearson,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 Survivin和PCAF蛋白在食管癌和正常組織中的表達(dá) Survivin在食管癌組織中表達(dá)的陽性率為73.33%,高于在正常組織中的5.00%(P<0.05)。PCAF在食管癌組織中的陰性表達(dá)率為65.56%,明顯高于在正常食管組織中的7.50%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

        2.2 Survivin和PACF的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性 Survivin蛋白高表達(dá)與患者性別、年齡和腫瘤大小均無關(guān)(P>0.05),與TNM分期、腫瘤浸潤深度、腫瘤分化程度和淋巴是否轉(zhuǎn)移均有關(guān)(P<0.05);PCAF的陰性表達(dá)或低表達(dá)與患者性別、年齡、TNM分期、腫瘤浸潤深度、腫瘤大小以及淋巴是否轉(zhuǎn)移均無關(guān)(P>0.05),與腫瘤的分化程度有關(guān)(P<0.05)。見表2。

        2.3 Survivin和PCAF在食管癌中表達(dá)的相關(guān)性 Survivin和PCAF在食管癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=0.113,P<0.05),見表3。

        3 討論

        食管癌是危害人類健康的重要慢性非傳染性疾病之一,隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,居民生活習(xí)慣及飲食結(jié)構(gòu)的改變和診療水平的提高,我國食管癌的發(fā)病率和死亡率在城市地區(qū)呈現(xiàn)下降趨勢(shì),但發(fā)病率和死亡率仍處于相當(dāng)高的水平[9],嚴(yán)重威脅居民的生命和健康,給家庭和社會(huì)經(jīng)濟(jì)造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。研究表明食管癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因參與、多階段的復(fù)雜過程,失活的抑癌基因通過參與細(xì)胞的凋亡為異常細(xì)胞提供生存之機(jī),導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,因此食管癌的基因和細(xì)胞凋亡成為研究

        熱點(diǎn)[10]。

        Survivin基因是功能最強(qiáng)的細(xì)胞凋亡抑制因子,它的表達(dá)與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、臨床病理特征及轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)[11-13]。Survivin在腫瘤細(xì)胞中的作用表現(xiàn)為抑制細(xì)胞周期、干擾細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂和血管形成,從而提高腫瘤細(xì)胞的存活和生長(zhǎng)能力,對(duì)腫瘤的診治及預(yù)后具有深遠(yuǎn)的意義[14-16]。本研究發(fā)現(xiàn)在食管癌組織中Survivin陽性表達(dá)率為73.33%,正常組織中為5.00%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),表明Survivin蛋白在正常組織中基本不表達(dá),在食管癌組織過度表達(dá),提示其可能通過直接或間接作用抑制食管癌細(xì)胞的凋亡,通過有絲分裂促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的異常增殖和惡性化而參與食管癌的發(fā)生、發(fā)展與形成[17]。文獻(xiàn)[18]通過RNA干擾技術(shù)開展食管癌與Survivin關(guān)系的研究,發(fā)現(xiàn)干擾后Survivin蛋白的表達(dá)水平較對(duì)照組下調(diào),細(xì)胞活力明顯下降,生長(zhǎng)緩慢,其克隆形成較小,數(shù)量較少,證實(shí)沉默Survivin基因能抑制Eca-109細(xì)胞的增殖,增強(qiáng)Caspases的活性,阻滯細(xì)胞周期的進(jìn)展,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Survivin在食管癌的發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)過程中產(chǎn)生了重要的作用,是一個(gè)潛在預(yù)測(cè)食管癌患者預(yù)后的分子標(biāo)志物。同時(shí)本研究顯示,Survivin高表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤的大小均無關(guān)(P>0.05),而與腫瘤分化程度、侵襲性、TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)(P<0.05),Survivin陽性表達(dá)率隨著食管癌的惡性程度和TNM分期的增加而逐漸增加(P<0.05),與柴小軍等[19]的研究結(jié)果相一致。腫瘤浸潤至深層或有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Survivin蛋白表達(dá)升高,說明Survivin可以抑制食管癌細(xì)胞自身的凋亡過程,使得食管癌惡性程度增強(qiáng),導(dǎo)致食管癌容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。牛朝霞等[20]通過Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí),靶向抑制Survivin基因的表達(dá)能顯著降低干擾組Eca-109細(xì)胞的體外侵襲與遷移能力。因而Survivin表達(dá)與食管癌侵襲、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后的關(guān)系意義重大。Survivin蛋白表達(dá)聯(lián)合食管癌TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移及分化程度等臨床病理特征評(píng)估后發(fā)現(xiàn),Survivin蛋白陰性,TNMⅠ期、腫瘤分化程度高、無淋巴轉(zhuǎn)移者,患者預(yù)后較好,可能與Survivin蛋白表達(dá)缺失,抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的功能喪失,細(xì)胞增殖與凋亡保持平衡,提高了早期患者的生存期。當(dāng)Survivin蛋白陽性時(shí),細(xì)胞惡性程度高、腫瘤浸潤至深層者、TNMⅡ和Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,預(yù)后較差??赡芘cSurvivin表達(dá)后正常的凋亡減緩,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞無限制生長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞的有絲分裂和血管的生成以及腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化,導(dǎo)致了腫瘤的局部浸潤和遠(yuǎn)處遷移,最終患者的生存期下降。通過對(duì)Survivin的表達(dá)與臨床病理特征之間關(guān)系的研究來延緩食管鱗癌的發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移。

        PCAF是組蛋白乙酞化轉(zhuǎn)移酶,在基因表達(dá)調(diào)控過程中起著十分關(guān)鍵的作用,通過調(diào)節(jié)組蛋白和非組蛋白水平而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。在多種人類腫瘤細(xì)胞和組織中表達(dá)下調(diào),其表達(dá)降低或不表達(dá)與腫瘤患者不良預(yù)后密切相關(guān),國內(nèi)外針對(duì)PCAF與腫瘤的發(fā)生進(jìn)行了許多研究,但PCAF與食管癌發(fā)生報(bào)道鮮見。邱衛(wèi)芳等[21]研究發(fā)現(xiàn),在人宮頸癌組織中PCAF的陽性率為42.0%,低于正常組織的88.9%(P<0.05),與腫瘤的分期和病理分級(jí)顯著相關(guān)(P<0.05),與年齡、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度不具有相關(guān)性(P>0.05)。文獻(xiàn)[22]研究發(fā)現(xiàn)PCAF可能對(duì)腸型胃癌的發(fā)生和進(jìn)展有重要的影響,PCAF預(yù)示著患者的預(yù)后,PCAF的陽性率越低,患者的整體生存情況越差。拓航等[7]對(duì)35例肝癌患者隨訪發(fā)現(xiàn),與PCAF陰性表達(dá)組3年生存率22.2%相比,PCAF陽性表達(dá)組術(shù)后生存期明顯延長(zhǎng),3年生存率為52.9%(P<0.05)。本研究選擇90例食管鱗癌的患者為研究對(duì)象,結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCAF在食管癌組織中表達(dá)的陽性率為34.44%,在正常組織中的陽性表達(dá)率為92.50%,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PCAF的表達(dá)與腫瘤的分化程度相關(guān)(P<0.05),與年齡、性別、淋巴是否轉(zhuǎn)移、浸潤程度、大小以及TNM分期不具有相關(guān)性(P>0.05)。

        本研究結(jié)果顯示,Survivin和PCAF在食管癌中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=0.113,P<0.05),提示Survivin和PCAF可能共同參與了食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程,并在局部的浸潤和局部或遠(yuǎn)處的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用。盡管在胃癌和子宮頸癌中均可見Survivin和PCAF的表達(dá)報(bào)道[23-25],但兩者聯(lián)合在食管癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用未見文獻(xiàn)報(bào)道。PCAF是腫瘤抑制基因P53的共激活子,調(diào)節(jié)P53的活性及其蛋白的穩(wěn)定性來使細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡達(dá)到一個(gè)平衡狀態(tài)。文獻(xiàn)[26]研究顯示,在食管癌中P53與Survivin的表達(dá)呈顯著正相關(guān),兩者均在癌組織高表達(dá),與腫瘤分化程度、TNM分期等臨床病理特征無關(guān),只與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Survivin和PCAF是通過P53還是其他的基因在食管癌中發(fā)揮協(xié)同機(jī)制仍有待進(jìn)一步探討。雖然Survivin和PCAF在食管癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征之間關(guān)系以及兩者在食管癌腫瘤生長(zhǎng)、浸潤、轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制尚不明確,但應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)測(cè)定兩者基因蛋白在食管癌組織中的表達(dá),分析其與臨床特征之間的相互關(guān)系及兩者在腫瘤發(fā)生中的相互性。隨著分子生物學(xué)研究的深入,探討Survivin和PCAF蛋白的表達(dá)與食管癌發(fā)生發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系,對(duì)食管癌的早期診斷及預(yù)后判斷提供分子生物學(xué)指標(biāo),給基于基因治療的臨床治療方案提供一個(gè)分子生物學(xué)治療的新靶點(diǎn)具有非常重要的意義。

        參考文獻(xiàn)

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