黃日盛

摘 要：粉葛是甘葛藤的干燥根，粉葛綜合利用價(jià)值日益提高，本實(shí)驗(yàn)對(duì)粉葛快速繁殖體系進(jìn)行了研究，以粉葛頂芽為材料進(jìn)行無(wú)菌系的建立，生根等實(shí)驗(yàn)，探討粉葛組培成苗技術(shù)，獲得無(wú)菌苗生長(zhǎng)健壯，成苗培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基。低濃度的NAA能有效促進(jìn)不定根數(shù)量的增多，為粉葛的繁殖提供重要的研究基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：粉葛;組織培養(yǎng);技術(shù)推廣

目前，粉葛的組織培養(yǎng)工作已有初步進(jìn)展，科研人員通過(guò)不同外植體誘導(dǎo)粉葛愈傷組織培育粉葛再生植株，粉葛已成為食用和藥用植物，粉葛產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)進(jìn)程加快，傳統(tǒng)無(wú)性繁殖方式存在繁殖系數(shù)低、速度慢，且有帶病、帶毒風(fēng)險(xiǎn)等問(wèn)題嚴(yán)重影響我國(guó)粉葛產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，離體培養(yǎng)具有脫除了病毒等優(yōu)點(diǎn)，是粉葛快速繁育的優(yōu)選手段。系統(tǒng)開發(fā)粉葛快速繁殖途徑，繁育大量組培苗，滿足粉葛生產(chǎn)用種，推廣粉葛快速繁育技術(shù)對(duì)粉葛規(guī)?；a(chǎn)具有重要的意義。

一、粉葛組織培苗繁育技術(shù)研究

1.粉葛簡(jiǎn)介。粉葛是豆科葛屬植物，粉葛植物的塊根含黃豆苷元，葛根素等，科研資料報(bào)道有金雀異黃素，葛根皂苷元ABC等。粉葛又稱葛根，藤本，根肥大，可食用，也作藥用，花也可入藥，解酒，用于酒醉。長(zhǎng)江以南大部分省份都有野生分布或栽培。粉葛2014年被國(guó)家衛(wèi)計(jì)委列入藥食同源植物。

葛根是常用中藥，性甘，具有解熱生津，升陽(yáng)止瀉的功用，用于外感發(fā)熱頭痛，消渴，高血壓勁項(xiàng)強(qiáng)痛。粉葛黃酮能改善冠脈，使冠脈血流量明顯增加。也具有一定抗癌等作用。

粉葛塊根加工成葛粉，含多種維生素，膳食纖維，為優(yōu)良淀粉原料，葛粉已成為人們青睞的保健食品。

2.植物組織培養(yǎng)技術(shù)。植物組織培養(yǎng)是植物無(wú)菌培養(yǎng)技術(shù)，是根據(jù)植物的細(xì)胞全能性力量，利用植物的離體器官或細(xì)胞，在無(wú)菌的人工培養(yǎng)基條件下，誘導(dǎo)出愈傷組織，不定根，分化形成完整植株的過(guò)程。

將植物的一部分從母體分離，在無(wú)菌條件下培養(yǎng)發(fā)育成與母體相同的新植物體的技術(shù)。

植物細(xì)胞全能性是組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)，高等植物器官可不斷分割，每個(gè)細(xì)胞具有分裂繁殖的潛能。

利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行快速繁殖時(shí)，植物的根莖葉等可作為外植體進(jìn)行立體培養(yǎng)，通過(guò)器官型，器官發(fā)生型誘導(dǎo)分化產(chǎn)生小植株。

3.組織培養(yǎng)技術(shù)的影響因素組織培養(yǎng)是跨世紀(jì)的生物技術(shù)，同常規(guī)的無(wú)性繁殖方法相比，其具有繁殖速度快，不受季節(jié)限制，經(jīng)濟(jì)效益高，組織培養(yǎng)結(jié)合超低溫保持技術(shù)有效的保存植物種植資源。將植物部分細(xì)胞放在培養(yǎng)基上離體培養(yǎng)，產(chǎn)生出完整小植株是較復(fù)雜的培養(yǎng)過(guò)程。受很多因素影響、制約。

植物組織培養(yǎng)能否成功與選取的外植體基因型，種類，取材時(shí)間及外植體大小等有很大的關(guān)系。培養(yǎng)基是從無(wú)土栽培的營(yíng)養(yǎng)液發(fā)展而來(lái)，人工合成培養(yǎng)基通常包括大量微量元素、支持物等。不同培養(yǎng)基由于其組織成分不同，培養(yǎng)效果有差異。

組織培養(yǎng)中常遇到一些問(wèn)題導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗，如培養(yǎng)中的污染，玻璃化等是組織培養(yǎng)中的難題。

植物組織培養(yǎng)材料多取自室外，帶入培養(yǎng)基會(huì)迅速分生滋長(zhǎng)微生物病菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗，首先要進(jìn)行表面消毒，用流水沖洗，然后進(jìn)行深度消毒，選用合適的消毒劑及消毒劑濃度，才能達(dá)到消毒的目的。

二、粉葛組織培養(yǎng)

1.實(shí)驗(yàn)方法。采用田間當(dāng)年生的枝條頂芽為外植體，培基為MS基本培養(yǎng)基，用0.7%的瓊脂固化。取外植體用自來(lái)水加洗滌劑浸泡30min，轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)內(nèi)，無(wú)菌沖洗3次。取已消毒外植體直接培養(yǎng)MS+NAA0.1mg/L，+6-BA0.2，進(jìn)行無(wú)菌苗培養(yǎng)，30-40d后獲得無(wú)菌苗。

將無(wú)菌苗切下徑長(zhǎng)0.5cm帶芽莖段。將成苗培養(yǎng)獲得幼苗切除愈傷組織后接入根生培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。

2.不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)成苗的影響。在只添有梯度濃度的NAA培基處理中，低濃度NAA促進(jìn)芽的萌發(fā)，苗矮小健壯。NAA濃度達(dá)到0.5以上時(shí)出現(xiàn)生根。分析NAA與6-BA組合能很好的促進(jìn)芽的萌發(fā)。10d后，萌芽發(fā)成小葉，20d后，枝葉伸長(zhǎng)。在NAA/6-BA培養(yǎng)基中的苗明顯增高，莖節(jié)增長(zhǎng)，低濃度NAA與6BA組合促進(jìn)成苗。

在成苗培養(yǎng)中應(yīng)使用低濃度NAA與6BA搭配，6BA濃度不宜超0.3，兩者組合效果優(yōu)于單加NAA。在MS+NAA0.1mg/L+6-BA 0.3mg培養(yǎng)基中做成苗培養(yǎng)，可獲得枝葉茂盛的無(wú)菌苗。

3.不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)粉葛試管苗生根的影響。生根培養(yǎng)基中高濃度的NAA加入，根的生長(zhǎng)狀況，較低濃度NAA促進(jìn)不定根的生長(zhǎng)主根增長(zhǎng)。低濃度的NAA與IBA組合的NAA0.3mg/L+IBA0.3mg/L是粉葛無(wú)菌苗誘導(dǎo)生根適宜培養(yǎng)基條件。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

成苗首先要促進(jìn)芽的萌發(fā)，然后促枝葉的伸長(zhǎng)，讓苗健壯生長(zhǎng)。培養(yǎng)基激素的組合選取是決定植物組織培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵因素。細(xì)胞分裂素可延遲組織衰老，促進(jìn)細(xì)胞的分裂分化，促進(jìn)側(cè)芽生長(zhǎng)，生長(zhǎng)速影響到莖的伸長(zhǎng)，頂端優(yōu)勢(shì)與生根等現(xiàn)象，一般采用較低的生長(zhǎng)素濃度比例，促進(jìn)芽萌發(fā)，莖枝葉旺盛生長(zhǎng)。MS+NAA0.1mg/L+BAO0.3mg/L是粉葛成苗的最好培養(yǎng)基。

根的形成分為根原基生長(zhǎng)與不定根原基形成兩個(gè)階段，沒有添加激素的培養(yǎng)基中沒有根生長(zhǎng)，加入低濃度的NAA與IBA的培養(yǎng)基中，主根根長(zhǎng)增加。

四、粉葛組培苗種植技術(shù)

從主栽品種中選擇農(nóng)藝性狀較好的優(yōu)良單株，進(jìn)行組織培養(yǎng)、繁育組培苗，其組培苗種植表現(xiàn)比當(dāng)?shù)卦耘嗥贩N品質(zhì)有明顯優(yōu)勢(shì)，葛薯塊大，產(chǎn)量高，紡錘形，皮薄，纖維少，無(wú)渣，味甘，口感好。農(nóng)藝性狀優(yōu)點(diǎn)突出，每畝節(jié)省閹根工作量2天。每畝可節(jié)約人工費(fèi)200元。蔓藤柔軟下垂，可適當(dāng)增加種植密度，畝產(chǎn)增600斤，單項(xiàng)增收約900元，經(jīng)濟(jì)效益可觀。粉葛組培苗比當(dāng)?shù)卦耘嗥贩N具有明顯優(yōu)勢(shì)，因此生產(chǎn)用種不斷增長(zhǎng)，種植粉葛組培苗面積不斷擴(kuò)大。

粉葛組培苗種植管理，選擇向陽(yáng)，土層深厚的紅壤土種植，單行種植，平地按1.5m開溝起壟，溝深、寬各50cm以上，雙行雙株種植，平地按3m開溝起壟，溝深、寬各50cm以上。每年2月中旬至4月下旬種植，畝種植600-800株。

移植5天后可適當(dāng)稀釋人畜糞水定根，發(fā)現(xiàn)死苗及時(shí)補(bǔ)栽，兩行距間插1.8m的竹籬，將兩條粗苗引上竹籬，并將距離地面1.2m以下的腋芽摘除，主莖長(zhǎng)至1.5m高時(shí)，打頂控高，進(jìn)行露根閹根，株保留2—3條根作為長(zhǎng)薯根，其余割除。

肥水管理是保證粉葛高產(chǎn)的關(guān)鍵，種后20天首次追肥，此后1月穴施三元復(fù)合肥25-50g，晴天要沖水淋施，6月份后，葛根進(jìn)入膨大高峰期。每穴施復(fù)合肥100g，20天施放一次，粉葛耐旱，切勿過(guò)濕。10月份后以保葉為主，連噴3次高鉀葉面肥。

采收：葛葉轉(zhuǎn)黃或落葉，時(shí)間12月至次年2月之間即可進(jìn)行采收、出售或貯藏保鮮。

五、結(jié)語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)取芽莖為外植體，選擇適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和培養(yǎng)基，初步建立了粉葛試管成苗發(fā)生體系，試管苗培養(yǎng)基為MS+NAA0.1mg/L+-BA0.3mg/L，用低濃度的NAA與6-BA有利于試管苗的芽萌芽，試管苗生根培養(yǎng)基為MS+NAA0.3mg/L+IBA0.3mg/L。推廣粉葛組培苗種植技術(shù)，促進(jìn)粉葛產(chǎn)業(yè)發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1]華曉琴，劉高亮，張慶輝，張魯，章婷，鐘宇.大巴山粉葛組織培養(yǎng)技術(shù)[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，28（07）：1108-1114.

[2]朱丹青. 整枝和修根對(duì)粉葛產(chǎn)量和品質(zhì)影響的研究[D].廣西大學(xué)，2014.